一种鲜、干金钱白花蛇的分子鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种鲜、干金钱白花蛇的分子鉴别方法，提取待测样品的基因组DNA，用提取的基因组DNA作为模板，利用特异引物和探针进行荧光定量PCR反应，若荧光定量PCR检测结果呈阳性反应，出现特异性的S形荧光扩增曲线且Cq值为11.72‑30.74的即为金钱白花蛇；若荧光定量PCR检测结果为阴性反应，未见特异性的荧光扩增曲线或出现荧光值增长且Cq值大于30.74的即为混伪品或金钱白花蛇含量极低。荧光定量PCR检测结果呈阳性反应，则计算金钱白花蛇的拷贝数，根据拷贝数差异鉴别鲜、干金钱白花蛇。

【技术实现步骤摘要】
一种鲜、干金钱白花蛇的分子鉴别方法
本专利技术属于生物医药
，涉及一种鲜、干金钱白花蛇的分子鉴别方法。
技术介绍
鲜药的应用在中国传统医学上有着悠久的历史，是中医中药的重要组成部分。鲜药能最大限度的保留活性成分而发挥着独特的疗效，广受中国古代医家的青睐，在中医药古籍中记载着大量鲜药的应用，如《本草纲目》中就记载了1100多条应用鲜药的附方，为后人留下了宝贵的临床经验。现代化学及药理研究发现，鲜、干药在物质基础和药理活性上存在着差异，在这个基础上，一些鲜药制剂得到了开发。国内外均有鲜药制剂，国内的鲜药制剂的研究目前处于起步阶段，已经开发出来的鲜药制剂有金龙胶囊、金水鲜胶囊、鲜益母草胶囊等。鲜药制剂在得到开发的同时，其在质量控制方面还存在一定缺陷，其中之一就是投料中鲜、干药材的鉴别问题。相对于鲜药，干药在储存、运输等方面更方便，且成本更低。可能存在着以鲜药入药为噱头，实际上以干药入药的现象。而且药材市场混乱，出现的伪品及混伪品众多，质量问题严重。目前，中药及中成药常用的质量控制方法主要有显微法、光谱法、色谱法等，然而这类方法主要应用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金钱白花蛇的分子鉴别方法，其特征在于，提取待测样品的基因组DNA，用提取的基因组DNA作为模板，利用特异引物和探针进行荧光定量PCR反应；若荧光定量PCR检测结果呈阳性反应，出现特异性的S形荧光扩增曲线，Cq值为11.72-30.74的即为金钱白花蛇；若荧光定量PCR检测结果为阴性反应，未见特异性的荧光扩增曲线或出现荧光值增长且Cq值大于30.74的即为混伪品或金钱白花蛇含量极低。/n

【技术特征摘要】
1.一种金钱白花蛇的分子鉴别方法，其特征在于，提取待测样品的基因组DNA，用提取的基因组DNA作为模板，利用特异引物和探针进行荧光定量PCR反应；若荧光定量PCR检测结果呈阳性反应，出现特异性的S形荧光扩增曲线，Cq值为11.72-30.74的即为金钱白花蛇；若荧光定量PCR检测结果为阴性反应，未见特异性的荧光扩增曲线或出现荧光值增长且Cq值大于30.74的即为混伪品或金钱白花蛇含量极低。


2.根据权利要求1所述的金钱白花蛇的分子鉴别方法，其特征在于，所述荧光定量PCR反应的扩增体系为：DNA模板2μL；上下游引物各0.4μL，终浓度为200nmol/L；探针Bmpro0.2uL，终浓度为100nmol/L；BesterqPCRMasterMix10μL；去离子水7μL，反应总体积为20μL。


3.根据权利要求1所述的金钱白花蛇的分子鉴别方法，其特征在于，qPCR扩增程序为：95℃预变性120s；95℃变性10s，50℃退火30s，72℃延伸30s，共40个循环。


4.根据权利要求1-3任一所述的金钱白花蛇的分子鉴别方法，其特征在于，所述特异引物为：
引物Bmforw：5’-ATCGGAGCCTGTCTAAGC-3’，SEQIDNO：1
引物Bmrev：5’-GTTCAACCTGTGCCGGCA-3’，SEQIDNO：2
所述探针为：
探针Bmpro：5’-CGCATAGAGTTAACCCAACCCGGCTCGC-3’，SEQIDNO：3
探针Bmpro由荧光基团和荧光淬灭基团修饰；其中，5’端修饰荧光基团6-FAM，3’端修饰荧光淬灭基团BHQ1。


5.一种鲜、干金钱白花蛇的分子鉴别方法，其特征在于，提取待测样品的基因组DNA，用提取的基因组DNA作为模板，利用特异引物和探针进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：晁志，李婵，叶浩婷，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44