p38γ在制备胰腺癌预后诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了p38γ在制备胰腺癌预后诊断试剂中的应用。发明专利技术人研究发现胰腺癌患者癌组织中p38γ的表达显著高于正常组织，其表达水平随疾病进展逐渐升高，且其高表达与患者不良预后相关。构建胰腺导管腺癌动物模型K‑Ras

The application of p38 \u03b3 in the preparation of prognostic diagnostic reagents for pancreatic cancer

【技术实现步骤摘要】
p38γ在制备胰腺癌预后诊断试剂中的应用
本专利技术涉及一种用于胰腺癌预后的诊断试剂。
技术介绍
癌症严重威胁人们的健康，随着医学的发展，越来越多的癌症已经具有了较好的治疗效果。在众多的癌症中，胰腺癌被称为“癌中之王”，是一种尚未攻克的癌症。现有技术中，胰腺癌从预防、诊断、治疗到预后效果都不理想。《2015年中国癌症统计》数据显示，我国胰腺癌占总体恶性肿瘤发病率和死亡率的第9位和第6位，并且呈快速上升趋势。约3/4的胰腺癌患者在确诊1年后死亡，5年生存率仅为6％，是名副其实的癌中之王。胰腺癌发病过程不明，其自然病程约为20年，在此过程中，部分正常胰腺细胞，在吸烟、饮酒、炎性反应等环境因素的刺激下，在易感遗传背景基础上不断积累突变等分子事件，并逐步获得了克服衰老、掠夺营养和无限繁殖的能力，具备了所谓的“干性”，最终导致胰腺癌的发生。其中的少部分关键变异作为主要因子，驱动着胰腺细胞经历“腺泡导管化生”“上皮内瘤变”“上皮间质转化”“远隔转移”等癌变过程中的重要事件。如何有效确定胰腺癌的预后，对于胰腺癌的治疗有着非常重要的影响。p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)通路是MAPK介导信号通路的重要分支，参与到炎症、细胞生长、细胞分化、细胞周期和细胞死亡等多个生理过程。p38γ(MAPK12)是MAPK家族唯一C-末端有PDZ结合基序(PDZ-bindingmotif，PBM)的分子，可与蛋白的PDZ结构域特异性结合，活化交互作用蛋白，促进肿瘤的生长及侵袭和转移。p38γ与Ras的转化有关，一方面K-Ras可上调p38γ的表达，另一方面p38γ与c-Jun/PTPH1的PDZ域结合，上调AP1的活性，促进K-Ras突变结肠癌细胞的增殖和侵袭。还可p38γ还可直接磷酸化Hsp90/S595,DNATopoIia/S1542,β-catenin/S605,Tau/T181(S202/T205,S396/S404,S422)等蛋白。p38γ表达亦可诱导肿瘤细胞TNFα、IL-1β和IL6的分泌增加，促进炎症相关肿瘤的发生。谢学海,田孝东,马永簌等(p38α及β亚型对胰腺癌细胞生物学行为的影响[J].中华实验外科杂志,2019,36(2):261-263.)的研究结果表明p384个亚型在7种胰腺癌细胞株中有不同水平表达，其中p38α在7种胰腺癌细胞株中均显著表达；在ASPC、Colo357和Panc-1细胞株中，p38β表达水平与p38α相当；p38γ在7种胰腺癌细胞株中虽有表达，但水平较低。选择性抑制p38α后,MiaPaca-2和Panc-1细胞增殖、运动和侵袭能力显著下降,且裸鼠体内成瘤实验可见肿瘤体积显著增加.选择性抑制p38β后,可以观察到细胞生长和增殖变慢,但未见运动和侵袭能力的变化.体内成瘤实验中,MiaPaca-2两个下调p38β细胞克隆成瘤率分别为18.3％和50.0％,较野生型和空质粒转染组显著下降,且肿瘤体积显著减小(P＜0.05)；Panc-1两个下调p38β细胞克隆成瘤率为25.0％和12.5％,较野生型和空质粒转染组显著下降(P＜0.05)。现有研究中，p38γ与胰腺癌发生发展及预后的关系尚未明确。虽然与肿瘤相关的分子标志很多，但是并非所有的分子标志都可以作为预后诊断标志使用。肿瘤标志物是指特征性存在于恶性肿瘤的癌细胞或由恶性肿瘤细胞异常而产生的物质。一般而言，理想的肿瘤标记物应满足以下条件，包括可应用于肿瘤诊断、肿瘤治疗监测、反应预后、预测复发、对确定治疗反应有用等等。正常胰腺组织几乎检测不到p38γ的表达，其在胰腺癌组织中是否表达升高、其高表达是否与患者预后或者转移相关均未知。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供p38γ在制备胰腺癌预后诊断试剂中的应用。本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供：定量p38γ蛋白或基因的试剂在制备确定胰腺癌预后试剂中的应用。在一些实例中，定量p38γ的试剂选自：ELISA试剂、免疫组化试剂、定量PCR试剂。在一些实例中，p38γ蛋白或基因的表达量高于正常人或正常组织，判定为患癌风险高或预后差。在一些实例中，所述定量p38γ蛋白或基因试剂的检测样本为胰腺癌样本组织或胰腺癌患者血清。在一些实例中，所述ELISA或者定量PCR试剂的检测样本为胰腺癌患者血清。在一些实例中，所述免疫组化试剂的检测样本为胰腺癌样本组织及癌旁组织。本专利技术的第二个方面，提供：一种确定胰腺癌预后的系统，包括：定量p38γ蛋白或基因的装置：用于确定样本中p38γ蛋白或基因的表达量；风险分析装置：基于所述p38γ蛋白或基因的表达量确定胰腺癌预后。在一些实例中，定量p38γ蛋白或基因的装置选自：ELISA装置、免疫组化装置、定量PCR装置。在一些实例中，定量p38γ蛋白或基因的装置的检测样本为胰腺癌样本组织或胰腺癌患者血清。在一些实例中，p38γ蛋白或基因的表达量高于正常人或正常组织，判定为患癌风险高或预后差。本专利技术的有益效果是：专利技术人研究发现胰腺癌患者癌组织中p38γ的表达显著高于正常组织，其表达水平随疾病进展逐渐升高，且其高表达与患者不良预后相关。构建胰腺导管腺癌动物模型K-RasG12D-p53R172H-Pdx-Cre(KPC)作为研究的对照组。应用Cre/LoxP技术构建胰腺导管上皮细胞p38γ敲除的胰腺癌动物模型(KPC-p38γ-KO)作为实验组。发现p38γ敲除可显著减小肿瘤体积并延长KPC小鼠的生存期。KPC组小鼠的中位生存时间是160天，而截至统计时间大部分KPC-p38γ-KO小鼠仍存活，中位生存时间>300天。进一步的实验结果表明p38γ高表达可促进胰腺癌的侵袭和转移。因此，p38γ可以很好地确定胰腺癌的风险或预后，为胰腺癌的治疗提供了一定地指导。附图说明图1是p38γ在胰腺癌病人癌组织中的表达与疾病进展的情况；图2是p38γ与预后的相关性分析结果；图3是p38γ敲除转基因小鼠模型的构建流程及结果验证；图4是p38γ敲除对胰腺癌转基因小鼠的影响；图5是p38γ敲除对胰腺癌发生及进展的影响；图6是p38γ对胰腺癌转移的影响；图7是p38γ对细胞增殖的影响；图8和图9是p38γ对细胞侵袭和转移的影响。具体实施方式下面结合实验，进一步说明本专利技术的技术方案。p38γ在胰腺癌病人癌组织中的表达与预后首先专利技术人检测了49例PDAC患者肿瘤组织p38γ的表达情况，发现肿瘤组织p38γ表达显著高于正常组织，且随胰腺癌的病程进展p38γ表达水平也逐渐升高。后续专利技术人回顾性分析80例胰腺导管腺癌组织p38γ的表达与疾病进展和生存预后的关系，发现p38γ高表达病人的总生存期显著低于低表达病人。免疫组化方法检测石蜡组织切片p38γ表达(1)石本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.定量p38γ蛋白或基因的试剂在制备确定胰腺癌预后试剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.定量p38γ蛋白或基因的试剂在制备确定胰腺癌预后试剂中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：定量p38γ的试剂选自：ELISA试剂、免疫组化试剂、定量PCR试剂。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：p38γ蛋白或基因的表达量高于正常人或正常组织，判定为患癌风险高或预后差。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述定量p38γ蛋白或基因试剂的检测样本为胰腺癌样本组织或胰腺癌患者血清。


5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述ELISA或者定量PCR试剂的检测样本为胰腺癌患者血清。


6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芳，符立梧，
申请(专利权)人：中山大学肿瘤防治中心中山大学附属肿瘤医院，中山大学肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44