一种与慢性稳定性心绞痛治疗相关的miRNA及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种与慢性稳定性心绞痛治疗相关的miRNA，所述miRNA包含如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。本发明专利技术提供的miRNA序列完善了现有miRNA数据库，帮助进一步了解药物治疗慢性稳定性心绞痛的靶点，可以用于针对该类miRNA的慢性稳定性心绞痛靶点的药物开发，在心绞痛、特别是慢性稳定性心绞痛的治疗领域具有重要的应用价值。

MiRNA and its application in the treatment of chronic stable angina

【技术实现步骤摘要】
一种与慢性稳定性心绞痛治疗相关的miRNA及其应用
本专利技术属于医学分子生物学领域，具体而言，本专利技术涉及一种新发现的与慢性稳定性心绞痛治疗相关的循环miRNA。
技术介绍
冠心病已经成为导致人类死亡的主要病因(MozaffarianD等人，Circulation2015；131:e29-322)。慢性稳定性心绞痛是冠心病的最常见类型，近50％的冠心病患者均有慢性稳定性心绞痛的表现。miRNA(微小RNA)是一类在进化上高度保守的单链、非编码小分子RNA(18～22nt)，在转录后水平负性调控靶基因的表达。研究表明，miRNA参与调节体内许多生理和病理过程，与心血管疾病、糖尿病、肿瘤等多种疾病的发病或预后密切相关(HeneghanHM等人，JClinEndocrinolMetab,2011,96:E846-850)；并且在不同的疾病状态或病理刺激下，循环miRNA的表达谱存在差异。同时，miRNA在血浆/血清中的稳定性好，具有可反复冻融8次、室温可放置24h，耐强酸、强碱等作为理想的疾病标志物所需的特征。miRNA调节异常与冠心病的发展过程有很大相关性，将异常水平恢复至正常水平在一定程度上可减少冠心病的发生。研究表明，miRNA广泛参与冠心病发生发展中血管相关性细胞的分化、迁移、增殖和凋亡过程，miRNA相关的治疗可能成为最有潜力的冠心病临床治疗方法(DangwalS等人，AnnuRevPharmacolToxicol,2014,54:185-203)。自90年代初起LEE等人首次发现来源于秀丽隐杆线虫的miRNA，距目前为止，发现的miRNA已经超过了1000多种，并且已经测到了900余种成熟miRNA的基因序列，其中与心血管疾病的诊断与治疗相关的miRNA分型以及子分型已经达到20多种，如mi-RNA1、mi-RNA208、mi-RNA499、mi-RNA133、mi-RNA21、mi-RNA142-5p、mi-RNA146a、mi-RNA155p、mi-RNA29、mi-RNA150等(李欣峰，金基永，综述，吉林医学，2017,38(3)：556-559)。这些大多与心血管疾病尤其是急性心梗的早期诊断以及冠心病的预后判断有关，仅有mi-RNA27，mi-RNA92a，mi-RNA126，mi-RNA133，mi-RNA143，mi-RNA145有报告与冠心病治疗相关(李欣峰，金基永，综述，吉林医学，2017,38(3)：556-559；田轶魁等人，中华实验外科杂志，2012,29(2):270-272；HigashiK等人，AmJPhysiolHeartCircPhysiol.2015,309(11):H1813-1826；ZhaoW等人，BiomedResInt,2015,2015:531740)。然而，到目前为止，虽然很多动物实验证明方法可行，但还没有专门针对人体mi-RNA的治疗方案。由此可见，在慢性稳定性心绞痛的治疗过程中，发现治疗组中特异性的新miRNA序列可能是未来药物治疗慢性稳定性心绞痛的新的靶点。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术通过Illumina深度测序仪比较丹红注射液与安慰剂治疗慢性稳定性心绞痛前后的差异miRNA，使用miRDeep2(MR等人，NucleicAcidsRes.2012；40(1):37-52)预测出新的miRNA序列，为慢性稳定性心绞痛提供新的治疗靶点或治疗手段。因此，本专利技术的一个目的是提供所发现的新的miRNA序列。本专利技术的另一个目的是提供该新的miRNA序列在治疗慢性稳定性心绞痛中的应用。本专利技术的技术方案如下。一方面，本专利技术提供一种与慢性稳定性心绞痛治疗相关的miRNA，所述miRNA包含如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示的核苷酸序列。SEQIDNO:1(本文命名为novel_mir_56)：5’-UGGGCGGCCACUUGACAUCC-3’SEQIDNO:2(本文命名为novel_mir_82)：5’-UGGAGCUGGACCAGGAGAGG-3’SEQIDNO:3(本文命名为novel_mir_240)：5’-GAGAAUAUGGGAGUCUGUGGCU-3’SEQIDNO:4(本文命名为novel_mir_429)：5’-CAGCCUCUGCAGCUCCCCGGCC-3’优选地，本专利技术提供的miRNA的核苷酸序列如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示。另一方面，本专利技术提供一种用于检测本文所述miRNA或所述miRNA的靶基因的试剂。本专利技术提供的miRNA或其靶基因可通过miRNA常规检测方法进行检测，例如测序、NorthernBlot、微阵列芯片、微球、实时荧光定量PCR等技术。其中，本专利技术提供的试剂可定性或定量检测miRNA或其靶基因。本文所述miRNA中的一至四种可单独或组合进行检测。再一方面，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括本文所述的用于检测所述miRNA或其靶基因的试剂。所述试剂盒可包括分别检测本文所述miRNA中的一至四种或其靶基因的一个或多个试剂。还一方面，本专利技术还提供一种药物，所述药物用于靶向本文所述miRNA或所述miRNA的靶基因。另一方面，本专利技术提供本文所述miRNA在制备用于预测慢性稳定性心绞痛治疗有效性的试剂中的应用。本文所述miRNA中的一至四种可单独或组合使用。又一方面，本专利技术提供所述miRNA在制备用于治疗慢性稳定性心绞痛的药物中的应用。本文所述miRNA中的一至四种可单独或组合使用。具体而言，本专利技术通过如下过程获得与慢性稳定性心绞痛治疗相关的新的miRNA。(1)循环mi-RNA来源及采集：患者给与药物或安慰剂治疗，在入组时、治疗结束、随访结束时，临床使用EDTA抗凝的采血管分别采集患者血液5-7ml，摇匀后，第一时间使用血液细胞总RNA提取试剂盒进行总RNA的提取，将提取完毕的总RNA保存于-80℃等待送样。(2)RNA测序：RNA纯化后，经逆转录，PCR扩增，采用Illumina深度测序仪对提取的总RNA进行小RNA测序，使用Bowtie2工具软件比对获得的miRNA序列信息与参考的基因组和其他小RNA数据库的序列信息，这些小RNA标签可能被比对到多个已知的RNA种类中，按照“miRNA>piRNA>snoRNA>Rfam>其他sRNA”的优先原则对获得的小RNA进行标注。(3)新的miRNA预测：采用常用的miRDeep2软件对新发现的miRNA命名，按照发现的顺序命名。(4)确定与慢性稳定性心绞痛治疗相关的差异新mi-RNA：采用TPM(TranscriptsPerKilobaseMillion)算法对小RNA表达量进行计算，使用DESeq2比较计算出两组差异的miRNA。进一步使用R软件(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与慢性稳定性心绞痛治疗相关的miRNA，所述miRNA包含如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种与慢性稳定性心绞痛治疗相关的miRNA，所述miRNA包含如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的miRNA，其特征在于，所述miRNA的核苷酸序列如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示。


3.一种用于检测如权利要求1或2所述miRNA或所述miRNA的靶基因的试剂。


4.根据权利要求3所述的试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：王忠，刘骏，于亚南，王益民，南景一，郭剑，
申请(专利权)人：山东丹红制药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37