本发明专利技术提供了一株分离自人类直肠癌肿瘤组织的具核梭杆菌动物亚种菌株THCT5A4，分类命名为Fusobacterium nucleatum subsp.animalis THCT5A4，其保藏编号为CCTCC NO：M 2019366，保藏日期为2019年05月17日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，其16SrRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术提供了该具核梭杆菌动物亚种菌株的分离方法。结直肠癌细胞系与THCT5A4共培养的结果说明THCT5A4可显著促进结直肠癌细胞增殖，因此THCT5A4可为结直肠癌的研究提供多样性的体外或体内模拟肠道环境的实验条件，还可以构建结直肠癌疾病模型来筛选治疗结直肠癌的药物。
An animal subspecies of Fusobacterium nucleatum and its application
【技术实现步骤摘要】
一株具核梭杆菌动物亚种菌株及其应用
本专利技术涉及具核梭杆菌动物亚种领域，具体涉及一株具核梭杆菌动物亚种菌株及其应用。
技术介绍
结直肠癌是临床常见恶性肿瘤。世界卫生组织据2012年全球癌症病例数据指出，全部恶性肿瘤中，结直肠癌发病率在全球女性中高居第二位，男性中居第三位；总体死亡率居癌症死亡原因第四位。研究发现肠道菌群失调与结直肠癌的发生发展具有相关性。一些细菌，如牛链球菌、幽门螺旋杆菌、脆弱拟杆菌、粪肠球菌、败毒梭菌、具核梭杆菌、大肠杆菌等，都被发现与结直肠癌的发生发展呈现显著的相关性。其中，具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum)被认为是一种重要的“促癌菌”。具核梭杆菌是人类共生菌，为革兰阴性专性厌氧菌，通常定植在口腔中；同时也是一种条件致病菌，参与牙周疾病的炎症反应，常在龈下菌斑中分离得到，是在牙周病中起主导作用的微生物。而近期研究发现结直肠癌患者的肿瘤组织及粪便中，具核梭杆菌的丰度显著升高，其可经TLR4上调NF-κB和miR-21，促进结直肠癌细胞增殖和癌症发展，亦有研究发现其通过激活肿瘤细胞自噬而导致结直肠癌化疗耐药。目前普遍用于结直肠癌研究的具核梭杆菌菌株为ATCC25586和ATCC23726，但是它们并非来自人类肿瘤组织，而是分离自口腔(ATCC25586)或阴道(ATCC23726)。此外，这两株菌属于具核梭杆菌的具核亚种(F.nucleatumsubsp.nucleatum)，但已有研究指出在结直肠癌患者肠道的具核梭杆菌中丰度占优的是动物亚种(F.nucleatumsubsp.animalis)。因此，目前用于结直肠癌研究的菌株可能无法反映肠道中具核梭杆菌的实际生物学特性。而结直肠癌肿瘤中分离培养的具核梭杆菌，尤其是动物亚种，鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一株具核梭杆菌动物亚种菌株及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面是提供一株分离自人类直肠癌肿瘤组织的具核梭杆菌动物亚种菌株THCT5A4，该菌株的16SrRNA基因序列如下所示：>16S_rRNA_geneTHCT5A4[CCTCCM2019366]AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGACAGAATGCTTAACACATGCAAGTCAACTTGAATTTGGGTTTTTAACTTAGATTTGGGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTAAAGAACTTGCCTCACAGCTAGGGACAACATTTAGAAATGAATGCTAATACCTGATATTATGATTTTAAGGCATCTTAGAATTATGAAAGCTATATGCACTGTGAGAGAGCTTTGCGTCCCATTAGCTAGTTGGAGAGGTAACAGCTCACCAAGGCGATGATGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGAACGGCCACAAGGGGACTGAGACACGGCCCTTACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGACCGGGAGTCTGATCCAGCAATTCTGTGTGCACGATGAAGTTTTTCGGAATGTAAAGTGCTTTCAGTTGGGAAGAAAGAAATGACGGTACCAACAGAAGAAGTGACGGCTAAATACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTATGTCACGAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGCGTCTAGGTGGTTATGTAAGTCTGATGTGAAAATGCAGGGCTCAACTCTGTATTGCGTTGGAAACTGTATAACTAGAGTACTGGAGAGGTAAGCGGAACTACAAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTTGTAGGAATGCCGATGGGGAAGCCAGCTTACTGGACAGATACTGACGCTAAAGCGCGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGATTACTAGGTGTTGGGGGTCGAACCTCAGCGCCCAAGCAAACGCGATAAGTAATCCGCCTGGGGAGTACGTACGCAAGTATGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGAGGAACCTTACCAGCGTTTGACATCTTAGGAATGAGATAGAGATATTTCAGTGTCCCTTCGGGGAAACCTAAAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTTTCGTATGTTACCATCATTAAGTTGGGGACTCATGCGATACTGCCTACGATGAGTAGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATACGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGTAGAACAGAGAGTTGCAAAGCCGTGAGGTGAAGCTAATCTCAGAAAACTATTCTTAGTTCGGATTGTACTCTGCAACTCGAGTACATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGCAATGTCGCGGTGAATACGTTCTCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTGGTTGCACCTGAAGTAGCAGGCCTAACCGTAAGGAGGGATGCTCCGAGGGTGTGATTAGCGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTATCCGTACGGGAACGTGCGGATGGATCACCT(SEQIDNO:1)。进一步地，该菌株分类命名为Fusobacteriumnucleatumsubsp.animalisTHCT5A4，其保藏编号为CCTCCNO：M2019366，保藏日期为2019年05月17日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为中国武汉市武汉大学。进一步地，该菌株在哥伦比亚培养基上培养7天后，形成相对较小、圆形、边缘不规则、半透明白色菌落。进一步地，该菌株经革兰染色后镜下呈红色、梭杆状，多呈线性排布。本专利技术的第二方面是提供一种上述菌株的分离方法，具体步骤如下：步骤一，从直肠癌手术切除标本上取1-2mm3肿瘤组织块，置于无菌管中，在厌氧条件下，4℃转运、保存；步骤二，4小时内进行细菌分离操作，将组织块置于500μL培养基中，迅速机械打碎，使用同一培养基梯度稀释100倍，取100μL稀释液涂布于哥伦比亚血平板上，37℃厌氧培养48小时；步骤三，从平板上挑取单菌落在哥伦比亚血平板上划线稀释，37℃厌氧培养48小时，从中挑取单菌落重复以上步骤，分离纯化菌株；步骤四，将再次获得的单菌落在哥伦比亚血平板上涂布扩培，37℃厌氧培养48小本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株分离自人类直肠癌肿瘤组织的具核梭杆菌动物亚种菌株，其特征在于，所述菌株的16SrRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一株分离自人类直肠癌肿瘤组织的具核梭杆菌动物亚种菌株，其特征在于，所述菌株的16SrRNA基因序列如SEQIDNO:1所示。
2.根据权利要求1所述的具核梭杆菌动物亚种菌株，其特征在于，所述菌株为THCT5A4，分类命名为Fusobacteriumnucleatumsubsp.animalisTHCT5A4，其保藏编号为CCTCCNO：M2019366，保藏日期为2019年05月17日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。
3.根据权利要求1所述的具核梭杆菌动物亚种菌株，其特征在于，所述菌株在哥伦比亚培养基上培养7天后，形成相对较小、圆形、边缘不规则、半透明白色菌落。
4.根据权利要求1所述的具核梭杆菌动物亚种菌株，其特征在于，所述菌株经革兰染色后镜下呈红色、梭杆状，多呈线性排布。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的具核梭杆菌动物亚种菌株的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，从直肠...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦环龙，蔚青，毕德玺，李豪，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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