一种疣荔枝螺多糖的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种疣荔枝螺多糖的制备方法及其应用，以新鲜疣荔枝螺(Thais clavigera Kuster)为起始材料，经水煮，脱壳取肉，真空冷冻干燥处理过后，以碱水提取，乙醇沉淀，蛋白酶酶解，大孔树脂脱色，超滤后获得的已除去蛋白和色素，分子量大于10kD的精多糖组分。本发明专利技术制备的疣荔枝螺多糖具有显著的抗乙肝活性，能显著降低血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量，对保肝护肝具有重要作用。

Preparation and application of Polysaccharide from Litchi verrucosa

【技术实现步骤摘要】
一种疣荔枝螺多糖的制备方法及其应用
本专利技术属于医药
，具体涉及一种疣荔枝螺多糖的制备方法及其应用。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)是一种典型的噬肝性DNA病毒，慢性感染乙肝病毒会发展成为肝纤维化、肝硬化、肝功能代偿不全，乃至肝癌。乙型肝炎是由乙肝病毒(HBV)感染引起的慢性坏死性疾病，已成为全球主要的公共健康问题，其所致的肝脏恶性肿瘤居恶性肿瘤第五位。抑制或者杀灭乙肝病毒对于乙肝治疗有着极其重要的作用。目前临床用于慢性乙肝病毒治疗的药物分为两类：一类是免疫调节剂，其应答率低且副作用大；另一类是核苷酸类似物，其易积累耐药性且疗程漫长，需要终身治疗，因此研发新的安全有效的抗HBV药物是当务之急。现研究证明，多糖因具有优异的抗氧化、清除自由基等作用，且具有高效、低毒、高生物利用率的特点，在预防和治疗由自由基引起的疾病如肿瘤、炎症等方面显示出独特的优越性，而且在提高机体免疫力方面有重要作用。目前，已有研究表明猪苓多糖、螺旋藻多糖、海藻硫酸多糖等多糖提取物有较好的抗HBV活性。疣荔枝螺又称苦螺、辣螺，是一种在闽南地区非常受欢迎的可食用软体动物，民间有食用该海螺达到保肝护肝目的的习惯，亦有食用该海螺成功将乙肝转阴的案例。现代医学研究表明，该海螺有较好的抗炎作用，但是在抗乙肝病毒及保肝护肝方面的研究成果还比较少，迄今为止，尚无相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种疣荔枝螺多糖的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述疣荔枝螺多糖的应用。本专利技术的技术方案如下：一种疣荔枝螺多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)将疣荔枝螺粉末用正己烷进行脱脂处理，获得脱脂疣荔枝螺粉末；(2)将上述脱脂疣荔枝螺粉末与浓度为0.8-1.2wt％的氢氧化钠溶液混合后，于70-80℃浸提2-3次，每次1-2h，再经固液分离，获得疣荔枝螺水提取液；(3)将上述疣荔枝螺水提取液调pH至中性后，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，得到浓缩疣荔枝螺水提取液；(4)将上述浓缩疣荔枝螺水提取液与无水乙醇混合后，室温静置至沉淀出现，经离心和过滤获得第一沉淀；(5)将上述第一沉淀进行冷冻干燥后复溶于蒸馏水，经离心和过滤以除去水不溶物，获得第一滤液；(6)将上述第一滤液与无水乙醇混合后，室温静置至沉淀出现，经离心和过滤获得第二沉淀；(7)将上述第二沉淀进行冷冻干燥，得到第一疣荔枝螺粗多糖；(8)将上述第一疣荔枝螺粗多糖溶于蒸馏水后，加入胰蛋白酶或木瓜蛋白酶进行酶解，获得酶解液；(9)在上述酶解液中加入Sevage试剂，充分搅拌混匀，离心除去不容物，收集上层液，然后以上层液代替上述酶解液重复该步骤直至无明显沉淀，获得上清液；(10)将上述上清液浓缩冷冻干燥，得到第二疣荔枝螺粗多糖；(11)将上述第二疣荔枝螺粗多糖溶于蒸馏水中，经大孔树脂吸附脱色，然后经10kD超滤管离心，收集该10kD超滤管上层的液体，对该液体进行浓缩冷冻干燥，即得所述疣荔枝螺多糖。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述疣荔枝螺粉末的制备方法包括：将大小均一的新鲜的疣荔枝螺洗净去除泥沙后，置于清水中加热煮沸3-5min，凉水迅速冷却，及时挑出可食用肉质部位，其余部位弃置；将该可食用肉质部位置于冰箱中冷冻至少24h，然后迅速取出放入真空冷冻干燥箱中24-48h直至完全干燥，接着置于中药粉碎机中粉碎，过75-85目筛网，即得。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(1)中的脱脂疣荔枝螺粉末与氢氧化钠溶液的料液比为1∶8-12。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(7)中的酶解的条件为：酶用量为3-5％，时间为1.8-2.2h，温度为58-61℃，pH＝7.4-7.6。本专利技术的另一技术方案如下：上述制备方法制备的疣荔枝螺多糖在制备防治乙型病毒性肝炎药物中的应用。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述防治乙型病毒性肝炎药物的剂型为注射制剂或口服制剂。本专利技术的再一技术方案如下：上述制备方法制备的疣荔枝螺多糖在制备保肝护肝的保健品中的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术以新鲜疣荔枝螺(ThaisclavigeraKuster)为起始材料，经水煮，脱壳取肉，真空冷冻干燥处理过后，以碱水提取，乙醇沉淀，蛋白酶酶解，大孔树脂脱色，超滤后获得的已除去蛋白和色素，分子量大于10kD的精多糖组分，其具有显著的抗乙肝活性，能显著降低血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量，对保肝护肝具有重要作用。附图说明图1为本专利技术实施例1中疣荔枝螺多糖对HBV转基因小鼠肝脏病理变化外观的影响。图2为本专利技术实施例1中疣荔枝螺多糖对HBV转基因小鼠肝脏重量的影响。图3为本专利技术实施例1中疣荔枝螺多糖对HBV转基因小鼠作用后的肝脏组织H.E染色。图4为本专利技术实施例1中疣荔枝螺多糖对HBV转基因小鼠肝脏功能指标AST、ALT的影响。图5为本专利技术实施例1中疣荔枝螺多糖对HBV转基因小鼠血清指标HBsAg、HBeAGg和HBVDNA的影响。图6为本专利技术实施例1中疣荔枝螺多糖对HBV转基因小鼠肝脏组织指标HBsAg、HBeAGg、HBVDNA和HBVRNA的影响。图7为本专利技术实施例1中疣荔枝螺多糖样品与单糖标准品经PMP衍生化后的HPLC图谱。其中，(a)为单糖标准品经PMP衍生化后的HPLC混合图谱；(b)为多糖样品经PMP衍生化后的HPLC图谱；1-甘露糖；2-氨基葡萄糖；3-葡萄糖醛酸；4-半乳糖醛酸；5-葡萄糖；6-半乳糖；7-鼠李糖；8-阿拉伯糖。具体实施方式以下通过具体实施方式结合附图对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。实施例1一种疣荔枝螺多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)将疣荔枝螺粉末用正己烷进行脱脂处理，获得脱脂疣荔枝螺粉末，具体为：取300g上述疣荔枝螺粉末，按适当比例加入正己烷于快速提取器中，每次提取1-2min，重复3次，抽滤后弃去澄清的亮黄色溶液，取沉淀，即为脱脂后疣荔枝螺粉末，晾干备用；疣荔枝螺粉末的制备方法包括：将大小均一的新鲜的疣荔枝螺洗净去除泥沙后，置于清水中加热煮沸3-5min，凉水迅速冷却，及时挑出可食用肉质部位，其余部位弃置；将该可食用肉质部位置于冰箱中冷冻至少24h，然后迅速取出放入真空冷冻干燥箱中24-48h直至完全干燥，接着置于中药粉碎机中粉碎，过80目筛网，即得；(2)将上述脱脂疣荔枝螺粉末与浓度为0.1wt％的氢氧化钠溶液以1∶10的料液比混合后，于70℃浸提2-3次，每次50min，再经固液分离，获得疣荔枝螺水提取液；(3)将上述疣荔枝螺水提取液冷却后，用0.1mol/LHCl调pH至中性后，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，得到浓缩疣荔枝螺水提取液；(4)将上述浓缩疣荔枝螺水提取液缓慢与无水乙醇混合后，室温静本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疣荔枝螺多糖的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)将疣荔枝螺粉末用正己烷进行脱脂处理，获得脱脂疣荔枝螺粉末；/n(2)将上述脱脂疣荔枝螺粉末与浓度为0.8-1.2wt％的氢氧化钠溶液混合后，于70-80℃浸提2-3次，每次1-2h，再经固液分离，获得疣荔枝螺水提取液；/n(3)将上述疣荔枝螺水提取液调pH至中性后，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，得到浓缩疣荔枝螺水提取液；/n(4)将上述浓缩疣荔枝螺水提取液与无水乙醇混合后，室温静置至沉淀出现，经离心和过滤获得第一沉淀；/n(5)将上述第一沉淀进行冷冻干燥后复溶于蒸馏水，经离心和过滤以除去水不溶物，获得第一滤液；/n(6)将上述第一滤液与无水乙醇混合后，室温静置至沉淀出现，经离心和过滤获得第二沉淀；/n(7)将上述第二沉淀进行冷冻干燥，得到第一疣荔枝螺粗多糖；/n(8)将上述第一疣荔枝螺粗多糖溶于蒸馏水后，加入胰蛋白酶或木瓜蛋白酶进行酶解，获得酶解液；/n(9)在上述酶解液中加入Sevage试剂，充分搅拌混匀，离心除去不容物，收集上层液，然后以上层液代替上述酶解液重复该步骤直至无明显沉淀，获得上清液；/n(10)将上述上清液浓缩冷冻干燥，得到第二疣荔枝螺粗多糖；/n(11)将上述第二疣荔枝螺粗多糖溶于蒸馏水中，经大孔树脂吸附脱色，然后经10kD超滤管离心，收集该10kD超滤管上层的液体，对该液体进行浓缩冷冻干燥，即得所述疣荔枝螺多糖。/n...

【技术特征摘要】
1.一种疣荔枝螺多糖的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将疣荔枝螺粉末用正己烷进行脱脂处理，获得脱脂疣荔枝螺粉末；
(2)将上述脱脂疣荔枝螺粉末与浓度为0.8-1.2wt％的氢氧化钠溶液混合后，于70-80℃浸提2-3次，每次1-2h，再经固液分离，获得疣荔枝螺水提取液；
(3)将上述疣荔枝螺水提取液调pH至中性后，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，得到浓缩疣荔枝螺水提取液；
(4)将上述浓缩疣荔枝螺水提取液与无水乙醇混合后，室温静置至沉淀出现，经离心和过滤获得第一沉淀；
(5)将上述第一沉淀进行冷冻干燥后复溶于蒸馏水，经离心和过滤以除去水不溶物，获得第一滤液；
(6)将上述第一滤液与无水乙醇混合后，室温静置至沉淀出现，经离心和过滤获得第二沉淀；
(7)将上述第二沉淀进行冷冻干燥，得到第一疣荔枝螺粗多糖；
(8)将上述第一疣荔枝螺粗多糖溶于蒸馏水后，加入胰蛋白酶或木瓜蛋白酶进行酶解，获得酶解液；
(9)在上述酶解液中加入Sevage试剂，充分搅拌混匀，离心除去不容物，收集上层液，然后以上层液代替上述酶解液重复该步骤直至无明显沉淀，获得上清液；
(10)将上述上清液浓缩冷冻干燥，得到第二疣荔枝螺粗多糖；
(11)将上述第二疣荔枝螺粗多糖溶于蒸馏水中，经大孔树脂吸附脱色，然后经1...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔秀灵，唐飞，许瑞安，殷虹，黄光华，
申请(专利权)人：华侨大学，
类型：发明
国别省市：福建;35