类人细胞综合因子基因重组蛋白及其应用制造技术

一种类人细胞综合因子基因重组蛋白，它具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。经过基因克隆、表达、纯化获得其重组蛋白，类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防或治疗皮肤过敏性疾病药物中的用途，在制备预防或治疗皮肤炎症性疾病药物中的用途。类人细胞综合因子基因重组蛋白经过抗过敏、止痒、炎症抑制试验，实验结果表明，类人细胞综合因子基因重组蛋白具有消炎、止痒、抗过敏高能，达到了明显的效果。

【技术实现步骤摘要】
类人细胞综合因子基因重组蛋白及其应用
本专利技术属于蛋白
，具体涉及到类人细胞综合因子基因重组蛋白。
技术介绍
人类皮肤总面积为1.5-2平方米，是人体最大的代谢器官，也是机体的重要屏障，同时也是机体暴露于外界的前线。皮肤过敏非常常见，会导致局部红肿、瘙痒、渗出，偶尔还会发生脸部紧绷、麻木、肿胀等症状。如果发生在面部轻则红肿，重则留疤，影响美容。目前，由于生活、环境以及个体激素发育等因素的影响，兼之化妆品的广泛应用，皮肤过敏损伤及其修复已经逐步成为一个新的课题。皮肤过敏会诱发各种皮肤病，如角化硬皮症、神经性皮炎、瘙痒、皲裂、皮炎皮癣毛囊炎等，这些皮肤病瘙痒难耐，且难以痊愈。在发病期间，因抓挠等问题，皮肤受损面积不断增加，增加感染的概率，给患者造成更大的痛苦，同时该皮肤病均存在治愈难，易复发等问题。目前还没有很好的解决方案。皮肤过敏及其修复的过程牵涉到复杂的免疫学机制。诸多化妆品的抗炎修复配方，并没有经过严格的科学测试，其免疫学效果值得推敲。目前医学领域已经明确白介素等功能性细胞因子有明确的炎症指示作用，干扰素类蛋白质有明确的抗炎作用，表皮生长因子、成纤维细胞生长因子具有明确的修复作用，已经在临床免疫方面和基础免疫学研究、人群流行病学研究方面得到广泛的认可。功能性蛋白的临床应用已经大规模展开，而类人功能细胞因子的开发、利用对于体外抗敏修复的应用，
技术实现思路
本专利技术要解决的一个技术问题在于克服上述现有技术的缺点，提供一种具有消炎、止痒、抗过敏功能的类人细胞综合因子基因重组蛋白。本专利技术所要解决的另外一个技术问题在于为类人细胞综合因子基因重组蛋白提供一种新用途。解决上述技术问题所采用的技术方案是：类人细胞综合因子基因重组蛋白具有序列表中SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤过敏性疾病、和/或抑制皮肤过敏性疾病药物中的用途。类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤炎症性疾病、和/或抑制皮肤炎症疾病药物中的用途。上述的炎症性皮肤疾病包括感染和/或非感染性皮肤炎症性疾病。上述的类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤过敏性疾病、和/或抑制皮肤过敏性疾病药物中的用途，制备预防和/或治疗皮肤炎症性疾病、和/或抑制皮肤炎症疾病药物中的用途，所制备的药物为外用的水剂或软膏剂，包括活性成分类人细胞综合因子基因重组蛋白以及制剂学上常用的赋形剂，如蒸馏水、甘油、凡士林等。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术首次发现类人细胞综合因子基因序列全长，并经过基因克隆、表达、纯化获得其重组蛋白。类人细胞综合因子基因重组蛋白经过抗过敏、止痒、炎症抑制试验，实验结果表明，类人细胞综合因子基因重组蛋白具有消炎、止痒、抗过敏功能，达到了明显的效果。附图说明图1是基因合成与电泳验证图。图2是目标蛋白的核苷酸序列图。图3是目标蛋白SDS电泳表达验证照片。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术不限于这些实施例。实施例1本实施例的类人细胞综合因子基因重组蛋白，具有序列表中SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。上述的类人细胞综合因子基因重组蛋白的制备方法由下述步骤组成：1、连接入酵母表达载体(1)基因合成引物委托杨凌天润奥科生物科技有限公司合成。(2)每个基因两端合成时分别加上同源重组接头，序列分别为：5’端GTATCTCTCGAGAAAAGA，3’端CTAGAAAGCTGGCGGCCG。(3)骨架载体pPICZaA经SacI酶切后，回收大片段，通过同源重组酶与合成基因片段重组连接，反应体系为：线性化pPICZaA载体1μL，成基因片段3μL，源重组酶1μL同源重组酶缓冲液2μL，蒸水加至10μL，37℃反应15分钟。(4)取反应液2μL，加入50μLDH5α大肠杆菌感受态，热击转化，涂布于含有博来霉素的LB固体平板上，37℃过夜培养，挑取阳性克隆测序验证。(5)提取质粒，用于酵母转化。2、制备酵母X33感受态转化实验两天前，于YPDA青岛雅各化学海博培养基的平皿上活化酵母菌株，转化实验2天，挑取活化的酵母细胞(单克隆)于YPDA青岛雅各化学海博液体培养基中，30℃、200转/分钟培养过夜，培养过夜的酵母细胞液按体积比为1：3转接入新的YPDA青岛雅各化学海博液体培养基中，于30℃摇床内、200rpm培养4小时，3000转/分钟离心5分钟，收集酵母细胞，用0.5倍体积的无菌水洗酵母细胞。再次转/分钟离心5分钟。用0.01倍体积的无菌水重悬酵母细胞，并转入离心管中，20℃、3000转/分钟离心5分钟。用0.01倍体积的无菌细胞悬浮液(5％v/v甘油，10％v/v二甲基亚砜)重悬酵母细胞。将重悬的酵母细胞按50ul分装到1.5ml离心管中，放入塑料盒或者纸盒中，放入-80℃冰箱。YPDA青岛雅各化学海博培养基液体或固体培养基(1％酵母提取物10g/L，2％胰蛋白胨20g/L，2％葡萄糖20g/L)。4、酵母转化方法转化一个质粒即一个反应需要360μl的YPDA青岛雅各化学海博培养基液。吸取360μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有聚乙二醇的预混液中。放置在30℃的水浴锅中孵育30分钟，每10分钟混匀一次。放置在42℃的水浴锅中热击30分钟，每10分钟混匀一次。12000rpm/分钟离心1分钟，去上清液，在沉淀中加入1mlYPDA青岛雅各化学海博培养基液体重悬，30℃培养1-2小时；12000rpm/分钟瞬时离心，去上清液，沉淀中加入0.9％NaCl溶液100μl重悬，将酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上，30℃培养2-4天，获得菌落。5、酵母蛋白诱导及裂解酵母平板培养2-4天，挑取10个克隆进行PCR检测，检测引物如下：AOX-F：GACTGGTTCCAATTGACAAGC；AOX-R：GCAAATGGCATTCTGACATCC；取PCR检测阳性克隆进行下一步实验，见图1，测序结果显示序列正确，见图2。将步骤4菌落接种至YPDA青岛雅各化学海博培养基液中，28.5℃培养至在600nm吸光度为0.2-0.6。4500rpm室温离心5分钟，收集菌体，加入5ml新的培养基重悬，加入终浓度为0.5％甲醇诱导蛋白表达，28.5℃诱导培养45小时，收集菌体，进行检测。用生工生物的酵母蛋白提取试剂盒进行蛋白提取。6、Westernblot检测蛋白表达(1)制胶清洗干净玻璃板，固定在支架上，在玻璃板之间灌入配制的10％的分离胶(含有10％十二烷基硫酸钠，10％过硫酸铵、4‰聚丙烯酰胺)，用去离子水封闭表面，室温下聚合。当水封层与分离胶层之间出现明显界面时，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类人细胞综合因子基因重组蛋白，其特征在于：它具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种类人细胞综合因子基因重组蛋白，其特征在于：它具有序列表中SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。


2.权利要求1所述的类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤过敏性疾病、和/或抑制皮肤过敏性疾病药物中的用途。


3.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵忠民，
申请(专利权)人：邵忠民，
类型：发明
国别省市：陕西;61