一种长链多肽的固相合成方法技术

本发明专利技术公开了一种长链多肽的固相合成方法，该发明专利技术使用了一种多功能反应釜，该反应釜包括底座、反应釜体、储液槽，在反应釜体顶部设有喷淋层，将液态反应物通过喷洒的方式加入反应釜中，同时反应釜中的固态粉末状物料进行搅拌，使得液态反应物和固态粉末状物料的接触面积增大，提升了反应速率，锦进一步提升了长链多肽的制备效率，多肽合成只在一个反应容器中进行，完全避免了在反应过程中转移反应物造成反应物污染的情况，从而保证了多肽的纯度，且该方法制备的长链多肽氨基酸的副反应较少，副反应产物较少，进一步保证了制备的长链多肽的纯度。

Solid phase synthesis of long chain polypeptide

【技术实现步骤摘要】
一种长链多肽的固相合成方法
本专利技术属于多肽制备领域，具体涉及一种长链多肽的固相合成方法。
技术介绍
多肽是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，是蛋白质水解的中间产物，常用的多肽合成法为固相和液相两种，固相合成多肽在一定程度上使得多肽的纯度不高，且副反应较多，导致多肽中含有较多副反应产物，进一步影响多肽的纯度；中国专利技术CN108059667A公开了一种兰瑞肽的固相合成方法，该专利技术以Fmoc-氨基树脂为固相合成的载体，依次缩合8个保护氨基酸，的到兰瑞肽的前体线性肽树脂，然后进行二硫环化反应，得到兰瑞肽树脂，采用固相氧化的方式进行二硫键的环化反应，最后将太树脂裂解、脱去侧链保护基，得到兰瑞肽粗品，进一步纯化的到兰瑞肽纯品，该专利技术制备的兰瑞肽方法简单，反应时间短，但该专利技术制备的兰瑞肽粗品纯度较低，且在制备过程可能会受外界影响，使得制备的瑞兰太受到污染。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种长链多肽的固相合成方法，在制备过程中未使用微波加热技术进行加热，使得在制备过程中不会出现较多的副反应，一定程度上保证了多肽的纯度，同时在制备过程中使用一种多功能反应釜，该反应釜通过在反应釜的顶部设置喷淋层，将液态反应物通过喷洒的方式加入反应釜中，同时反应釜中的固态粉末状物料进行搅拌，使得液态反应物和固态粉末状物料的接触面积增大，提升了反应速率，进一步提升了长链多肽的制备效率，在反应釜体底部设有过滤板和密封阀门，使得反应完成后，多余的液料可以直接排出反应釜，加装鼓风机使得在进行多肽提取的过程中，直接将氮气通入反应釜中，完全避免了在反应过程中转移反应物造成反应物污染的情况，从而进一步保证了多肽的纯度。本专利技术要解决的技术问题：1、传统的制备长链多肽的固相合成方法制备的长链多肽，纯度不高在制备过程中要经过多次，装载设备更换，容易造成制备的多肽被污染，甚至导致无法制备相应的长链多肽，使得长链多肽的制备效率低，不适合大量生产；2、传统的制备长链多肽的固相合成方法制备的长链多肽，用到微波加热技术，在制备的长链多肽的过程中，发生较多的副反应，副反应产物较多，影响了制备长链多肽的纯度，同时影响了长链多肽的产率。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种长链多肽的固相合成方法，具体步骤如下：A、将树脂放入多功能反应釜中加入DMF,搅拌30min,将多余的DMF去除，得到溶胀树脂；B、向步骤A中的多功能反应釜中加入哌啶/DMF溶液，搅拌5min，去除多功能反应釜中的溶液，再次加入哌啶/DMF溶液，搅拌15min，去除多功能反应釜中的溶液，进行洗涤，得到溶胀树脂；C、将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM，加入步骤B中的多功能反应釜中，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，再次洗涤，去除洗涤液；D、重复步骤B和步骤C六次,进行洗涤，去除洗涤液；E、向步骤D中的多功能反应釜中加入裂解液，进行反应2h，吹干洗涤，得到长链多肽。进一步，步骤B中所述的洗涤方法如下：向多功能反应釜中加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF得到洗涤后的溶胀树脂；步骤C中所述的洗涤方法如下：加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF；步骤D中所述的洗涤方法如下：不步骤S3中的多功能反应釜加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入DCM进行洗涤两次，进行洗涤两次，去除DCM；步骤E中所述的吹干洗涤方法如下：向多功能反应釜内通往氮气至裂解液完全挥发，加入乙醚进行洗涤六次，在常温条件下进行挥发至乙醚完全挥发，得到长链多肽。进一步，所述的哌啶/DMF溶液为20％哌啶/DMF溶液，所述的肽耦联试剂为HBTU；步骤A中树脂和DMF的用量比为1:15；步骤B中的哌啶/DMF、MDF、甲醇和树脂的用量比为15:10:10:1；步骤C中Fmoc保护的氨基酸与DMF的用量比为15：1，肽耦联试剂与DMF的用量比为15：1，Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM和树脂的用量比为3:3:10:1；步骤D中DMF、甲醇、DCM和树脂的用量比为10:10:10:1；步骤E中的裂解液的组份为：94％TFA、2.5％水、EDT2.5％、1％TIS，裂解液和树脂的用量比为10:1。进一步，所述的多功能反应釜包括底座、反应釜体、储液槽，底座放置在水平面上，底座的一端设有支撑柱，支撑柱的顶端左侧设有固定块，集液槽放置在底座的上端面上；所述的反应釜体的外部一侧与固定块固定连接，反应釜体的上端为广口端，反应釜体的下端为窄口端，反应釜体的上端一侧开有进料口，反应釜体的下端开有出料口，出料口内部设有第二密封阀门，反应釜体的一侧开有进气口，进气口内部设有第三密封阀门，进气口上设有鼓风机，反应釜体的另一侧开有出气口，出气口的内部设有第四密封阀门，反应釜体的一侧还设有加热器；所述的储液槽位于底座的上端面，储液槽的一侧下端设有输液管，输液管的一端与储液槽相互连通，输液管上设有输液泵，输液管的另一端设有喷淋层，输液管与喷淋层相互连通，喷淋层上设有喷淋头，喷淋层位于反应釜体的上端，喷淋层通过螺接固定在反应釜体上，形成密封空间，喷淋头位于反应釜体内部，喷淋层上端面设有电机，电机的输出轴伸上设有搅拌螺杆，搅拌螺杆穿过喷淋层，搅拌螺杆位于反应釜体内部，搅拌螺杆上设有若干搅拌叶片。进一步，所述的支撑柱与底座垂直设置，集液槽位于出料口的下端，集液槽和储液槽分别位于底座上端面两边。进一步，所述的进料口的内部设有第一密封阀门，进料口的开口朝上，第二密封阀门位于出料口的内部下端，出料口的上端设有过滤板，过滤板通过螺接固定在出料口上，进气口和出气口的位置均高于反应釜体内物料的高度。进一步，所述的搅拌螺杆穿过喷淋层，搅拌螺杆与喷淋层转动连接，搅拌叶片的直径与出料口的口径相同。本专利技术的有益效果：本专利技术在制备过程中使用了一种多功能反应釜，该反应釜通过，在反应釜的顶部设置喷淋层，将液态反应物通过喷洒的方式加入反应釜中，同时反应釜中的固态粉末状物料进行搅拌，使得液态反应物和固态粉末状物料的接触面积增大，提升了反应速率，进一步提升了长链多肽的制备效率，在反应釜上加装加热器，使得反应釜可以根据，反应所需温度进行调节，保证反应正常进行，在反应釜体底部设有过滤板和密封阀门，使得反应完成后，多余的液料可以直接排出反应釜，加装鼓风机使得在进行多肽提取的过程中，直接将氮气通入反应釜中，完全避免了在反应过程中转移反应物造成反应物污染的情况，从而保证了多肽的纯度，且该方法制备的长链多肽氨基酸的副反应较少，副反应产物较少，进一步保证了制备的长链多肽的纯度。附图说明下面结合附图对本专利技术作进一步的说明。图1是本专利技术一种长链多肽的固相合成方法中多功能反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：由如下步骤制备:/nA、将树脂放入多功能反应釜中加入DMF,搅拌30min,将多余的DMF去除，得到溶胀树脂；/nB、向步骤A中的多功能反应釜中加入哌啶/DMF溶液，搅拌5min，去除多功能反应釜中的溶液，再次加入哌啶/DMF溶液，搅拌15min，去除多功能反应釜中的溶液，进行洗涤，得到溶胀树脂；/nC、将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM，加入步骤B中的多功能反应釜中，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，再次洗涤，去除洗涤液；/nD、重复步骤B和步骤C六次,进行洗涤，去除洗涤液；/nE、向步骤D中的多功能反应釜中加入裂解液，进行反应2h，吹干洗涤，得到长链多肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：由如下步骤制备:
A、将树脂放入多功能反应釜中加入DMF,搅拌30min,将多余的DMF去除，得到溶胀树脂；
B、向步骤A中的多功能反应釜中加入哌啶/DMF溶液，搅拌5min，去除多功能反应釜中的溶液，再次加入哌啶/DMF溶液，搅拌15min，去除多功能反应釜中的溶液，进行洗涤，得到溶胀树脂；
C、将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM，加入步骤B中的多功能反应釜中，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，再次洗涤，去除洗涤液；
D、重复步骤B和步骤C六次,进行洗涤，去除洗涤液；
E、向步骤D中的多功能反应釜中加入裂解液，进行反应2h，吹干洗涤，得到长链多肽。


2.根据权利要求1所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：步骤B中所述的洗涤方法如下：向多功能反应釜中加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF得到洗涤后的溶胀树脂；步骤C中所述的洗涤方法如下：加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF；步骤D中所述的洗涤方法如下：不步骤S3中的多功能反应釜加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入DCM进行洗涤两次，进行洗涤两次，去除DCM；步骤E中所述的吹干洗涤方法如下：向多功能反应釜内通往氮气至裂解液完全挥发，加入乙醚进行洗涤六次，在常温条件下进行挥发至乙醚完全挥发，得到长链多肽。


3.根据权利要求1或2所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：所述的哌啶/DMF溶液为20％哌啶/DMF溶液，所述的肽耦联试剂为HBTU；步骤A中树脂和DMF的用量比为1:15；步骤B中的哌啶/DMF、MDF、甲醇和树脂的用量比为15:10:10:1；步骤C中Fmoc保护的氨基酸与DMF的用量比为15：1，肽耦联试剂与DMF的用量比为15:1，Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM和树脂的用量比为3:3:10:1；步骤D中DMF、甲醇、DCM和树脂的用量比为10:10:10:1；步骤E中的裂解液的组份为：94％TFA、2.5％水、EDT2.5％、1％TIS，裂解液和树脂的用量比为10:1。


4.根据权利要求1所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：所述的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈为光，郑范娜，严磊，武兴伟，
申请(专利权)人：安徽省国平药业有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34