一种奥贝胆酸的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种奥贝胆酸的制备方法，属于制药技术领域，以猪胆酸为原料，经6‑位羟基经酶氧化、24‑羧基甲脂化、wittig反应、皂化氢化还原得奥贝胆酸。猪胆酸为原料，经6‑位羟基经酶氧化、24‑羧基甲脂化、wittig反应、皂化氢化还原得奥贝胆酸，用6‑位特异性氧化酶将6位氧化，具有效率高和氧化专一的优点，实现了用化学法氧化无法达到的效果；在化合物4的制备过程中，使用wittig反应代替其他合成方法，避免使用低温、易燃物，丁基锂或二异丙基氨基锂和三氟化硼乙醚；整个合成过程成本低廉、条件温和、环境友好、适合工业化生产，此外本申请的奥贝胆酸的制备方法，缩短了合成路线，提高了总收率。

A method for the preparation of obacholic acid

【技术实现步骤摘要】
一种奥贝胆酸的制备方法方法领域本专利技术属于医药领域，具体是一种奥贝胆酸的制备方法。背景方法奥贝胆酸可用于治疗或预防FXR介导的疾病或病况、心血管疾病或胆汁郁积性肝病，并且可用于降低HDL胆固醇、降低哺乳动物的甘油三酯或抑制纤维变性，其在研适应症包括原发性胆汁性肝硬化(PBC)，非酒精性脂肪肝(NASH)，原发性硬化性胆管炎(PSC)，门静脉高压症和腹泻，化学结构式如下：专利W02006122977，中国同族专利CN101203526)公开的方法是以KLCA为起始原料,分别经过C-24羧酸酯化、3-羟基硅醚保护、7-羰基形成硅烯醇醚、与乙醛羟醛缩合、C-24酯水解、6-亚乙基氢化、6-乙基构型转化和7-羰基的选择性还原八步反应，成路线如下所示：专利W002072598及文献JournalofMedicinalChemistry,2002,45(17):3569-3572于2002年首次公开报道了包含奥贝胆酸在内的鹅去氧胆酸衍生物的制备方法，其中奥贝胆酸的合成路线如下所示：文献J.Med.Chem.2012,55,84-93报道了以鹅去氧胆酸(CDCA)为原料，经过7-羟基氧化后成羧酸甲酯、强碱低温下制备硅烯醇醚、羟醛缩合、7-羰基选择性还原和催化氢化得奥贝胆酸，合成路线如下:专利CN201611259069报道了以猪去氧胆酸为原料，经过24-羧酸甲酯、NBS氧化、wittig反应、3位羟基保护、7位氧化、皂化氢化、7-羰基还原得奥贝胆酸，合成路线如下:r>通过分析以上几条路线，存在的第一个问题是：前三条路线均采用鹅去氧胆酸为起始原料，该原料价格昂贵,经过多步骤反应后致使奥贝胆酸的制备成本高昂；第四条路线虽采用相对便宜的猪去氧胆酸为原理，但所用的氧化剂(NBSCrO3)价格昂贵，对环境污染较大；第二问题是上述路线用到易燃易爆的试剂丁基锂或二异丙基氨基锂，生产过程中存在较大风险,反应条件苛刻，温度达到-78℃,对设备要求高，需深冷条件下完成反应，且工艺的总收率收率低,导致该路线产业化的实用性很差；第三个问题是用到溴乙烷或碘乙烷进行乙基化，生产过程中对劳动保护要求较高，且该试剂符合为ICH指导原则中基因毒预警结构，产品中的检测限度要求较高。反应用到低沸点无水乙醛,该试剂不稳定，生产、运输、储存不便，限制规模化生产；第四个问题是路线中反应产物有需要经过色谱柱分离纯化，柱层析分离成本昂贵,且产能受到设备限制，从而造成大规模生产成本居高；第五个问题是：路线中用到三氟化硼乙醚试剂,生产过程中产生易爆毒性气体硼烷，生产过程中需要特殊防护。
技术实现思路
针对上述现有的奥贝胆酸制备方法存在成本高昂、反应条件苛刻、对环境污染较大不合适工业化生产的缺陷，本专利技术的目的是提供一种奥贝胆酸的制备方法。一种奥贝胆酸的制备方法，以猪胆酸为原料，经6-位羟基经酶氧化、24-羧基甲脂化、wittig反应、皂化氢化还原得奥贝胆酸，其工艺路线如下：本申请的技术方案中，猪胆酸为原料，经6-位羟基经酶氧化、24-羧基甲脂化、wittig反应、皂化氢化还原得奥贝胆酸，用6-位特异性氧化酶将6位氧化，具有效率高和氧化专一的优点，实现了用化学法氧化无法达到的效果；在化合物4的制备过程中，使用wittig反应代替其他合成方法，避免使用低温、易燃物，丁基锂或二异丙基氨基锂和三氟化硼乙醚；整个合成过程成本低廉、条件温和、环境友好、适合工业化生产，此外本申请的奥贝胆酸的制备方法，缩短了合成路线，提高了总收率。优选的，一种奥贝胆酸的制备方法，包括如下步骤：(1)将化合物1用氢氧化钠水溶液溶解后滴加入6-位氧化酶的培养液，维持25～30℃反应2～3h至转化完全，过滤除去菌渣，水相控温用硫酸调节至pH至4～5，析出产品保温搅拌析晶，过滤后产品用水洗涤，干燥得化合物2；(2)将得到化合物2用甲醇完全溶解，加入催化量的硫酸，加热至反应完全，降温用碱水调pH至中性，加水析晶得化合物3；(3)N2保护下在投入乙基三苯基溴化磷、四氢呋喃和叔丁醇钾，搅拌溶解后,滴加入上述化合物3的四氢呋喃溶液，搅拌至反应完全,反应液用盐酸调制酸性，将溶液蒸干，加入甲苯和水提取分液,有机层用饱和食盐水洗涤，垫硅胶过滤，滤液浓缩后加入正己烷析晶，过滤得化合物4；(4)向反应瓶中投入化合物4，加入甲醇搅拌溶解完全后加入氢氧化钠溶液，升温至反应完全，降温滴加入酸水至酸性，再加入水析晶完全，过滤得化合物用碱液溶解完全，加入钯碳通入氢气，加热氢化反应至反应完全，过滤除去钯碳，滤液用盐酸调节pH至酸性，过滤得化合物5粗品再用乙酸丁酯重结晶得化合物5。优选的，步骤(1)中化合物1，100.0g，244.75mmol用10％氢氧化钠溶解，6-位氧化酶的培养液的体积为5000ml，水相用60％硫酸调节pH,过滤后产品用水50g洗涤，40～50℃干燥。优选的，步骤(1)中维持28℃反应2.5h至转化完全，水相控温用硫酸调节至pH至4.5，45℃干燥。优选的，步骤(2)中甲醇的用量为234g，加入催化量的98％硫酸0.5ml，加热50～60℃搅拌反应至TLC检测原料反应完全，降温至10～15℃，用2mol/L氢氧化钠调节pH至7.0～7.5，滴加入纯化水100g搅拌析晶，待固体析出后再次滴加入纯化水200g继续搅拌析晶30～60min，过滤滤饼用水50g洗涤，40～50℃干燥得化合物3。优选的，步骤(3)N2保护下在反应瓶中投入乙基三苯基溴化磷130.05g，349.52mmol、四氢呋喃436.1g和叔丁醇钾33.99g，302.9mmol，10～25℃搅拌溶解后，滴加入上述化合物3的四氢呋喃196ml溶液，搅拌至反应完全，反应液用6mol/L盐酸调节pH至4～5，将溶液于40～50℃浓缩至干，加入甲苯424.3g和水490g提取分液，有机层用饱和食盐水216.8g洗涤，垫硅胶200～300目，29.4g，过滤，并用甲苯84.9g洗涤，合并甲苯50～60℃浓缩至化合物3的2V体积时加入正己烷323.4g室温搅拌析晶，过滤得化合物4；更为优选的，步骤(3)中反应液用6mol/L盐酸调节pH至4.5，将溶液于45℃浓缩至干，垫硅胶200～300目，合并甲苯55℃浓缩。优选的，步骤(4)中向反应瓶中投入化合物上述化合物4，加入甲醇327.7g，搅拌溶解完全后加入25％氢氧化钠溶液，升温至20-30℃，反应至TLC检测原料反应完全，降温至常温，滤液用6mol/L盐酸调节pH至3～4，加入水使甲醇与水的体积比例1：1，搅拌30～60min，过滤，滤饼用水洗，所得固体加入20.5g氢氧化钠配成的820g水溶液搅拌溶解完全后，加入5％Pd/C4.1g，通入氢气加压至0.5～1.0MPa，90-100℃反应至HPLC检测反应完全，垫硅藻土过滤，滤液用6mol/L盐酸调节pH至3～4，过滤滤饼用水洗，得化合物5粗品，于45～55℃鼓风干燥得粗品64.5g，153.42mmol，粗品加入乙酸丁酯1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种奥贝胆酸的制备方法，其特征在于，以猪胆酸为原料，经6-位羟基酶氧化、24-羧基甲脂化、wittig反应、皂化氢化还原得奥贝胆酸，其工艺路线图如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种奥贝胆酸的制备方法，其特征在于，以猪胆酸为原料，经6-位羟基酶氧化、24-羧基甲脂化、wittig反应、皂化氢化还原得奥贝胆酸，其工艺路线图如下：





2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将化合物1用氢氧化钠水溶液溶解后滴加入6-位氧化酶的培养液，维持25～30℃反应2～3h至转化完全，过滤除去菌渣，水相控温用硫酸调节至pH至4～5，析出产品保温搅拌析晶，过滤后产品用水洗涤，干燥得化合物2；
(2)将得到化合物2用甲醇完全溶解，加入催化量的硫酸，加热至反应完全，降温用碱水调pH至中性，加水析晶得化合物3；
(3)N2保护下在投入乙基三苯基溴化磷、四氢呋喃和叔丁醇钾，搅拌溶解后,滴加入上述化合物3的四氢呋喃溶液，搅拌至反应完全,反应液用盐酸调制酸性，将溶液蒸干，加入甲苯和水提取分液,有机层用饱和食盐水洗涤，垫硅胶过滤，滤液浓缩后加入正己烷析晶，过滤得化合物4；
(4)向反应瓶中投入化合物4，加入甲醇搅拌溶解完全后加入氢氧化钠溶液，升温至反应完全，降温滴加入酸水至酸性，再加入水析晶完全，过滤得化合物用碱液溶解完全，加入钯碳通入氢气，加热氢化反应至反应完全，过滤除去钯碳，滤液用盐酸调节pH至酸性，过滤得化合物5粗品再用乙酸丁酯重结晶得化合物5。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中化合物1，100.0g，244.75mmol用10％氢氧化钠溶解，6-位氧化酶的培养液的体积为5000ml，水相用60％硫酸调节pH,过滤后产品用水50g洗涤，40～50℃干燥。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中维持28℃反应2.5h至转化完全，水相控温用硫酸调节至pH至4.5，45℃干燥。


5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中甲醇的用量为234g，加入催化量的98％硫酸0.5ml，加热50～60℃搅拌反应至TLC检测原料反应完全，降温至10～15℃，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄显，田小强，龙柯利，程玲利，王婷婷，
申请(专利权)人：四川澄华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51