间充质干细胞在制备治疗类风湿性关节炎的产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了间充质干细胞在制备治疗类风湿性关节炎的产品中的应用。本发明专利技术保护间充质干细胞或其细胞制剂在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。所述细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：以脐带沃顿区组织块为原料，制备脐带间充质干细胞，得到细胞制剂，制备过程中采用低血清培养基。本发明专利技术提供的细胞制剂适用于类风湿性关节炎及其相关疾病的细胞治疗。所述类风湿性关节炎相关疾病的并发症及发病机理相似的疾病包括类风湿性血管炎、肺炎、骨关节炎、类风湿性心脏病、强直性脊柱炎、痛风、眼病、肾病、泌尿系统感染、柯兴氏综合征、口腔溃疡等。本发明专利技术对于类风湿性关节炎及其相关疾病的治疗具有重大的应用价值。

Application of mesenchymal stem cells in the preparation of products for the treatment of rheumatoid arthritis

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞在制备治疗类风湿性关节炎的产品中的应用
本专利技术涉及间充质干细胞在制备治疗类风湿性关节炎的产品中的应用，具体涉及人脐带沃顿区间充质干细胞制剂在制备治疗类风湿性关节炎的产品中的应用。
技术介绍
类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是以关节的滑膜炎和关节软骨侵蚀破坏为主要特征的全身性自身免疫性疾病，在全球范围内的发病率约为1％，我国的抽样调查结果约为0.8％；其主要的病理表现有免疫功能异常、关节滑膜增生、关节软骨及骨组织被破坏三个方面。关节的病变主要表现为炎症细胞浸润、滑膜增生、血管翳形成、软骨和滑膜的损伤等；血管翳从关节软骨边缘处的滑膜逐渐向软骨面伸延，最终覆盖在关节软骨面上，从而阻断软骨细胞与滑膜液的接触，进而影响了软骨组织接收营养；另外，滑膜的过度增生、反复发作，可引发剧烈的炎症反应，导致关节软骨和骨组织被破坏、关节功能障碍，严重者终致病人残废。随着分子生物学、免疫病理学、基因工程技术等技术的发展，RA的病因及发病机理的研究随之深入。到目前为止，RA的具体发病机理至今仍无定论；遗传因素、免疫细胞、细胞因子等可能在RA的发病过程中起重要作用。由于RA的发病机制并不十分明确，因此尚无根治之法。目前，治疗还是以延缓病情发展、减轻发病程度，以提高患者的生活质量为主。在治疗RA的方法中，以药物治疗为最常用手段，目前，用于治疗RA的药物主要分为改善症状类抗风湿药、改善病情类抗风湿药、糖皮质激素及植物药等。此外还有基因治疗和外科手术等方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供间充质干细胞或细胞制剂的新用途。本专利技术首先保护间充质干细胞在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。上述应用中，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。所述脐带间充质干细胞是以脐带沃顿区组织块为原料制备得到的脐带间充质干细胞。所述以脐带沃顿区组织块为原料制备脐带间充质干细胞的过程中采用低血清培养基。所述脐带为离体脐带。所述脐带间充质干细胞可为原代脐带间充质干细胞也可为传代后的脐带间充质干细胞。所述传代后的脐带间充质干细胞可为传代20代以内的脐带间充质干细胞，具体为传代10代以内的脐带间充质干细胞，更具体为传代3-5代的脐带间充质干细胞。本专利技术还保护细胞制剂在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。上述应用中，所述细胞制剂的制备方法包括如下步骤：以脐带沃顿区组织块为原料，制备得到脐带间充质干细胞，制备过程中采用低血清培养基。所述脐带间充质干细胞可为原代脐带间充质干细胞也可为传代后的脐带间充质干细胞。所述原代脐带间充质干细胞的制备方法依次包括如下步骤：(1)采用低血清培养基培养脐带沃顿区组织块，直至有细胞爬出；(2)采用低血清培养基培养细胞；(3)收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为原代脐带间充质细胞。所述传代后的脐带间充质干细胞可为传代20代以内的脐带间充质干细胞，具体为传代10代以内的脐带间充质干细胞，更具体为传代3-5代的脐带间充质干细胞。所述传代的方法具体可为：将脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养细胞，收集细胞，胰酶消化，收集细胞。进一步的，所述细胞制剂的制备方法包括如下步骤：(1)采用低血清培养基培养离体的脐带沃顿区组织块7-10天；(2)完成步骤(1)后，弃除组织块，采用低血清培养基培养细胞至80％汇合度；(3)完成步骤(2)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P0代脐带间充质细胞；(4)完成步骤(3)后，将所述P0代脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养至80％汇合度；(5)完成步骤(4)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P1代脐带间充质细胞；(6)完成步骤(5)后，将所述P1代脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养至80％汇合度；(7)完成步骤(6)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P2代脐带间充质细胞；(8)完成步骤(7)后，将所述P2代脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养至80％汇合度；(9)完成步骤(8)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为所述细胞制剂。以上任一所述细胞制剂为CD126阳性的细胞制剂，CD126的阳性率在95％以上，优选为99％以上。以上任一所述细胞制剂为CD29、CD44、CD90和CD105的阳性率均在90％以上的细胞制剂，CD29、CD44、CD90和CD105的阳性率优选在95％以上，进一步优选在99％以上。以上任一所述细胞制剂的CD31和CD34的阳性率低于10％，优选低于7％。以上任一所述细胞制剂的CD45和HLA-DR阳性率均低于5％，优选低于3％，进一步优选低于1％。CD126、CD29、CD44、CD90和CD105均为鉴定间充质干细胞常用的表面标志物，CD126、CD29、CD44、CD90和CD105的阳性率高说明细胞制剂是间充质干细胞且其纯度很高。CD31是内皮祖细胞的标志物、CD45是白细胞的标志物和CD34是造血干细胞的标志物，CD31、CD45以及CD34的三个指标的阳性率低，说明细胞制剂纯度很高。HLA-DR是移植排斥相关的标志物，HLA-DR阳性率低说明细胞制剂应用时不容易发生移植排斥。本专利技术还保护一种用于治疗类风湿性关节炎的药物。本专利技术保护的用于治疗类风湿性关节炎的药物的活性成分为间充质干细胞或上述细胞制剂。上述药物中，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。所述脐带间充质干细胞是以脐带沃顿区组织块为原料制备得到的脐带间充质干细胞。以脐带沃顿区组织块为原料制备脐带间充质干细胞的过程中采用低血清培养基。所述脐带为离体脐带。所述脐带间充质干细胞可为原代脐带间充质干细胞也可为传代后的脐带间充质干细胞。传代后的脐带间充质干细胞可为传代20代以内的脐带间充质干细胞，具体为传代10代以内的脐带间充质干细胞，更具体为传代3-5代的脐带间充质干细胞。以上任一所述低血清培养基为含3-5％(体积百分比)血清的细胞培养基。以上任一所述低血清培养基的组成如下：人上皮生长因子10ng/mL、人碱性成纤维生长因子10ng/mL、重组人胰岛素样生长因子5μg/mL、血小板衍生因子10ng/mL、肝素5μg/mL、氢化可的松1μg/mL、抗坏血酸10μg/mL、非必需氨基酸溶液1％(体积百分比)、L-谷氨酰胺2mmol/L、胎牛血清4％(体积百分比)、青霉素50U/mL、链霉素50μg/mL，余量为DMEM高糖培养基。非必需氨基酸溶液中含有Glycine10mM、L-Alanine10mM、L-Asparagine10mM、L-Asparticacid10mM、L-GlutamicAcid10mM、L-Proline10mM、L-Serine10mM。本专利技术中采用低血清培养基来进行培养。在间充质干细胞培养方面，通常使用10％(体积百分数)的胎牛血清，有的血清浓度高达20％(体积百分比)。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、碳水化合物、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.间充质干细胞在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.间充质干细胞在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述脐带间充质干细胞是以脐带沃顿区组织块为原料制备得到的脐带间充质干细胞。


4.细胞制剂在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的应用；
所述细胞制剂的制备方法包括如下步骤：以脐带沃顿区组织块为原料，制备得到脐带间充质干细胞，制备过程中采用低血清培养基。


5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述脐带间充质干细胞为原代脐带间充质干细胞或传代后的脐带间充质干细胞。


6.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述细胞制剂的制备方法包括如下步骤：
(1)采用低血清培养基培养离体的脐带沃顿区组织块7-10天；
(2)完成步骤(1)后，弃除组织块，采用低血清培养基培养细胞至80％汇合度；
(3)完成步骤(2)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P0代脐带间充质细胞；
(4)完...

【专利技术属性】
技术研发人员：常智杰，付艳霞，盛剑秋，任芳丽，王银银，韩斌，冯亚瑞，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11