一种通过高脂饮食联合STZ诱导建立SD大鼠2型糖尿病研究模型的方法技术

本发明专利技术提供一种通过高脂饮食联合STZ诱导建立的SD大鼠糖尿病模型方法。通过高脂饲料和STZ诱导模拟人类肥胖和糖尿病的发病特点，提供一种建造胰岛素抵抗和胰岛B细胞部分缺陷导致的2型糖尿病为发病机制的动物模型。SPG级SD雄性大鼠被随机分为正常对照组10只/组、糖尿病组20只/组。发明专利技术采用高脂饲料喂养4周龄大鼠，诱导胰岛素抵抗模型，以及高脂饲料喂养大鼠12周后STZ小剂量尾静脉注射诱导糖尿病动物模型的建立，该方法可以更好地模拟现由于胰岛素抵抗伴胰岛素分泌不足因素造成的人类2型糖尿病发病特点，与其他造模相比，更具有临床和基础研究结合的科学意义。

A method of establishing the research model of type 2 diabetes in SD rats by high fat diet combined with STZ induction

【技术实现步骤摘要】
一种通过高脂饮食联合STZ诱导建立SD大鼠2型糖尿病研究模型的方法
本专利技术属于医学领域，尤其涉及一种通过高脂饮食和STZ诱导建立的SD大鼠2型糖尿病模型方法。
技术介绍
糖尿病已成为全世界范围内严重的公众健康问题，目前全球约有4.25亿成人患有糖尿病，2型糖尿病占糖尿病总数的90％-95％，它庞大的患病人数还导致了巨大的医疗支出。因此，建立一种类似临床2型糖尿病的动物模型，对医学临床研究具有重要的意义。建立糖尿病的模型有很多种，目前的研究表明，SD大鼠作为实验动物，与人类具有相似的糖尿病病理特征。在2型糖尿病的发病机制中，两个关键因素是胰岛素敏感性降低和胰岛B细胞功能障碍。有证据表明高脂饮食是导致胰岛素抵抗的独立危险因素之一，而胰岛素抵抗被认为是代谢综合征、高血压、肥胖和糖尿病的“共同土壤”。STZ是从无色链霉菌中提取的一种抗生素，本质上是一种氨基葡萄糖-亚硝基脲，由于它具有胰岛β细胞毒性被用于1型和2型糖尿病动物模型制备。胰岛B细胞功能障碍的严重程度取决于STZ的注射剂量及方式，使用高剂量STZ能够破坏全部胰岛功能诱导1型糖尿病，而低剂量导致的少部分胰岛B细胞破坏被用于诱导2型糖尿病。中国专利申请CN109221011A公开了一种建造高脂饮食和低剂量注射STZ诱导的糖尿病和肥胖SD大鼠模型的方法，其采用脂肪供能比60％的高脂饮食8周联合腹腔多次小剂量STZ构建模型。一般来说30-50％为高脂饮食，而大于50％被认为是极高脂肪饮食，脂肪含量较高的饲料一般不宜成型及储存，因此工艺要求较高，相对价格更贵。腹腔注射STZ相比尾静脉所需药量更多，若STZ经腹腔误打入脏器，容易造模失败，甚至引起大鼠死亡。
技术实现思路
为弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种建造高脂饮食联合低剂量尾静脉注射STZ诱导的SD大鼠2型糖尿病模型方法，来模拟人类不良饮食和环境造成的胰岛素敏感性降低和胰岛B细胞功能障碍。本专利技术提供了一种通过高脂饮食联合STZ诱导建立SD大鼠2型糖尿病研究模型的方法，包括以下步骤：步骤1，选取SPF级SD大鼠4周龄，雄性，体重为80-100g,使用普通饲料适应性喂养1周后，将大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组；其中正常对照组给予普通饲料喂养，糖尿病组给予高脂饲料喂养。步骤2，每日按大鼠体重的10％给予饲料喂养，恒定温度和湿度环境下自由进食饮水；步骤3，观察步骤2中大鼠一般状态和体重变化，高脂喂养12周后进行口服葡萄糖耐量试验、腹腔胰岛素耐量试验，判断是否存在胰岛素抵抗；步骤4，将糖尿病组大鼠禁食10--12h,按照STZ总剂量为25mg/kg进行尾静脉注射，正常对照组给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。STZ注射1周后，尾静脉检测大鼠随机血糖，血糖≥16.7mmol/L判断造模成功。本专利技术的效果：本专利技术选择SD大鼠作为实验动物，采用12周高脂饮食诱导胰岛素抵抗和腹腔注射低剂量STZ建立模型，本模型具有超重、糖耐量减低、胰岛素敏感性下降特点，可以更好地模拟人类因不良饮食习惯(高糖高脂饮食)引起的2型糖尿病模型，高脂饮食增加了大鼠胰岛素抵抗，小剂量STZ能够破坏胰岛B细胞部分功能，使胰岛素分泌减少，造成外周组织对胰岛素不敏感，形成非胰岛素依赖型糖尿病，即2型糖尿病。胰岛B细胞功能障碍的严重程度取决于STZ的注射剂量，使用高剂量STZ破坏全部胰岛功能诱导1型糖尿病，而使用低剂量STZ导致的胰岛B细胞分泌紊乱被用于诱导2型糖尿病。STZ的注射方式、剂量一直未有定论。本专利技术采用小剂量STZ尾静脉注射的方法，既可以避免大剂量注射胰岛B细胞功能全破坏导致的糖尿病高渗状态和酮症酸中毒，又可以避免STZ误打入腹腔脏器造成模型失败或死亡。优选的，步骤1中的普通饲料组分为：小麦10份，麸子30份，玉米面30份，豆饼20份，鱼粉5份，骨粉2份，酵母2份和食盐1份。优选的，步骤2中的高脂饲料组分为：小麦10份，麸子30份，玉米面30份，豆饼20份，鱼粉5份，骨粉2份，酵母2份，食盐1份，猪油5份、酥油5份、蔗糖10份、胆固醇2.5份、胆酸钠1份。优选的，高脂喂养12周，行糖耐量、胰岛素耐量试验，建立胰岛素抵抗模型后给予小剂量STZ尾静脉注射。优选的，糖尿病模型成模标准：(1)STZ注射前存在胰岛素抵抗；(2)STZ注射1周后，随机血糖≥16.7mmol/L。优选的，步骤2中，恒定温度和湿度环境指的是温度22±2℃,湿度65-75％。优选的，电磁铁的宽度等于调速段的长度；如此设置能够保证工作时，电磁铁能够充分与调速段进行配合作用。本专利技术的有益效果：本专利技术的实验对象选择SD大鼠，种属纯正，是进行代谢病相关实验的理想动物材料，模型取材易得。使用专利技术采用高脂饲料喂养12周，诱导胰岛素抵抗模型，以及12周后STZ小剂量尾静脉注射诱导糖尿病动物模型的建立，该方法可以更好地模拟现如今由于饮食不当和环境因素造成的人类2型糖尿病发病特点。与其他造模相比，本专利技术在高脂饲料中添加了藏区特有的酥油，酥油是似黄油的一种乳制品，是从牛、羊奶中提炼出的脂肪，藏区人民最喜食牦牛产的酥油。产于夏、秋两季的牦牛酥油，色泽鲜黄，味道香甜，口感极佳，冬季的则呈淡黄色。将其添加入高脂饲料中，饲料味道更香，大鼠食欲更佳，利于提高大鼠摄食量，造成大鼠超重肥胖。在高原地区造模(西宁海拔)，高原地区由于空气氧含量低于平原，糖的有氧代谢受阻，无氧酵解增强，在低氧的初期，血糖升高，1-2天时开始下降，所以大鼠需要一个适应期。且采用尾静脉注射小剂量STZ造模，大鼠全部成模。附图说明图1为各组大鼠形态比较图；NG:正常对照组，DM:糖尿病组。图2为各组大鼠口服糖耐量试验、胰岛素耐量试验。具体实施方式下面通过具体实施方式进一步详细的说明：下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在本专利技术的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。在本专利技术的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本专利技术中的具体含义。本专利技术中，实验动物选择SPF级SD大鼠SPF级雄本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过高脂饮食联合STZ诱导建立SD大鼠2型糖尿病研究模型的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1，选取SPF级SD大鼠4周龄，雄性，体重为80-100g,使用普通饲料适应性喂养1周后，将大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组；其中正常对照组给予普通饲料喂养，糖尿病组给予高脂饲料喂养。/n步骤2，每日按大鼠体重的10％给予饲料喂养，恒定温度和湿度环境下自由进食饮水；/n步骤3，观察步骤2中大鼠一般状态和体重变化，高脂喂养12周后进行口服葡萄糖耐量试验、腹腔胰岛素耐量试验，判断是否存在胰岛素抵抗；/n步骤4，将糖尿病组大鼠禁食10--12h,按照STZ总剂量为25mg/kg进行尾静脉注射，正常对照组给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。STZ注射1周后，尾静脉检测大鼠随机血糖，血糖≥16.7mmol/L判断造模成功。/n

【技术特征摘要】
20191115 CN 20191112091551.一种通过高脂饮食联合STZ诱导建立SD大鼠2型糖尿病研究模型的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，选取SPF级SD大鼠4周龄，雄性，体重为80-100g,使用普通饲料适应性喂养1周后，将大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组；其中正常对照组给予普通饲料喂养，糖尿病组给予高脂饲料喂养。
步骤2，每日按大鼠体重的10％给予饲料喂养，恒定温度和湿度环境下自由进食饮水；
步骤3，观察步骤2中大鼠一般状态和体重变化，高脂喂养12周后进行口服葡萄糖耐量试验、腹腔胰岛素耐量试验，判断是否存在胰岛素抵抗；
步骤4，将糖尿病组大鼠禁食10--12h,按照STZ总剂量为25mg/kg进行尾静脉注射，正常对照组给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。STZ注射1周后，尾静脉检测大鼠随机血糖，血糖≥16.7mmol/L判断造模成功。


2.根据权利要求1所述的一种通过高脂饮食联合STZ诱导建立SD大鼠2型糖尿病研究模型的方法，其特征在于：步骤1中的普通饲料组分为：小麦10份，麸子30份，玉米面30份，豆饼2...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴穹，曹海芳，黎娅，马晓雨，张月，常秀君，韩蕙竹，何敏，解安达，胡缤文，
申请(专利权)人：青海大学，
类型：发明
国别省市：青海;63