通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的培养基和方法技术

本发明专利技术公开了一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的培养基和方法，所述培养基包括诱导培养基、增值培养基、成苗培养基；所述诱导培养基包括含有0.5mg/L～1.5mg/L 2,4‑D、0.5mg/L～1.5mg/L TDZ、500mg/L ME的MS培养基或含有0.5mg/L～1.5mg/L ZT、0.5mg/L～1.5mg/L NAA、500mg/L ME的WPM培养基；所述增值培养基、成苗培养基均包括含有0.5mg/L～1.5mg/L 6‑BA的WPM培养基。通过本发明专利技术特质的培养基利用三叶木通果实幼胚通过胚状体发生途径进行组培成功诱导出苗。

Medium and method of inducing Plantlet Regeneration of Akebia trifoliata by embryogenesis

【技术实现步骤摘要】
通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的培养基和方法
本专利技术涉及组培
，特别涉及一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的方法。
技术介绍
三叶木通是木通科，木通属落叶木质藤本植物。分布于中国河北、山西、山东、河南、陕西南部、甘肃东南部至长江流域各省区。日本有分布。生于海拔250-2000米的山地沟谷边疏林或丘陵灌丛中。三叶木通的种根、茎和果均入药，利尿、通乳，有舒筋活络之效，治风湿关节痛；果也可食及酿酒；种子可榨油。三叶木通果优良种苗的生产一般采用扦插法，但存在生根困难，成活率低，繁殖速度慢等问题。因此组培快繁方法得到了应用，申请号为“CN200910226633.3”的专利申请公开了一种三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，将三叶木通诱导产生丛生芽成培养基进行生根培养，尔后在25±2℃光照培养植株高7cm左右，丛生根培养基中取出，用解剖刀将试管苗切割成1cm左右的带腋芽的茎段生根培养，再光照植株高7cm左右，既再次光照移栽至栽培基质中进行生长。这种方法是用植物细胞遗传工程技术可极大缩短育种年限，加快育种进程，且更有目的地获得具有更理想性状的新品种。该方法主要包括外植体消毒、丛生苗的诱导、生根和炼苗移栽等环节，属于脱毒快繁体系，其体系不经过愈伤组织诱导，存在脱毒率低、繁殖效率低、年繁殖种苗数量有限等问题；且该方法为通过器官发生途径通常存在嵌合体多、遗传性状不稳定、变异率高等问题。胚状体具有形成完整植株的能力，所产的后代能很好的表现出原有母株的种性，因此通过胚状体途径是一条快捷、安全的途径。然而很多植物的胚状体诱导结果很差，或者诱导不出胚状体，因而难以通过通过胚状体途径进行三叶木通植株的再生。且目前有关利用三叶木通果实幼胚进行组培成功诱导出苗还未见相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的方法，利用幼胚通过胚状体发生途径，采用本专利技术特制的培养基，能够得到三叶木通完整植株。本专利技术是这样实现的：本专利技术的目的之一在于提供一种三叶木通的胚状体发生途径诱导植株再生的培养基，其特征在于，所述培养基包括诱导培养基、增值培养基、成苗培养基；所述诱导培养基包括含有0.5mg/L～1.5mg/L2,4-D、0.5mg/L～1.5mg/LTDZ、500mg/LME的MS培养基或含有0.5mg/L～1.5mg/LZT、0.5mg/L～1.5mg/LNAA、500mg/LME的WPM培养基；所述增值培养基、成苗培养基均包括含有0.5mg/L～1.5mg/L6-BA的WPM培养基。本专利技术的目的之二在于提供一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的方法，所述方法包括：步骤1、将三叶木通的果实经处理后切开，取出幼胚；步骤2、将所得幼胚接种于诱导培养基中于光照条件下培养获得胚状体；步骤3、将诱导出的胚状体于增值培养基中进行增殖继代培养；步骤4、转移至成苗培养基上诱导成苗；步骤5、将所得幼苗进行炼苗并移栽，获得三叶木通再生苗。所述诱导培养基、增值培养基、成苗培养基为所述的培养基。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供的一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的方法，利用幼胚在本专利技术特质的诱导培养基上可诱导出胚状体，胚状体通过继代增值可增加数量，经过成苗培养基对胚状体进行培养，诱导出苗继续培养可形成完整植株。通过本专利技术特质的培养基利用三叶木通果实幼胚进行组培成功诱导出苗。附图说明图1为实施例1幼胚诱导培养45天后得到的图片；图2为实施例1幼胚诱导培养51天后得到的胚状体图片；图3为实施例1继代增殖，一个月后得到的图片；图4是实施例1在图3的基础上继续增殖的图片；图5为实施例1在3次继续增殖培养后的图片；图6为实施例1在4次继代增殖得到的胚状体的图片；图7为实施例1在5次继代培养后得到的完整幼苗植株。具体实施方式实施例11、本实施例提供的一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的方法，包括：步骤1、将三叶木通的果实经处理后切开，取出幼胚，具体地：(1)果实预处理：每年7-8月份，收集6-7分熟的野生三叶木通果实，去除多余的叶片，干净其表面，将做完的放置在4℃冰箱保存，以延长果实的保存期限。但长期(20天上)在冰箱保存亦使幼胚水分丧失从而失去活力。(2)在超净工作台上，取无菌培养皿，培养皿为两层无菌滤纸，将整个果实用酒精泡过之后，置于酒精灯上将果实上的酒精烧干以将消毒杀菌的效果，后将果实切开，取出里面较完整的幼胚。步骤2、将所得幼胚接种于诱导培养基中于光照条件下培养获得胚状体；所述诱导培养基为：MS+1mg/L2,4-D+1mg/LTDZ+500mg/LME(麦芽提取物)，40g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH5.8。步骤3、将诱导出的胚状体于增值培养基中进行增殖继代培养；所述增值培养基为WPM+1mg/L6-BA+7.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH5.8。步骤4、转移至成苗培养基上诱导成苗；所述成苗培养基同所述增值培养基。步骤5、将所得幼苗进行炼苗并移栽，获得三叶木通再生苗。2、实验结果：图1为幼胚培养45天后得到；图2位突出团簇乳白色的胚状体；图3为继代增殖一个月后得到的图片；图4是在图二的基础上继续增殖，一个月后，可明显看出已出现幼苗；图5为3次继续增殖培养后，可见有明显的根，在原先的胚状体上冒出嫩绿的点；图6为4次继代增殖得到的胚状体；图7在5次继代培养后得到的完整幼苗植株。实施例2该实施例中除所述诱导培养基替换为：MS+0.5mg/L2,4-D+0.5mg/LTDZ+500mg/LME(麦芽提取物)，40g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH5.8。其余步骤均同实施例1。实施例3该实施例中除所述诱导培养基替换为：MS+1.5mg/L2,4-D+1.5mg/LTDZ+500mg/LME(麦芽提取物)，40g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH5.8。其余步骤均同实施例1。实施例4该实施例中除所述诱导培养基替换为：WPM+1mg/LZT+1mg/LNAA+500mg/LME，40g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH5.8。其余步骤均同实施例1。实施例5该实施例中除所述诱导培养基替换为：WPM+0.5mg/LZT+0.5mg/LNAA+500mg/LME，40g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH5.8。其余步骤均同实施例1。实施例6该实施例中除所述诱导培养基替换为：WPM+1.5mg/LZT+1.5mg/LNAA+500mg/LME，40g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH5.8。其余步骤均同实施例1。实施例7该实施例中将步骤2中增值培养基和3中的成苗培养基均替换为WPM+0.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三叶木通的胚状体发生途径诱导植株再生的培养基，其特征在于，所述培养基包括诱导培养基、增值培养基、成苗培养基；/n所述诱导培养基包括含有0.5mg/L～1.5mg/L 2,4-D、0.5mg/L～1.5mg/L TDZ、500mg/LME的MS培养基或含有0.5mg/L～1.5mg/L ZT、0.5mg/L～1.5mg/L NAA、500mg/L ME的WPM培养基；/n所述增值培养基、成苗培养基均包括含有0.5mg/L～1.5mg/L 6-BA的WPM培养基。/n

【技术特征摘要】
1.一种三叶木通的胚状体发生途径诱导植株再生的培养基，其特征在于，所述培养基包括诱导培养基、增值培养基、成苗培养基；
所述诱导培养基包括含有0.5mg/L～1.5mg/L2,4-D、0.5mg/L～1.5mg/LTDZ、500mg/LME的MS培养基或含有0.5mg/L～1.5mg/LZT、0.5mg/L～1.5mg/LNAA、500mg/LME的WPM培养基；
所述增值培养基、成苗培养基均包括含有0.5mg/L～1.5mg/L6-BA的WPM培养基。


2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述诱导培养基包括含有1mg/L2,4-D、1.5mg/LTDZ、500mg/LME的MS培养基或含有1mg/LZT、1mg/LNAA、500mg/LME的WPM培养基；所述增值培养基、成苗培养基均包括含有1mg/L6-BA的WPM培养基。


3.一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1、将三叶木通的果实经处理后切开，取出幼胚；
步骤2、将所得幼胚接种于诱导培养基中于光照条件下培养获得胚状体；
步骤3、将诱导出的胚状体于增值培养基中进行增殖继代培养；
步骤4、转移至成苗培养基上诱...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建，曹运梅，张欣然，赵振军，熊玉婷，郭丽红，李欣，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42