一种NTRK融合基因检测试剂盒制造技术

一种NTRK融合基因检测试剂盒。该试剂盒由无核酸酶的超纯去离子水、NTRK融合基因检测引物及探针混合物、14种NTRK融合基因阳性质粒混合物的阳性对照品、带有独立管盖的12连排PCR管并装有相同体积的数字PCR反应预混液、三张数字PCR芯片以及存有数字PCR校准文件的光盘组成。该试剂盒基于数字PCR平台并结合三引物、双探针方法检测NTRK融合基因以及NTRK非融合基因，能够简单快速高灵敏度地监控NTRK融合基因的种类及融合比率。

A ntrk fusion gene detection kit

【技术实现步骤摘要】
一种NTRK融合基因检测试剂盒
本技术涉及一种NTRK融合基因检测试剂盒，属于生物医学核酸检测试剂盒

技术介绍
NTRK(tropomyosim-relatedkinase，Trk)基因包括NTRK1，NTRK2，NTRK3，分别编码原肌球蛋白相关激酶TrkA，TrkB，TrkC。三者具有高度同源性，属于神经生长因子受体，与细胞增殖、分化、代谢、凋亡等密切相关。NTRK基因与其它基因的断裂重排在多种恶性肿瘤中都有发现，其中以NTRK1、NTRK3为主。NTRK与其它基因的断裂重排产生的融合基因会组成型激活Trk蛋白，导致其下游的PI3K/AKT、Ras/MAPK和PLCγ三条信号通路均处于活跃状态进而导致恶性肿瘤的发生。2018年12月，美国食品和药品管理局(FDA)批准的针对NTRK融合基因靶点的小分子抑制剂为拉罗替尼(Larotrectinib)；2019年6月，恩曲替尼(entrectinib)于日本上市，用于治疗携带NTRK融合基因的晚期或复发性实体瘤患者。《NCCN临床指南：非小细胞肺癌V2.2019》新增加检测NTRK融合基因，并且推荐拉罗替尼作为NTRK融合基因阳性所导致的转移性非小细胞肺癌患者的一线治疗选择。目前针对NTRK融合基因的检测多采用免疫组化(IHC)、荧光原位杂交(FISH)、二代测序(NGS)、RT-PCR等方法。其中RT-PCR方法以其方便、简单、低成本、结果准确等优点使其应用最为广泛，针对NTRK融合基因的RT-PCR检测方法为采用不同区段的四条引物分别扩增NTRK融合基因区域和NTRK非融合基因区域并经过与相应区段的探针杂交以得到NTRK融合基因的数量、NTRK非融合基因的数量以及NTRK融合基因在全部检测目标基因数量中所占的比例等相关数据，但是此方法所得到的检测结果的重复性、稳定性、准确性都较低。
技术实现思路
为了克服现有的NTRK融合基因检测试剂盒检测重复性、稳定性、准确性低的问题，本技术提供一种NTRK融合基因检测试剂盒，该试剂盒基于数字PCR平台并结合三条引物、双探针方法在检测NTRK融合基因数量的同时检测出NTRK非融合基因的数量，为提高NTRK融合基因的检测重复性、稳定性、准确性提供了很好的解决方案，能够简单快速高灵敏度监控NTRK融合基因的种类及融合比率。本技术解决其技术问题所采用的技术方案是：试剂盒盒体由盒体顶面(1)、盒体背面(5)、盒体右侧面(9)、盒体底面(11)、盒体前面(12)、盒体左侧面(13)连接组成，盒体顶面(1)内层具有装光盘的夹层(2)、在盒体中有海绵衬托(3)、一个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管(6)、一个装有NTRK融合基因检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(7)、一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)、12连排PCR管(15)、三张数字PCR芯片(17)；所述盒体顶面(1)内层具有装光盘的夹层(2)中放置一张光盘；所述光盘内存有数字PCR的校准文件；所述一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)中是14种NTRK融合基因阳性质粒的混合物；所述12连排PCR管为每个PCR管带有独立的管盖(16)，并分别装有相同体积的数字PCR反应预混液。其中，所述试剂盒为上开盖结构的盒体；所述的海绵衬托(3)置于盒体内，海绵衬托(3)上具有三个1.5mL离心管管孔(4)、两个1.5mL离心管备用管孔(10)、十二个PCR管管孔(14)和放置三张数字PCR芯片卡槽(18)；所述的一个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管(6)、一个装有NTRK融合基因检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(7)、一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)分别置于海绵衬托(3)的1.5mL离心管管孔(4)中；所述的带有独立管盖(16)的12连排PCR管(15)置于海绵衬托(3)的PCR管管孔(14)中；所述的三张数字PCR芯片(17)置于海绵衬托(3)的数字PCR芯片卡槽(18)中；所述的数字PCR芯片卡槽(18)长度为4厘米、宽度为7厘米、高度为7厘米。进一步地，所述盒体中的海绵衬托(3)，优选使用黑色。本技术试剂盒为基于一种新的检测方法而设计，设计简单合理、储存操作方便。本试剂盒中所用到的带独立管盖的12连排PCR管内已装有检测用的数字PCR预混液，而且12连排PCR管中的每个PCR管的管盖都是独立开合的，因此可以防止配液及加样时反应管之间的交叉污染，使得检测操作更为安全、简单、方便。所用到的盒体顶面内层放置有光盘的夹层以及光盘是本试剂盒独特的设计，是其他相关种类试剂盒所不具有的，光盘内存有数字PCR的校准文件，为检测数据的比对与归一提供了技术支持。附图说明下面结合附图和实施例对本技术进一步说明。图1是本技术的结构示意图。图2是本技术的俯视结构示意图。图中1.盒体顶面，2.盒体顶面内层放置光盘的夹层，3.海绵衬托，4.1.5mL离心管管孔，5.盒体背面，6.装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管，7.装有NTRK融合基因检测引物及探针混合物的1.5mL离心管，8.装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管，9.盒体右侧面，10.1.5mL离心管备用管孔，11.盒体底面，12.盒体前面，13.盒体左侧面，14.PCR管管孔，15.12连排PCR管，16.12连排PCR管每管独立的管盖，17.数字PCR芯片，18.数字PCR芯片卡槽。图3是使用本技术所示试剂盒进行检测后的二维图具体实施方式实施例1在图1中，试剂盒盒体顶面(1)、盒体背面(5)、盒体右侧面(9)、盒体底面(11)、盒体前面(12)、盒体左侧面(13)连接组成试剂盒盒体，盒体顶面(1)内层具有放置光盘的夹层(2)、盒体内装有海绵衬托(3)、海绵衬托(3)上分别有一个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管(6)、一个装有NTRK融合基因检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(7)、一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)、12连排PCR管(15)、三张数字PCR芯片(17)；所述的盒体顶面内层放置光盘的夹层(2)中放置有一张光盘；所述的装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)中是14种NTRK融合基因阳性质粒的混合物；所述的12连排PCR管为每个PCR管带有独立的管盖(16)，并分别装有相同体积的数字PCR反应预混液。其中，所述的盒体顶面内层放置光盘的夹层(2)中放置有一张光盘；所述光盘内存有数字PCR的校准文件。其中，所述的海绵衬托(3)，优选黑色。其中，所述的海绵衬托(3)上有三个1.5mL离心管管孔(4)和两个1.5mL离心管备用管孔(10)。所述的海绵衬托(3)上的三个1.5mL离心管管孔(4)内分别放置一个装有500μL无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管(6)、一个装有50μLNTRK融合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NTRK融合基因检测试剂盒，其特征是：试剂盒盒体由盒体顶面(1)、盒体背面(5)、盒体右侧面(9)、盒体底面(11)、盒体前面(12)、盒体左侧面(13)连接组成，盒体顶面内层具有装光盘的夹层(2)、在盒体中有海绵衬托(3)、一个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管(6)、一个装有NTRK融合基因检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(7)、一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)、12连排PCR管(15)、三张数字PCR芯片(17)；所述的盒体顶面内层具有装光盘的夹层(2)中放置一张光盘；所述光盘内存有数字PCR的校准文件；所述的一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)中是14种NTRK融合基因阳性质粒的混合物；所述的12连排PCR管为每个PCR管带有独立的管盖(16)，并分别装有相同体积的数字PCR反应预混液。/n

【技术特征摘要】
1.一种NTRK融合基因检测试剂盒，其特征是：试剂盒盒体由盒体顶面(1)、盒体背面(5)、盒体右侧面(9)、盒体底面(11)、盒体前面(12)、盒体左侧面(13)连接组成，盒体顶面内层具有装光盘的夹层(2)、在盒体中有海绵衬托(3)、一个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管(6)、一个装有NTRK融合基因检测引物及探针混合物的1.5mL离心管(7)、一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)、12连排PCR管(15)、三张数字PCR芯片(17)；所述的盒体顶面内层具有装光盘的夹层(2)中放置一张光盘；所述光盘内存有数字PCR的校准文件；所述的一个装有NTRK融合基因阳性对照品的1.5mL离心管(8)中是14种NTRK融合基因阳性质粒的混合物；所述的12连排PC...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚建，于祥春，高敏，黄慧，冯晓燕，林挺，
申请(专利权)人：艾普拜生物科技苏州有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏;32