【技术实现步骤摘要】
一种比率型表面增强拉曼光谱的金空间四面体结构的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种比率型表面增强拉曼光谱的金空间四面体结构的制备方法及其应用,属于癌症标志物的检测
技术介绍
癌症是目前导致人类死亡的重要原因之一,早期诊断及预防对于癌症的防治至关重要。癌症标志物是癌细胞产生的一类物质,当生物体受到严重破坏时,癌症标志物可能会显示异常信号。因此,癌症标志物含量的检测对于疾病的识别、早期诊断和预防具有重要意义。利用DNA进行纳米粒子的组装具有独特的优势,首先,DNA之间良好的特异性识别作用,能够精确调控纳米颗粒之间的距离及位置,由此可获得较高产率的组装体;其次,由于其生物相容性较高,使得纳米组装体被广泛使用;最后,适配体作为能够特异性识别癌症标志物的一段DNA序列,将其用于组装体中能够进行癌症标志物的检测。表面增强拉曼光谱(SERS)是在原有拉曼散射的基础上,利用距离相近的贵金属纳米材料(如金、银等)“热点”区域的电磁场增强效应,使得吸附在其表面的分子拉曼信号比非热点区域增强5-6个数量级,且这种效应会随着粒子间的距离发生变化,因此可用于癌症标志物的痕量检测。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述不足之处,提供一种比率型表面增强拉曼光谱的金空间四面体结构的制备方法及其应用,利用该组装体拉曼信号强度的变化同时检测两种癌症标志物(端粒酶和上皮细胞黏附分子)的浓度。本专利技术的技术方案,本专利技术包括金纳米粒子的合成,金纳米粒子表面修饰拉曼DNA和拉曼信标分子,金 ...
【技术保护点】
1.一种比率型表面增强拉曼光谱的金空间四面体结构的制备方法,其特征在于:其包括金纳米粒子的合成,金纳米粒子表面修饰拉曼DNA和拉曼信标分子,修饰后的金纳米粒子组装成金空间四面体结构。/n
【技术特征摘要】
1.一种比率型表面增强拉曼光谱的金空间四面体结构的制备方法,其特征在于:其包括金纳米粒子的合成,金纳米粒子表面修饰拉曼DNA和拉曼信标分子,修饰后的金纳米粒子组装成金空间四面体结构。
2.根据权利要求1所述比率型表面增强拉曼光谱的金空间四面体结构的制备方法,其特征在于步骤如下:
(1)金纳米粒子的合成:采用柠檬酸三钠还原合成法,通过控制柠檬酸三钠的加入量得到不同粒径的金纳米粒子;
在洁净锥形瓶中加入195mL超纯水和5mL4g/L的氯金酸溶液,搅拌均匀并加热煮沸,7-8min后加入5mL或2.8mL、1%的柠檬酸三钠溶液,待溶液变为亮红色后,停止加热并继续搅拌至溶液冷却至室温;向溶液中加入200μL2.5mg/mL的二水合双(对-磺酰苯基)苯基膦化二钾盐室温搅拌过夜;分别得到15nm或30nm的金纳米粒子;
(2)金纳米粒子表面修饰DNA:各取1mL30nm的金纳米粒子于两个不同的PCR管中,4500rpm离心10min,后重悬于100μL的超纯水中使用;金纳米粒子分别与DNA1及DNA3以最终摩尔比为1:25的比例混合均匀,反应4h后向体系中加入2μL5M的NaCl溶液,室温反应过夜后离心除去多余的DNA,形成Au30-DNA1、Au30-DNA3复合物;
分别取1mL15nm的金纳米粒子于三个不同的PCR管中,8500rpm离心10min,后重悬于100μL的超纯水中使用,金纳米粒子分别与DNA5、DNA6及DNA7以摩尔比为1:25的比例混合均匀,反应4h后向体系中加入2μL5M的NaCl溶液,室温反应过夜后离心除去多余的DNA,形成Au15-DNA5、Au15-DNA6、Au15-DNA7复合物;
(3)金纳米粒子-DNA复合物修饰拉曼信标分子:4-氨基苯硫酚4-ATP,4-硝基苯硫酚NTP和4-甲氧基苄硫醇MATT三种信标分子被用于该组装体中;其中Au30-DNA1、Au30-DNA3复合物上分别修饰NTP及MATT,Au15-DNA7复合物上修饰4-ATP作为内参,另外两种Au15-DNA5、Au15-DNA6上不做另外修饰;溶液中拉曼信标分子的终浓度均为5μM,信标分子加入到体系中反应过夜后离心,除去多余的信标分子,再向体系中加入超纯水恢复至原体积;
(4)金空间四面体结构的组装:将表面修饰有NTP、MATT的Au30-DNA1、Au30-DNA3复合物等体积混合均匀,并以摩尔比为1:25的比例加入DNA2和DNA4,均匀混合4h后加入2μL5MNaCl溶液,室温反应过夜得到二聚体,离心去上清并用超纯水重悬恢复至原体积;将表面修饰有4-ATP的Au15-DNA7复合物与Au15-DNA5、Au15-DNA6复合物等体积混合均匀,室温反应过夜得到三聚体,离心去上清并用超纯水重悬恢复至原体积;最后将所得到的二聚体与三聚体全部混合均匀,反应过夜形成金空间四面体结构,用透射电镜表征其结构。
3.根据权利要求2所述比率型表面增强拉曼光谱的金空间四面体结构的制备方法,其特征在于所用DNA的设计如下...
【专利技术属性】
技术研发人员:孙茂忠,郭晓,胥传来,匡华,徐丽广,吴晓玲,刘丽强,朱建平,宋珊珊,胡拥明,
申请(专利权)人:江南大学,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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