一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)取美洲黑杨鲁林1号的枝条进行水培，以萌发的新茎段作为外植体，接种于茎段不定芽诱导培养基中；(2)待外植体长出不定芽后，将其接种至不定芽继代增殖培养基中，诱导不定芽的继代增殖；(3)以不定芽继代增殖所产生的不定芽叶片为材料，接种到叶片再生不定芽培养基中，进行不定芽的诱导；(4)待不定芽长到2.5‑3.5cm时，接种至生根培养基中；(5)将生根苗进行炼苗、移栽。利用本发明专利技术的方法繁殖美洲黑杨鲁林1号，可以降低污染率，提高美洲黑杨的生物产量，并且具有很强的工厂化生产能力，可在短时间内为美洲黑杨鲁林1号的遗传转化实验提供大量优质的实验材料。

A method of tissue culture and rapid propagation of American black poplar 1

【技术实现步骤摘要】
一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法
本专利技术涉及植物细胞工程
，具体涉及一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法。
技术介绍
黑杨是杨属五大派之一，树高可达30m。椭圆形宽阔树冠。小枝近圆形，淡黄色。树皮呈现暗灰色，老时有沟裂。树叶有菱形、菱状卵圆形或者三角形，先端渐尖，基部楔形或阔楔形，少有截形，叶缘具有圆锯齿，无缘毛，叶柄近等于或稍长于叶片，侧扁，无毛。雄花序长约5-6cm，淡褐色苞片膜质，顶端有线条状的尖锐裂片，花药紫红色，子房卵圆形。硕果卵圆形，花期4-5月，果期6月。黑杨抗寒，喜光，但对干旱和盐碱的耐受程度不高，能在冲积沙质土上生长良好。黑杨木材常用于制作家具和建筑；树皮可提取单宁，并可作黄色染料；芽可药用。黑杨也是杨树育种的优良亲本之一。鲁林1号(PopulusבLulin-1’)是山东省林业科学研究院姜岳忠等历时十余年，从美洲黑杨228-379优树上采集天然杂交种子选育而成，是以欧美杨107作为对照选育出的高产优质胶合板材和纸浆材新品种，为雌株。鲁林1号的一年生苗茎秆通直，茎表面有棱角和浅凹槽，未木质化的茎无毛，茎的中上部有较密的分布不均匀的圆形或者椭圆形的皮孔，有少量分枝。叶芽呈现锥形，长0.6-0.7cm，褐色，贴近茎干。叶三角形，叶长与叶宽基本相等，叶基截形，叶端宽尖，腺体多为2个。大树干形圆满通直，树皮光滑，尖削度小，顶端优势明显，树冠阔卵形，分枝数量多，分布均匀，侧枝较细，冠幅较宽，叶小，数量多。鲁林1号已通过山东省林木新品种审定和国家林木新品种保护权审查。经过在鲁南、鲁中、鲁西和胶东西南部等地区引种示范，表现出适应性强、速生、易成活、抗病虫和干形优等优良性状，在鲁南、鲁中、鲁西和胶东西南部等地区生长良好，在比较干旱的造林地上也能适应，可望成为山东省杨树速生丰产林的首选品种。杨树扦插繁殖具有成苗周期长、受季节的影响大和生长条件不宜控制等缺点，在短时间内难以繁殖出生长状态统一的苗木。而组织培养作为一种快速繁殖技术，可以有效解决这些问题，短时间内能繁殖大量优良树种。尽管杨树的组织培养技术日趋成熟，但杨树组织培养效果的提高仍然受多个因子的影响。美洲黑杨鲁林1号，作为北方地区主栽的速生杨树品种之一，目前还未有关于建立其组织培养快速繁殖体系的报道。与其他杨树品种相比，在进行组织培养时对于各个阶段的培养基，激素比例以及激素的浓度而言存在较大差异，需要在实验过程中作出必要的调整，通过对各个因子的优化，才能获得最佳的培养效果。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法。利用本专利技术的方法繁殖美洲黑杨鲁林1号，可以提高美洲黑杨鲁林1号的生物产量。在短时间内为美洲黑杨鲁林1号的遗传转化实验提供大量优质的实验材料。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)取美洲黑杨鲁林1号的枝条进行水培，得到萌发的新茎段；以萌发的新茎段作为外植体，对外植体进行消毒处理；将消毒处理后的外植体接种于茎段不定芽诱导培养基中，培养诱导茎段不定芽分化；所述茎段不定芽诱导培养基为MS+6-BA0.3-0.7mg/L+NAA0.02-0.1mg/L+GA30.3mg/L；(2)待外植体长出不定芽后，将不定芽接种至不定芽继代增殖培养基中，诱导不定芽的继代增殖；所述不定芽继代增殖培养基为MS+6-BA0.2-0.3mg/L+NAA0.05-0.15mg/L+GA30.5mg/L；(3)待步骤(2)中的不定芽生长到2.0-3.0cm时，取叶片面积为1.5-2.0cm2的不定芽叶片为材料，接种到叶片再生不定芽培养基中，进行不定芽的诱导；所述叶片再生不定芽培养基为MS+6-BA0.2-0.3mg/L+NAA0.05-0.10mg/L+GA31.0mg/L；(5)将步骤(2)中生长到2.0-3.0cm不定芽及步骤(3)中叶片诱导产生的生长到2.5-3.5cm的不定芽分别接种至生根培养基中，进行不定根诱导；所述生根培养基为1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L；(5)将步骤(4)获得的生根苗进行炼苗、移栽。优选的，步骤(1)中，所述水培的条件为：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12h。优选的，步骤(1)中，外植体的消毒处理方法为：将外植体先用肥皂水漂洗15-20min,，然后冲洗干净；再用75％的酒精表面消毒30s，无菌水冲洗后，再用质量百分数为1％的升汞消毒9min，无菌水冲洗干净。优选的，步骤(1)中，培养诱导茎段不定芽分化的条件为：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12h。优选的，步骤(2)中，诱导不定芽的继代增殖的条件为：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12h。优选的，步骤(3)中，不定芽的诱导条件为：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12h。优选的，步骤(4)中，不定根诱导的条件为：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为14h。优选的，步骤(5)中，所述炼苗、移栽具体为：将步骤(4)获得的生根苗先在温室大棚内的苗床上炼苗3-5天，后开盖锻炼2-3天，然后从培养瓶中取出瓶苗，洗净根部的培养基，移栽到温室中的营养钵或穴盘中；栽培介质为1：1体积比混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0.1％的50％的可湿性多菌灵对栽培基质进行消毒；移栽后的前3-5天覆盖无纺布保湿，保持温室的温度为20-28℃，相对湿度为70-100％；最后除去无纺布保湿，进行正常管理，经过2-3周长出新根和新梢，当苗高达到15-20cm时，移栽到室外大田里。本专利技术的有益效果：本专利技术以美洲黑杨鲁林1号嫩茎段及诱导产生的不定芽的叶片为外植体，利用其专用培养基，成功地建立了一个有效的美洲黑杨鲁林1号离体培养再生体系，为木本植物大量组织培养快速繁殖提供了一个可参照的技术和方法。本专利技术方法具有以下优点：取材容易、变异率低、增殖倍数高的优点，培养4周增殖倍数达到10-12倍，组培苗生根率达到95％以上，炼苗成活率达到98％。利用本专利技术方法繁殖美洲黑杨鲁林1号，可以提高美洲黑杨的生物产量，具有很强的工厂化生产能力，同时为实现美洲黑杨鲁林1号的遗传转化实验提供了技术支撑为杨树基因工程的发展奠定了基础。附图说明图1：美洲黑杨鲁林1号茎段诱导不定芽产生。图2：美洲黑杨鲁林1号不定芽继代增殖。图3：美洲黑杨鲁林1号瓶苗叶片分化。图4：美洲黑杨鲁林1号不定芽生根；其中，左图为不定芽在培养基中的照片；右图为将不定芽从培养基中取出洗净后的照片。图5：美洲黑杨鲁林1号移栽苗。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)取美洲黑杨鲁林1号的枝条进行水培，得到萌发的新茎段；以萌发的新茎段作为外植体，对外植体进行消毒处理；将消毒处理后的外植体接种于茎段不定芽诱导培养基中，培养诱导茎段不定芽分化；/n所述茎段不定芽诱导培养基为MS+6-BA 0.3-0.7mg/L+NAA 0.02-0.1mg/L+GA

【技术特征摘要】
1.一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取美洲黑杨鲁林1号的枝条进行水培，得到萌发的新茎段；以萌发的新茎段作为外植体，对外植体进行消毒处理；将消毒处理后的外植体接种于茎段不定芽诱导培养基中，培养诱导茎段不定芽分化；
所述茎段不定芽诱导培养基为MS+6-BA0.3-0.7mg/L+NAA0.02-0.1mg/L+GA30.3mg/L；
(2)待外植体长出不定芽后，将不定芽接种至不定芽继代增殖培养基中，诱导不定芽的继代增殖；
所述不定芽继代增殖培养基为MS+6-BA0.2-0.3mg/L+NAA0.05-0.15mg/L+GA30.5mg/L；
(3)待步骤(2)中的不定芽生长到2.0-3.0cm时，取叶片面积为1.5-2.0cm2的不定芽叶片为材料，接种到叶片再生不定芽培养基中，进行不定芽的诱导；
所述叶片再生不定芽培养基为MS+6-BA0.2-0.3mg/L+NAA0.05-0.10mg/L+GA31.0mg/L；
(4)将步骤(2)中生长到2.0-3.0cm不定芽及步骤(3)中叶片诱导产生的生长到2.5-3.5cm的不定芽分别接种至生根培养基中，进行不定根诱导；
所述生根培养基为1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L；
(5)将步骤(4)获得的生根苗进行炼苗、移栽。


2.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)中，所述水培的条件为：培养温度为25±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12h。


3.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)中，外植体的消毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：李际红，邢世岩，桑亚林，王锦楠，国浩平，侯丽丽，王如月，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37