一种新疆紫草组培快繁方法和新疆紫草组培快繁培养基技术

本发明专利技术提供了一种新疆紫草组培快繁培养基，它包括芽诱导培养基、扶壮培养基和生根培养基；所述芽诱导培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.08‑0.12mg、6‑糠氨基嘌呤1.8‑2.2mg、6‑苄氨基嘌呤0.4‑0.6mg、硝酸银0.07‑0.1mg、蔗糖29‑51g和琼脂5‑9g；所述扶壮培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.1‑0.3mg、6‑糠氨基嘌呤0.4‑0.6mg、硝酸银0.07‑0.1mg、蔗糖9‑31g和琼脂5‑9g；所述生根培养基是在改良1/2LS培养基的基础上，每升还包含：吲哚丁酸0.4‑0.6mg、萘乙酸0.4‑0.6mg、活性炭0.8‑1.2g、蔗糖9‑31g和琼脂5‑9g；所述改良LS培养基，是LS培养基硝酸铵用量减少825m/L的培养基。本发明专利技术能同时适应新疆紫草芽尖和下胚轴为外植体的快繁，在新疆紫草快繁领域具有较好的应用前景。

A method and medium for tissue culture and rapid propagation of Arnebia euchroma

【技术实现步骤摘要】
一种新疆紫草组培快繁方法和新疆紫草组培快繁培养基
本专利技术涉及一种新疆紫草快繁方法和新疆紫草组培快繁培养基，属于药用植物组织培养

技术介绍
新疆紫草〔Arnebiaeuchroma(Royle)Johnst〕又称软紫草，为紫草科(BoraginaceaeJuss.)，软紫草属(ArnebiaForsk.)多年生草本植物，在我国分布于新疆的天山南北坡和西藏的西部。属于中国二级保护植物，为传统的中药材，以根入药，为中医临床常用清热解毒、凉血止血药物。现代药理研究表明新疆紫草具有抑菌抗炎、抗病毒、护肝、抗HIV、抗肿瘤、抗生育延缓衰老以及免疫调节等药理作用。同时还是世界上常用的天然植物红色素中性能最好的一种，已被联合国食品添加剂法典委员会列入食品、化妆品、药品添加剂范围。但随着需求量的大幅提高以及市场价格的提高，近年来新疆紫草遭受疯狂采挖，生态环境被严重破坏。此外，新疆紫草存在对生境要求严格，结籽率低，种子发芽率低，苗期枯萎，幼苗移栽困难，且生长周期长，五年开花结果等问题。因此保护新疆紫草种质资源、提供稳定、可持续利用的药材资源刻不容缓。对新疆紫草进行人工快速繁殖是解决资源缺乏的重要途径之一。新疆紫草组织培养再生体系的建立，主要有两种途径：间接器官发生途径和直接器官发生途径。间接器官发生途径通过选取外植体先诱导愈伤，再由愈伤分化成苗；其优点是材料利用率高，缺点是诱导率低、培养周期长、变异率高。直接器官发生途径则是选取外植体，使其直接诱导出芽和根，成为新苗；优点是诱导率高、培养周期短、变异率低，缺点是目前的材料利用率低——仅见茎尖作为外植体的报道。
技术实现思路
本专利技术为了提高新疆紫草快繁直接器官发生途径的材料利用率，提供了一套新疆紫草的快繁体系，其中包括新疆紫草组培快繁培养基及一种新疆紫草组培快繁方法。该体系可以普适性地利用新疆紫草无菌苗的下胚轴和芽尖作为外植体。本专利技术提供了一种新疆紫草组培快繁培养基，它包括芽诱导培养基、扶壮培养基和生根培养基；所述芽诱导培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.08-0.12mg、6-糠氨基嘌呤1.8-2.2mg、6-苄氨基嘌呤0.4-0.6mg、硝酸银0.07-0.1mg、蔗糖29-51g和琼脂5-9g；所述扶壮培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.1-0.3mg、6-糠氨基嘌呤0.4-0.6mg、硝酸银0.07-0.1mg、蔗糖9-31g和琼脂5-9g；所述生根培养基是在改良1/2LS培养基的基础上，每升还包含：吲哚丁酸0.4-0.6mg、萘乙酸0.4-0.6mg、活性炭0.8-1.2g、蔗糖9-31g和琼脂5-9g；所述改良LS培养基，是LS培养基硝酸铵用量减少825m/L的培养基。进一步地，所述芽诱导培养基，每1L包含：氯化钙332.02mg、磷酸二氢钾170mg、硝酸钾1900mg、硫酸镁180.54mg、硝酸铵825mg、六水氯化钴0.025mg、五水硫酸铜0.025mg、FeNaEDTA36.7mg、硼酸6.2mg、碘化钾0.83mg、一水硫酸锰16.9mg、二水钼酸钠0.25mg、七水硫酸锌8.6mg、肌醇100mg、硫胺HCl0.4mg、萘乙酸0.1mg、6-糠氨基嘌呤2mg、6-苄氨基嘌呤0.5mg、硝酸银0.08mg、蔗糖40g和琼脂7g。进一步地，所述扶壮培养基，每1L包含：氯化钙332.02mg、磷酸二氢钾170mg、硝酸钾1900mg、硫酸镁180.54mg、硝酸铵825mg、六水氯化钴0.025mg、五水硫酸铜0.025mg、FeNaEDTA36.7mg、硼酸6.2mg、碘化钾0.83mg、一水硫酸锰16.9mg、二水钼酸钠0.25mg、七水硫酸锌8.6mg、肌醇100mg、硫胺HCI0.4mg、萘乙酸0.2mg、6-糠氨基嘌呤0.5mg、硝酸银0.08mg、蔗糖20g和琼脂7g。进一步地，所述生根培养基，每1L包含：氯化钙166.01mg、磷酸二氢钾85mg、硝酸钾950mg、硫酸镁90.27mg、硝酸铵412.5mg、六水氯化钴0.0125mg、五水硫酸铜0.0125mg、FeNaEDTA18.35mg、硼酸3.1mg、碘化钾0.415mg、一水硫酸锰8.45mg、二水钼酸钠0.0125mg、七水硫酸锌4.3mg、肌醇50mg、硫胺HCl0.2mg、吲哚丁酸0.5mg、萘乙酸0.5mg、活性炭1g、蔗糖20g和琼脂6g。前述的快繁培养基，它还包括用于无菌苗培养的无菌苗培养基。进一步地，所述无菌苗培养基为：每升含有5.5g琼脂粉和1g活性炭的1/2MS培养基。本专利技术还提供了一种新疆紫草组培快繁方法，它是取新疆紫草无菌苗，使用前述的快繁培养基作为培养基的组培方法。进一步地，前述新疆紫草组培快繁方法，包括以下步骤：1)丛生芽诱导：从无菌苗上切取外植体，接种于前述芽诱导培养基上，诱导出芽。2)壮苗：将丛生芽切分成单株的无根组培苗，转入前述扶壮培养基中，进行壮苗。3)生根：经扶壮的组培苗接入前述生根培养基中，诱导生根。进一步地，步骤1)的外植体是芽尖或下胚轴中的一种或两种。更进一步地，所述外植体是通过前述无菌苗培养基培养得到的。本专利技术由于优化了LS培养基中硝酸铵的用量，结合合适的植物激素配比，能同时适应新疆紫草芽尖和下胚轴为外植体的快繁。本专利技术增殖效果佳，平均每个外植体在芽诱导培养基培养30天可生成10.5个芽，丛生芽切下的单芽再次诱导，其增殖倍数可达5倍。另外，本专利技术利用了直接器官发生途径，进一步缩短培养周期，并降低了紫草材料的变异率。本专利技术可以克服目前新疆紫草快繁不能使用芽尖和下胚轴同时作为外植体的问题，为新疆紫草的快繁提供了比现有技术更优的方法，在新疆紫草资源开发利用上具有较好的前景。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为由带根下胚轴诱导形成的丛芽。图2为由茎尖增殖的丛芽。图3为经过扶壮培养后的苗。图4为生根后的再生植株。具体实施方式培养基注释：1.LS培养基为：每1L含有氯化钙332.02mg、磷酸二氢钾170mg、硝酸钾1900mg、硫酸镁180.54mg、硝酸铵1650mg、六水氯化钴0.025mg、五水硫酸铜0.025mg、FeNaEDTA36.7mg、硼酸6.2mg、碘化钾0.83mg、一水硫酸锰16.9mg、二水钼酸钠0.25mg、七水硫酸锌8.6mg、肌醇100mg、硫胺HCI0.4mg的培养基。2.MS培养基为：在LS培养基的基础上，加上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.新疆紫草组培快繁培养基，其特征在于：它包括芽诱导培养基、扶壮培养基和生根培养基；/n所述芽诱导培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.08-0.12mg、6-糠氨基嘌呤1.8-2.2mg、6-苄氨基嘌呤0.4-0.6mg、硝酸银0.07-0.1mg、蔗糖29-51g和琼脂5-9g；/n所述扶壮培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.1-0.3mg、6-糠氨基嘌呤0.4-0.6mg、硝酸银0.07-0.1mg、蔗糖9-31g和琼脂5-9g；/n所述生根培养基是在改良1/2LS培养基的基础上，每升还包含：吲哚丁酸0.4-0.6mg、萘乙酸0.4-0.6mg、活性炭0.8-1.2g、蔗糖9-31g和琼脂5-9g；/n所述改良LS培养基，是LS培养基硝酸铵用量减少825m/L的培养基。/n

【技术特征摘要】
1.新疆紫草组培快繁培养基，其特征在于：它包括芽诱导培养基、扶壮培养基和生根培养基；
所述芽诱导培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.08-0.12mg、6-糠氨基嘌呤1.8-2.2mg、6-苄氨基嘌呤0.4-0.6mg、硝酸银0.07-0.1mg、蔗糖29-51g和琼脂5-9g；
所述扶壮培养基是在改良LS培养基的基础上，每升还包含：萘乙酸0.1-0.3mg、6-糠氨基嘌呤0.4-0.6mg、硝酸银0.07-0.1mg、蔗糖9-31g和琼脂5-9g；
所述生根培养基是在改良1/2LS培养基的基础上，每升还包含：吲哚丁酸0.4-0.6mg、萘乙酸0.4-0.6mg、活性炭0.8-1.2g、蔗糖9-31g和琼脂5-9g；
所述改良LS培养基，是LS培养基硝酸铵用量减少825m/L的培养基。


2.如权利要求1所述的快繁培养基，其特征在于：所述芽诱导培养基，每1L包含：氯化钙332.02mg、磷酸二氢钾170mg、硝酸钾1900mg、硫酸镁180.54mg、硝酸铵825mg、六水氯化钴0.025mg、五水硫酸铜0.025mg、FeNaEDTA36.7mg、硼酸6.2mg、碘化钾0.83mg、一水硫酸锰16.9mg、二水钼酸钠0.25mg、七水硫酸锌8.6mg、肌醇100mg、硫胺HCl0.4mg、萘乙酸0.1mg、6-糠氨基嘌呤2mg、6-苄氨基嘌呤0.5mg、硝酸银0.08mg、蔗糖40g和琼脂7g。


3.如权利要求1所述的快繁培养基，其特征在于：所述扶壮培养基，每1L包含：氯化钙332.02mg、磷酸二氢钾170mg、硝酸钾1900mg、硫酸镁180.54mg、硝酸铵825mg、六水氯化钴0.025mg、五水硫酸铜0.025mg、FeNaEDTA36.7mg、硼酸6.2mg、碘化钾0.83mg、一水硫酸锰16.9mg、二水钼酸钠0.25mg、七水硫...

【专利技术属性】
技术研发人员：张利，胡佳，姜媛媛，倪苏，佘启惠，王龙，魏良益，侯世勇，
申请(专利权)人：四川农业大学，四川益利源科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51