一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法技术

本发明专利技术提供一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法，包括共价交联、变性处理、溶液置换、免疫共沉淀和质谱分析步骤。本发明专利技术通过变性处理步骤破坏蛋白三维结构而使肽链散开，以减少肽链的空间位阻效应，可以使蛋白质复合体更好地被特异性抗体识别。而且，由于变性处理，埋藏于肽链疏水中心的抗原决定簇暴露出来作为线性表位，可以采用针对线性表位的抗体进行免疫共沉淀，为免疫共沉淀提供了新颖的思路。本发明专利技术的检测方法有利于开展蛋白质复合体和蛋白质相互作用的研究。

A method for detecting protein complexes in biological samples

【技术实现步骤摘要】
一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法
本专利技术属于生化分析
，尤其属于蛋白质分析
，具体涉及一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法，该方法可以研究蛋白质相互作用。
技术介绍
生物体内存在众多的蛋白质(包括酶类)，各种蛋白质以及蛋白质之间的相互作用，对于维持生物体的正常生理功能都起到重要的作用。蛋白质相互作用是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体的过程。蛋白质相互作用涉及几乎所有的生命活动，包括DNA的复制与转录、蛋白质的合成与分泌、信号转导和代谢等等。而且，许多具有重要功能的蛋白质分子常以二聚体、三聚体或寡聚体的形式发挥作用，这些蛋白间的相互作用对其生理功能的实现十分重要。研究蛋白相互作用，不仅可以从分子水平上揭示蛋白质的功能，而且对于研究生物体的生长、发育、分化和凋亡等生命活动规律至关重要，为探讨重大疾病的机理、疾病治疗、疾病预防和新药开发提供重要的理论基础。研究蛋白质结构与相互作用的传统技术包括核磁共振技术、X射线晶体衍射技术等，对于蛋白质的纯度、结晶性和绝对量均有比较高的要求，限制了其广泛应用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法，所述蛋白质复合体包含目标蛋白和与所述目标蛋白相互作用的结合蛋白，所述方法包括以下步骤：/n共价交联：用化学交联剂使所述蛋白质复合体在非蛋白质变性条件下发生共价交联反应，以使所述蛋白质复合体稳定化；/n变性处理：将所述蛋白质复合体进行蛋白变性处理，以破坏维持蛋白三维结构的弱相互作用力；/n溶液置换：使经变性处理的蛋白质复合体处于适合进行免疫共沉淀的溶液体系中；/n免疫共沉淀：使针对所述目标蛋白的特异性抗体与经过溶液置换处理的所述蛋白质复合体进行免疫共沉淀，以捕获所述蛋白质复合体，并通过捕获所述特异性抗体使所述蛋白质复合体与所述生物样本分离，并将所述特异...

【技术特征摘要】
1.一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法，所述蛋白质复合体包含目标蛋白和与所述目标蛋白相互作用的结合蛋白，所述方法包括以下步骤：
共价交联：用化学交联剂使所述蛋白质复合体在非蛋白质变性条件下发生共价交联反应，以使所述蛋白质复合体稳定化；
变性处理：将所述蛋白质复合体进行蛋白变性处理，以破坏维持蛋白三维结构的弱相互作用力；
溶液置换：使经变性处理的蛋白质复合体处于适合进行免疫共沉淀的溶液体系中；
免疫共沉淀：使针对所述目标蛋白的特异性抗体与经过溶液置换处理的所述蛋白质复合体进行免疫共沉淀，以捕获所述蛋白质复合体，并通过捕获所述特异性抗体使所述蛋白质复合体与所述生物样本分离，并将所述特异性抗体从所述蛋白质复合体洗脱，得到纯化的所述蛋白质复合体；
质谱分析：将纯化的所述蛋白质复合体进行酶解形成肽段，然后进行质谱分析。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白质复合体位于细胞内，所述共价交联反应在所述细胞内原位进行；或者，所述蛋白质复合体在细胞提取液中，所述共价交联反应在所述细胞提取液中进行。


3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：张可人，任艳，张宇星，林志龙，陈秋实，李思奇，潘火珍，王欣然，张元良，
申请(专利权)人：深圳华大临床检验中心，
类型：发明
国别省市：广东;44