小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法，包括：(1)配制完全培养基(2)颈椎脱位6–9周的小鼠；(3)取小鼠股骨及胫骨，吹出小鼠骨髓细胞，重复多次，直至骨无色，吹散后收集单细胞悬液，离心，弃去上清；(4)在细胞沉淀中加入红细胞裂解液处理；(5)迅速加入完全培养基中和，离心，弃去上清；(6)加入完全培养基到离心细胞沉淀中，使之重悬；(7)将重悬细胞接种至细菌培养皿中培养；(8)4小时后，将悬浮细胞吸出，重新接种在含诱导剂的完全培养基的细胞培养皿中，此为第1天；(9)在第3天的时候，对细胞进行半量换液，此后隔天换液至第7天，进行检测。本发明专利技术提供了一种简单、经济、快速的小鼠骨髓巨噬细胞分离方法。

Preparation of mouse bone marrow macrophages

【技术实现步骤摘要】
小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法
本专利技术涉及细胞培养
，更具体地，涉及小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法。
技术介绍
巨噬细胞是先天性和适应性免疫反应的关键组成部分，并且由于其强大的吞噬病原微生物活性，它们是抵御外来入侵者的第一道防线。巨噬细胞广泛分布于全身，存在于淋巴器官，肝脏，肺，胃肠道，中枢神经系统，骨骼和皮肤中。由于他们的重新分配，参与了广泛的生理和病理过程。巨噬细胞是高度通用的细胞，能够识别微环境改变并维持组织稳态。许多病原体已经进化出通过巨噬细胞作为特洛伊木马来生存，复制、感染人类和动物并在全身繁殖的机制。最近对进化、遗传、宿主-病原体相互作用的生化方面重新引起了对巨噬细胞的广泛关注。从小鼠组织中分离常驻巨噬细胞产率低且程序复杂，这对于许多功能性巨噬细胞的获得和研究来说困难重重，同时需要大量相对均一的细胞。这些都制约了原代巨噬细胞的相关研究。而一种重要且有效的替代方法就是用适当的生长因子在体外培养骨髓细胞，以此从骨髓前体细胞分化成大量巨噬细胞。但是制备小鼠骨髓来源的巨噬细胞存在操作复杂，制备率低，涉及试剂较多和周期长等制备问题。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法，所述制备方法包括：/n(1)配制含有10％胎牛血清的DMEM培养基，得到完全培养基，将小鼠成纤维细胞L929细胞培养上清和完全培养基放入水浴锅中温育；/n(2)颈椎脱位处死6–9周的小鼠，在75％乙醇中浸泡2-3分钟；/n(3)无菌手术剪剥除小鼠腿部皮肤及肌肉，剪取小鼠股骨及胫骨，刮除骨上的肌肉及筋膜，用含2％青链霉素的磷酸盐缓冲液漂洗骨表面；/n(4)用手术剪剪除股骨及胫骨两端，吸取DMEM培养基，将注射器针头插入股骨及胫骨骨髓腔，吹出骨髓，重复多次，直至股骨及胫骨无色，吹散后收集单细胞悬液，转入离心管，离心，弃去上清；/n(5)在离心细胞沉淀中加入3mL...

【技术特征摘要】
1.一种小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法，所述制备方法包括：
(1)配制含有10％胎牛血清的DMEM培养基，得到完全培养基，将小鼠成纤维细胞L929细胞培养上清和完全培养基放入水浴锅中温育；
(2)颈椎脱位处死6–9周的小鼠，在75％乙醇中浸泡2-3分钟；
(3)无菌手术剪剥除小鼠腿部皮肤及肌肉，剪取小鼠股骨及胫骨，刮除骨上的肌肉及筋膜，用含2％青链霉素的磷酸盐缓冲液漂洗骨表面；
(4)用手术剪剪除股骨及胫骨两端，吸取DMEM培养基，将注射器针头插入股骨及胫骨骨髓腔，吹出骨髓，重复多次，直至股骨及胫骨无色，吹散后收集单细胞悬液，转入离心管，离心，弃去上清；
(5)在离心细胞沉淀中加入3mL红细胞裂解液，迅速吹散细胞沉淀，20s后加入10mL完全培养基中和，离心，弃去上清；
(6)将重悬细胞接种至...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾瑾，王玉炯，史客松，马臣杰，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：宁夏;64