miRNA在治疗心肌肥厚中的应用制造技术

本发明专利技术涉及miRNA在治疗心肌肥厚中的应用，具体的，所述的miRNA为hsa‑miR‑15a‑5p/hsa‑miR‑16‑5p，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。所述的心肌肥厚指：由遗传、高血压、心肌梗塞、瓣膜病变等原因造成心脏负荷过重而导致的，以心室肌增厚，室腔变窄为主要特征的病理生理过程。本发明专利技术还涉及装载了hsa‑miR‑15a‑5p/hsa‑miR‑16‑5p的复合物在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，所述的复合物为CHO‑PGEA‑核酸复合体。

【技术实现步骤摘要】
miRNA在治疗心肌肥厚中的应用
本专利技术属于医药生物
，具体而言，涉及miRNA在治疗心肌肥厚中的应用。
技术介绍
心血管疾病仍然是导致死亡的主要原因，其发病率和死亡率逐年递增。心脏通过多种结构改变(通常称为心脏重塑)对由心肌梗塞或持续压力超负荷引起的伤害作出反应。在细胞水平上，这些改变包括心肌肥厚，心肌细胞凋亡，调节能量代谢的基因表达等变化。其中心肌肥厚是高血压心脏病、肥厚型心肌病和其他心血管疾病的主要病理过程。持续性心肌肥厚会导致心力衰竭以及猝死，这是心血管疾病的独立危险因素。一般的，心肌肥厚指：由遗传、高血压、心肌梗塞、瓣膜病变等原因造成心脏负荷过重而导致的，以心室肌增厚，室腔变窄为主要特征的病理生理过程。典型的心肌肥厚表现为心室肌肥厚，多在左心室，以室间隔为甚，偶尔可呈同心性肥厚。同样的，一般左室心肌肥厚可以分为遗传性和获得性这两类。遗传性左室肥厚，包括基因突变和原发性肥厚型心肌病的全身性疾病累及心脏的继发性心肌病。获得性左室肥厚主要致病因素包括高血压病，其他还包括各种嗜铬细胞瘤、生长激素过多、主动脉及主动脉瓣病变及甲状旁腺功能亢进等内分泌疾病、心肌淀粉样病变的浸润性心肌病等。尽管大量研究显示多个信号分子参与心肌肥厚，但是除了ARB等药物，基于动物实验发现的多个靶点并未成功转化到临床实践中，这可能是源于人和动物的巨大差异而导致药物临床效果较差。微小RNA(miRNA)作为一类新的内源性、短的、非编码RNA，在调节许多重要的生物学功能中起重要作用。有证据表明，miRNA的表达改变与病理性肥厚和心力衰竭有关，因此，将miRNA靶向作为一种治疗心血管疾病的疗法是存在研究和应用潜力的。我们从临床心肌肥厚病人血清miRNAs出发，寻找心肌肥厚相关miRNAs，发现hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p在心肌肥厚病人中表达量显著下降，而且对心肌肥厚具有诊断和预后价值。因此，进一步评价hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p在相关疾病的治疗中的效果，变得十分必要。
技术实现思路
本专利技术首先涉及一组miRNA在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，所述的miRNA为hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p，其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。本专利技术还涉及一组miRNA在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，所述的miRNA的核苷酸序列结构与如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列具有95％以上的同源性。所述的心肌肥厚指：由遗传、高血压、心肌梗塞、瓣膜病变等原因造成心脏负荷过重而导致的，以心室肌增厚，室腔变窄为主要特征的病理生理过程。本专利技术还涉及使用所述hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p治疗心肌肥厚的方法，所述的方法包括：向患者施用治疗有效量的hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p分子。本专利技术还涉及装载了miRNA的复合物在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，所述的miRNA为hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p，其核苷酸序列结构分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，所述的复合物为CHO-PGEA-核酸复合体。本专利技术还涉及装载了miRNA的复合物在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，所述的miRNA的核苷酸序列结构与如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列具有95％以上的同源性，所述的复合物为CHO-PGEA-核酸复合体。本专利技术的有益效果在于：通过基础实验揭示hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p表达变化和调控心肌肥厚的分子机制，并利用本实验室已报道的一种新型可递送核酸分子的纳米材料胆固醇(CHO)封端的乙醇胺-胺化聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯)(CHO-PGEA)导入hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p进入心脏阻止心肌肥厚和心衰发生。。附图说明图1、经CHO-PEGA阳离子载体递送hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p进入心肌细胞和心脏组织。1A-1B，CHO-PEGA-mirNC,CHO-PEGA-hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p体外转染心肌细胞；原位杂交和qRT-PCR显示mirNC与hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p在心肌细胞(CMs)中的表达水平。1C-1D，心肌细胞转染CHO-PEGA-mirNC,CHO-PEGA-hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p，分别给予促肥厚刺激PE和rIGF1，免疫荧光显示CHO-PEGA-hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p抑制心肌细胞肥大。图2、体内补充hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p能完全抑制TAC诱导的心肌肥厚、改善心肌脂肪酸氧化。2A，WT小鼠行TAC术后1周，分别给予CHO-PEGA-mirNC,CHO-PEGA-hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p。2B，检测TAC术后小鼠体内mirNC、hsa-miR-15a-5p/hsa-miR-16-5p的表达水平(q-PCR)。2C，TAC术后0周、2周和4周M-型超声心动图图像。2D-2E，TAC术后0-4周小鼠射血分数(EF)，室间隔厚度(IVSD)统计值。2F，心脏大体图和心脏质量/体重/胫骨长度比值(HW/BW/Tibiallength)统计。2G，心脏组织病理切片和心脏纤维化面积与左室总面积比值统计。2H，心脏组织切片麦芽凝集素(WGA)染色以及心肌细胞面积统计。2I-J，TAC术后4周小鼠心脏中insulin/IGF1信号蛋白表达情况。具体实施方式实验动物、试剂及试剂盒、仪器实验动物无特定病原体(SpecificPathogenFree，SPF)级雄性野生型(WildType，WT)C57BL/6J背景小鼠购自北京华阜康生物科技有限公司(中国北京)。所有小鼠饲养在北京市心肺血管疾病研究所动物房受控温度下的SPF级环境中，并可自由获取食物和水。所有实验动物均使用10-12周龄雄性WT小鼠，体重控制在20-25g之间。动物实验方案由首都医科大学动物护理和使用委员会批准，且符合美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth,NIH)制定的《实验动物管理及使用指南》(NIH出版物第85-23号，2011年修订)。尽管没有进行先验功效分析，但为了遵守动物福利法规，使用了有限数量的动物。实验数字基于先前使用的动物模型的经验。在治疗结束时，通过戊巴比妥(200mg/kg，腹膜内注射)对小鼠实施安乐死。生化试剂及试剂盒名称及供应商见下表1表1、生化试剂及试剂盒名称及供应商实验仪器设备名称及供应商见下表2...

【技术保护点】
1.一组miRNA在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，其特征在于，所述的miRNA为hsa-miR-15a-5p或hsa-miR-16-5p，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一组miRNA在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，其特征在于，所述的miRNA为hsa-miR-15a-5p或hsa-miR-16-5p，其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。


2.一组miRNA在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，其特征在于，所述的miRNA的核苷酸序列与如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示的核苷酸序列相比，具有95％以上的同源性。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的心肌肥厚指：由遗传、高血压、心肌梗塞、瓣膜病变等原因造成心脏负荷过重而导致的，以心室肌增厚，室腔变窄为主要特征的病理生理过程。


4.一种装载了miRNA的复合物在制备治疗心肌肥...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜杰，李玉琳，许晨，郝文静，
申请(专利权)人：北京市心肺血管疾病研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11