一种烟草黑胫病抗性的苗期鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种烟草黑胫病抗性的苗期鉴定方法，从感病烟茎上分离病原菌，经纯化、培养后得到黑胫病接种体。将接种体接种至待测烟苗的茎基部，并分别于接种后的第５天、第７天和第１０天各记录一次病指，以三次病指的平均值作为测试品种的抗性指标。本发明专利技术率先实现了用苗期鉴定结果替代传统大田鉴定结果，有效避免外部环境对鉴定结果的影响，提高了烟草黑胫病抗性鉴定的准确性。该方法从育苗到鉴定完成只需６５天左右，大幅度地缩短了鉴定时间。其操作简便，成本低廉，鉴定结果真实可靠，具有良好的市场应用前景。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物抗病性鉴定
，具体涉及烟草黑胫病抗性的鉴定，特别是涉及一种对烟草黑胫病抗性进行苗期鉴定的方法。
技术介绍
烟草黑胫病，俗称“腰烂”、“穿大褂”、“发瘟”、“地下症”等，是一种分布广泛、危害严重的烟草病害。1896年首次发现于印尼的爪哇，1924年以后，全世界温带、亚热带和热带的产烟区都有该病报道，至今只有津巴布韦尚无记载。1950年我国在黄淮烟区首次发现烟草黑胫病。目前，我国平均每年的发病作物面积高达76373hm2，直接经济损失超过1.23亿元人民币。因此，如何提高现有烟草品种的抗病能力，培育出具有高抗病能力的烟草品种，就成为目前该领域研究的热点。 作为品种选育的关键，现有的烟草抗性鉴定方法主要有室内离体叶片接种法和自然诱发抗性鉴定法。室内离体叶片接种法虽然简单易行，但是其鉴定的结果只能反映离体叶片对病害的抗扩展能力，无法反映品种的实际抗性，只能作为抗性划分的参考指标。自然诱发抗性鉴定方法虽然可以反映品种的自然抗病能力，但是该方法易受种植条件和气候的影响，同一品种在不同烟区鉴定的结果会存在较大差异。同时，由于烟草黑胫病对温湿度条件非常敏感，只有在高温、高湿环境下(28～32℃、相对湿度80％以上)才能迅速蔓延。当测试年份间的环境条件不利于病害发生时，该方法无法得到准确地测定结果。 随后出现的大田病圃人工诱发鉴定方法，虽然通过建立病圃，人工定量接种病原菌，模拟自然发病条件等手段提高了测试的准确性，但是依然无法从根本上解决外部环境对鉴定结果的影响。同时，病原菌接种的量及接种时间等因素都会对最终的结果产生影响。因此，该方法还存在鉴定品种及数量有限，鉴定结果易发生波动等问题。而且该方法从育苗到鉴定的完成需要将近195天，鉴定时间过长。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种烟草黑胫病抗性的苗期鉴定方法，用苗期鉴定结果替代传统大田鉴定结果，避免外部环境对鉴定结果的影响，提高烟草黑胫病抗性鉴定的准确性，缩短鉴定时间。 本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现。 一种烟草黑胫病抗性的苗期鉴定方法，包括以下顺序的步骤 1.病原菌分离 在基础培养基中加入利福平原液，制成利福平培养基备用；采集烟草黑胫病症状典型的感病烟茎，取病茎表皮疑病组织数块，切成长1～2cm的小块，置于利福平培养基上，经培养、纯化后得到烟草黑胫病菌丝体，在室温条件下，保存于灭菌蒸馏水中备用； 所述的基础培养基为燕麦培养基。 所述的利福平培养基中利福平原液的体积百分比含量为1.3％。 2.黑胫病接种体的制备 将烟草黑胫病菌丝体移入燕麦培养液中培养5～7天后，转入菌谷培养基上培养18～20天得到黑胫病接种体； 所述的菌谷培养基的制作方法为将谷子浸泡6小时后用清水洗净，淘尽干瘪空壳谷粒，煮至谷粒炸开成半开花状，冷却晾至谷子含水量为50％～60％后分装入三角瓶中，并在115℃下高压灭菌1小时即得； 三角瓶中装入的谷粒量以不超过3/4瓶为宜； 3.病圃设计及管理 将苗龄45～55天的待鉴定烟苗移栽至温室病圃，烟苗在病圃内随机排列，设3次重复，每重复植烟10株，按常规温室管理技术进行管理；以小黄金1025为感病对照，红花大金元为感病辅助对照，金星6007为中抗对照，革新3号为抗病对照； 4.菌谷接种 烟苗移栽5～7天后，将经步骤(2)培养得到的接种体接种至待测烟苗的茎基部，接种量为0.5g/株；接种后立即覆土并灌水15～20cm，保持24～48小时。 5.鉴定与分级 在温室病圃中，分别于接种后的第5天、第7天和第10天各记录一次病指，以三次病指的平均值作为测试品种的抗性指标；进而按国家标准对鉴定品种进行分级。 本专利技术率先提出一种具有实用价值的烟草黑胫病苗期鉴定方法，实现了用苗期鉴定结果替代传统大田鉴定结果，有效避免外部环境对鉴定结果的影响，提高了烟草黑胫病抗性鉴定的准确性。试验表明，从育苗到鉴定完成只需65天左右，大幅度地缩短了鉴定时间。该方法操作简便，成本低廉，鉴定结果真实可靠，具有良好的市场应用前景。 附图说明 图1为不同抗性品种接种黑胫病5、7、10天的病指变化趋势图。 具体实施例方式 下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的说明，但他们不是对本专利技术的限定。 实施例1 取医用利福平胶囊21粒加95％乙醇100ml，并加入1NNaOH数滴至溶解，制成3000ug/ml(利福平含量)的利福平原液，置于4℃冰箱中保存。在每150ml燕麦培养基中加入2ml利福平原液混合均匀，制成利福平培养基备用。采集烟草黑胫病症状典型的感病烟茎，取病茎表皮疑病组织数块，切成长1cm的小块，置于利福平培养基上，经培养、纯化后得到烟草黑胫病菌丝体，在室温条件下，保存于灭菌蒸馏水中备用。将谷子浸泡6小时后用清水洗净，淘尽干瘪空壳谷粒，煮至谷粒炸开成半开花状，冷却晾至谷子含水量为50％后分装入500ml三角瓶中，装入的谷粒量以不超过500ml刻度线为宜，在115℃下高压灭菌1小时制得菌谷培养基备用。将烟草黑胫病菌丝体移入燕麦培养液中培养5天后，再转入菌谷培养基上培养18天得到黑胫病接种体。将苗龄50天的待鉴定烟苗移栽至温室病圃，烟苗在病圃内随机排列，设3次重复，每重复植烟10株，按常规温室管理技术进行管理。以小黄金1025为感病对照，红花大金元为感病辅助对照，金星6007为中护对照，革新3号为抗病对照。烟苗移栽5天后，将接种体接种至待测烟苗的茎基部，接种量为0.5g/株。接种后立即覆土并灌水15cm，保持24小时。在温室病圃中，分别于接种后的第5天、第7天和第10天各记录一次病指，以三次病指的平均值作为测试品种的抗性指标。按国家行业标准YC/T39-1996将鉴定品种抗性划分为四级抗病(R)病指25以下；中抗(MR)；病指在25.1-50.0；中感(MS)病指在50.1-75.0；感病(S)病指75以上。 实施例2 重复实施例1，有以下不同点烟草黑胫病菌丝体在燕麦培养液中培养6天。 实施例3 重复实施例1，有以下不同点烟草黑胫病菌丝体在燕麦培养液中培养7天。 实施例4 重复实施例1，有以下不同点烟草黑胫病菌丝体在菌谷培养基中培养19天。 实施例5 重复实施例1，有以下不同点烟草黑胫病菌丝体在菌谷培养基中培养20天。 实施例6 重复实施例1，有以下不同点将苗龄45天的待鉴定烟苗移栽至温室病圃。 实施例7 重复实施例1，有以下不同点将苗龄55天的待鉴定烟苗移栽至温室病圃。 实施例8 重复实施例1，有以下不同点烟苗移栽6天后，将接种体接种至待测烟苗的茎基部。 实施例9 重复实施例1，有以下不同点烟苗移栽7天后，将接种体接种至待测烟苗的茎基部。 实施例10 重复实施例1，有以下不同点煮好的谷子冷却晾至含水量为55％。 实施例11 重复实施例1，有以下不同点煮好的谷子冷却晾至含水量为60％。 实施例12 重复实施例1，有以下不同点接种后立即覆土并灌水18cm，保持36小时。 实施例13 重复实施例1，有以下不同点接种后立即覆土并灌水20cm，保持48小时。 实验例1 1.实验条件 ①参试品种全国区试、云南省区试的27份品种，详见表1。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟草黑胫病抗性的苗期鉴定方法，包括以下顺序的步骤：①病原菌分离在基础培养基中加入利福平原液，制成利福平培养基备用；采集烟草黑胫病症状典型的感病烟茎，取病茎表皮疑病组织数块，切成长１～２ｃｍ的小块，置于利福平培养基上，经培 养、纯化后得到烟草黑胫病菌丝体，在室温条件下，保存于灭菌蒸馏水中备用；②黑胫病接种体的制备将烟草黑胫病菌丝体移入燕麦培养液中培养５～７天后，转入菌谷培养基上培养１８～２０天得到黑胫病接种体；③病圃设计及管理将 苗龄４５～５５天的待鉴定烟苗移栽至温室病圃，烟苗在病圃内随机排列，设３次重复，每重复植烟１０株，按常规温室管理技术进行管理；以小黄金１０２５为感病对照，红花大金元为感病辅助对照，金星６００７为中抗对照，革新３号为抗病对照；④菌谷接种 烟苗移栽５～７天后，将经步骤（２）培养得到的接种体接种至待测烟苗的茎基部，接种量为０．５ｇ／株；接种后立即覆土并并灌水１５～２０ｃｍ，保持２４～４８小时；⑤鉴定与分级在温室病圃中，分别于接种后的第５天、第７天和第１０ 天各记录一次病指，以三次病指的平均值作为测试品种的抗性指标；进而按国家标准对鉴定品种进行分级。...

【技术特征摘要】
1、一种烟草黑胫病抗性的苗期鉴定方法，包括以下顺序的步骤①病原菌分离在基础培养基中加入利福平原液，制成利福平培养基备用；采集烟草黑胫病症状典型的感病烟茎，取病茎表皮疑病组织数块，切成长1～2cm的小块，置于利福平培养基上，经培养、纯化后得到烟草黑胫病菌丝体，在室温条件下，保存于灭菌蒸馏水中备用；②黑胫病接种体的制备将烟草黑胫病菌丝体移入燕麦培养液中培养5～7天后，转入菌谷培养基上培养18～20天得到黑胫病接种体；③病圃设计及管理将苗龄45～55天的待鉴定烟苗移栽至温室病圃，烟苗在病圃内随机排列，设3次重复，每重复植烟10株，按常规温室管理技术进行管理；以小黄金1025为感病对照，红花大金元为感病辅助对照，金星6007为中抗对照，革新3号为抗病对照；④菌谷接种烟苗移栽5～7天后，将经步骤(2)培养得到的接种体接种至待测烟苗的茎基部，接种量为0.5g/株；接种后立即覆土并并灌水15～20cm，保持24～48小时；⑤鉴定与分级在温室病...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢秀萍，李永平，白永富，肖炳光，李德团，
申请(专利权)人：云南省烟草科学研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]