一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法，其包括，底板、层析膜、吸水纸、样品垫、结合垫；所述结合垫上涂有偶联了降钙素抗体1或抗体5的荧光微球；所述层析膜上设有检测线和质控线，所述质控线上涂有抗抗体1或5同源IgG的抗体；所述检测线上涂有所述降钙素抗体5或抗体1。本发明专利技术优选降钙素作为甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁检测指标，从众多抗体中优选出特异性良好的抗体，并进行组合，荧光微球偶联抗体与检测线划膜抗体相互配合，检测灵敏度和特异性得了显著提高，偏差小，实现了快速精准检测。

Preparation of fluorescent immunochromatographic test paper for rapid identification of medullary thyroid carcinoma and lymph node metastasis

【技术实现步骤摘要】
一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法
本专利技术涉及一种荧光层析试纸极其制备方法及产品，具体涉及一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法；属于生物医药领域

技术介绍
甲状腺髓样癌(medullarythyroidcarcinoma，MTC)为起源于甲状腺滤泡旁细胞C细胞的恶性肿瘤。C细胞为神经内分泌细胞，其合成分泌降钙素及降钙素基因相关肽等激素，C细胞归属于摄取胺前体和脱羧反应细胞，因此本病为神经内分泌系统肿瘤之一。MTC临床上较少见，国内统计约占甲状腺癌的5％-10％。其准确的术前诊断能有助于选择恰当的手术和治疗方式，避免二次手术，对临床与患者均极为重要。目前细针吸取细胞学(fineneedleaspirationcytology，FNAC)是初诊甲状腺髓样癌的首选方法，但甲状腺髓样癌的组织学及细胞学的形态特征均极为复杂，是甲状腺细胞学诊断中的难点。目前，FNAC初诊甲状腺髓样癌的敏感性远不能满足临床的需要。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。作为本专利技术其中一个方面，本专利技术提供一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法，其包括，底板、层析膜、吸水纸、样品垫、结合垫；所述结合垫上涂有偶联了降钙素抗体1或抗体5的荧光微球；所述层析膜上设有检测线和质控线，所述质控线上涂有抗抗体1或5同源IgG的抗体；所述检测线上涂有所述降钙素抗体5或抗体1。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：结合垫上的抗体加入量为200～400μg抗体/mg荧光微球。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：结合垫上的荧光微球含量为1～10μg/cm2。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：质控线上的抗体含量为0.5～2μg/cm。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：所述检测线上的抗体含量为0.5～2μg/cm。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：所述降钙素，其氨基酸序列为CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：所述荧光微球，其荧光物质为铕。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：所述层析膜，为硝酸纤维素膜。作为本专利技术所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法的一种优选方案：所述甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别，其待测样品为穿刺组织样。本专利技术的有益效果：本专利技术优选降钙素作为甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁检测指标，从众多抗体中优选出特异性良好的抗体，并进行组合，荧光微球偶联抗体与检测线划膜抗体相互配合，检测灵敏度和特异性得了显著提高，偏差小，实现了快速精准检测。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1为荧光免疫层析试纸沿长度方向的剖面示意图；图2为荧光免疫层析试纸平面示意图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本专利技术至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。实施例1：所述的CT(降钙素)是本领域已知的，完整的CT(降钙素)是含有32个氨基酸的单个多肽链构成，其氨基酸序列是本领域已知的，可以在NCBI等专业数据库中查到，具体序列如下：人类CT(1-32)：CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP(SEQIDNO：1)本专利技术涉及的CT抗体(降钙素)包括单克隆抗体，具体见表1：表1CT抗体的特异性鉴定：以ELISA进行检测，分别以CT、降钙素原(PCT)、甲状腺球蛋白(Tg)、促甲状腺激素(TSH)为检测抗原包被ELISA板，通过ELISA分别检测所选择的CT抗体1～5与不同蛋白的特异性反应，以正常BALB/c小鼠血清作阴性对照，PBS液作空白对照。结果：抗体1～5分别只与CT反应为阳性(P/N〉2.1)，而降钙素原(PCT)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、甲状腺球蛋白(Tg)、促甲状腺激素(TSH)反应为阴性，说明利用本专利技术筛选的抗体1～5分别具有特异性。结果显示：CT抗体1～5分别与CT反应为阳性(P/N〉2.1)，而与降钙素原(PCT)、神经元特异性烯醇化酶NSE甲状腺球蛋白(Tg)、促甲状腺激素(TSH)反应为阴性，说明本专利技术的抗体1～5分别具有特异性。用于检测待测物中人CT的荧光免疫层析试纸的制备：1.研究对象：标本来自本院100例外科手术患者(含MTC患者)，均用注射器术中穿刺甲状腺腺体(含疑似MTC患者的病灶)、淋巴结。2.试剂与仪器：免疫层析试纸的荧光微球标记抗体选自表1中的1种降钙素抗体、检测线上的划膜抗体选自表1中另一种降钙素抗体，筛选出无交叉反应且适用于荧光免疫层析检测、特异性和灵敏度高的抗体组合，免疫层析中的质控线上的质控抗体为抗体1～5中一个抗体同源IgG的抗体、羧基化聚苯乙烯时间分辨荧光微球、荧光检测仪来自无锡市江原实业技贸公司，硝酸纤维素膜(美国Merck-Millipore公司)，样品垫、结合垫、底板、吸水纸采购于上海杰一公司，其他试剂为国产分析纯。3.荧光免疫层析试纸条制备方法：<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：包括，底板、层析膜、吸水纸、样品垫、结合垫；所述结合垫上涂有偶联了降钙素抗体1或抗体5的荧光微球；/n所述层析膜上设有检测线和质控线，所述质控线上涂有抗抗体1或5同源IgG的抗体；所述检测线上涂有所述降钙素抗体5或抗体1。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：包括，底板、层析膜、吸水纸、样品垫、结合垫；所述结合垫上涂有偶联了降钙素抗体1或抗体5的荧光微球；
所述层析膜上设有检测线和质控线，所述质控线上涂有抗抗体1或5同源IgG的抗体；所述检测线上涂有所述降钙素抗体5或抗体1。


2.如权利要求1所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：结合垫上的抗体加入量为200～400μg抗体/mg荧光微球。


3.如权利要求1或2所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：结合垫上的荧光微球含量为1～10μg/cm2。


4.如权利要求1或2所述的用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：质控线上的抗体含量为0.5～2μg/cm。


5.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕中伟，周彬，邢明照，罗全勇，王辉，贾成友，蔡海东，范素云，马超，刘瑾，李丹，易婉婉，马雨水，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，无锡市江原实业技贸总公司，
类型：发明
国别省市：上海;31