薏苡仁糖蛋白的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种薏苡仁糖蛋白的提取方法，该方法包括以下步骤：取薏苡仁，粉碎，加水，经恒温水化和高压均质预处理，然后浸提得到糖蛋白粗提液，粗提液离心后取上清液；再往上清液中加入Sevage试剂去除游离蛋白，搅拌离心收集上层水相部分；向水相部分加入50‑95％V/V乙醇溶液，反应过夜，生成沉淀，离心，将沉淀溶于水，透析，冷冻干燥得薏苡仁糖蛋白。本发明专利技术对薏苡仁原料进行高压均质预处理，并且在均质前进行了水化处理，达到提取前可溶性糖蛋白含量最大的目的。该糖蛋白提取预处理步骤使糖蛋白结构舒展，薏苡仁糖蛋白增大了与水的接触面积，从根本促进了薏苡仁糖蛋白的提取效率。

Extraction of Coix seed glycoprotein

【技术实现步骤摘要】
薏苡仁糖蛋白的提取方法
本专利技术涉及一种薏苡仁糖蛋白的提取方法。
技术介绍
薏苡仁在我国大江南北均有种植，资源极为丰富。薏苡仁中含有65％碳水化合物，18.7％蛋白质，5.7％脂肪，0.242％磷和各种微量元素，其含有的活性成分为酯类、脂肪酸、多糖、甾体、三萜及蛋白质等化合物。糖蛋白具有增强免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等作用，而且它具有来源于天然、低毒的特点，因此它在医药和食品科学等领域的研究应用越来越广泛，在新型特种药物及功能性食品开发方面具有广阔的运用前景。杜晓旭采用热水浸提和sevag法提取薏苡仁糖蛋白粗品，表明薏苡仁糖蛋白的优化提取工艺参数为：料液比1:25、提取温度56℃、提取时间6h，薏苡仁糖蛋白的理论得率为3.6％。该提取方法特别耗时效率低，原料和能源消耗较高，获得糖蛋白的纯度低。张怡等人通过水提法对薏苡仁糖蛋白进行提取，该研究表明薏苡仁糖蛋白的优化提取工艺参数为：料液比1:20、提取温度40℃、提取时间3h，薏苡仁糖蛋白的得率为3.7％。该提取方法获得的糖蛋白纯度较低，未对获得的糖蛋白的含量和结构进行鉴定，无法确认该方法获得的样品是否的确为糖蛋白。
技术实现思路
为了克服现有薏苡仁糖蛋白提取方法存在的低效、耗时、耗能，所得产品纯度不高等问题，本专利技术的目的在于提供一种新的薏苡仁糖蛋白提取方法，比较好地解决了上述问题。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：薏苡仁糖蛋白的提取方法，包括以下步骤：取薏苡仁，粉碎，加水，经恒温水化和高压均质预处理，然后浸提得到糖蛋白粗提液，粗提液离心后取上清液；再往上清液中加入Sevage试剂去除游离蛋白，搅拌离心收集上层水相部分；向水相部分加入50-95％V/V乙醇溶液，反应过夜，生成沉淀，离心，将沉淀溶于水，透析，冷冻干燥得薏苡仁糖蛋白；所述的薏苡仁，优选粉碎后过100目筛；所述的恒温水化，水化时间为2-8h，水化温度为10-50℃；所述的高压均质，压强为10-50MPa，均质次数为1-5次；所述的浸提，料液比(质量比)为1:6-15，浸提温度为25-30℃，浸提时间为1-4h；所述的离心，是10000rpm离心10min；所述的Sevage试剂由氯仿和正丁醇按体积比为4:1组成；所述上清液与Sevage试剂的体积比为2-5:1；所述的乙醇溶液，浓度优选95％V/V；所述的反应过夜，优选在4℃下进行；所述透析的截留膜分子量为8000-14000Da，透析时间为20-60h。本方法获得的薏苡仁糖蛋白含量高达70％，并且纯度高，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，为非淀粉类酸性糖蛋白，且不含有还原糖、多酚、糖醛酸类物质。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术方法耗能少、生产成本低。本专利技术对薏苡仁原料进行高压均质预处理，有利于糖蛋白的溶出，使用原料少和提取时间短，可高效率提取纯度高的薏苡仁糖蛋白，降低了生产成本。(2)本专利技术提取效率高，缩短提取时间。本专利技术对薏苡仁原料进行高压均质预处理，并且在均质前进行了水化处理，达到提取前可溶性糖蛋白含量最大的目的。该糖蛋白提取预处理步骤使糖蛋白结构舒展，薏苡仁糖蛋白增大了与水的接触面积，从根本促进了薏苡仁糖蛋白的提取效率。(3)本专利技术方法了提高薏苡仁糖蛋白纯度。本专利技术进一步对薏苡仁糖蛋白的结构进行进一步的鉴定，获得的薏苡仁糖蛋白样品与CTAB反应呈阳性与I2-KI反应、斐林试剂反应、FeCl3反应、硫酸-咔唑反应均呈阴性，说明薏苡仁糖蛋白提取物均为非淀粉类酸性糖蛋白，且不含有还原糖、多酚、糖醛酸类物质，认证了获得样品为高纯度的薏苡仁糖蛋白。(4)本专利技术方法对薏苡仁糖蛋白活性的影响小。本专利技术薏苡仁糖蛋白提取温度较低，条件温和，对样品的结构和生物活性影响较低。(5)本专利技术其生产工艺简单有序，条件温和，安全性高，利用价值大，可实施性强。附图说明图1是薏苡仁糖蛋白发生β消除反应前后的紫外光谱图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1一种快速提取薏苡仁糖蛋白的方法，包括如下步骤：(1)原料选取与处理：将薏苡仁剔除杂物洗净，电热鼓风干燥箱恒温下烘干至恒重，粉碎后过100目筛，加水配制成10-50％(质量分数)的溶液，在30℃恒温摇床水化12h。高压均质20MPa、3次，冷冻干燥制样，密封阴凉干燥处储存，得薏苡仁粉备用。(2)粗提：取步骤(1)中得到的薏苡仁粉，按质量比，将薏苡仁粉10％溶于水，搅拌均匀后于25℃水提3h，结束后离心(10000rpm，10min)，并收集上清液，经过过滤适当蒸发浓缩。(3)脱除游离蛋白质：向步骤(2)得到的上清液中加入氯仿和正丁醇混合液(体积比为4:1)，上清液与混合液体积比为3:1，搅拌离心(10000rpm，10min)收集上层水相部分，重复处理3次，得到薏苡仁糖蛋白液。(4)醇沉：取步骤(3)得到的薏苡仁糖蛋白液，按照1:3向其中加入95％乙醇溶液，于4℃冰箱中过夜沉淀，离心(10000rpm，10min)后并收集沉淀即为薏苡仁糖蛋白样品。(5)透析：将步骤(4)得到的薏苡仁糖蛋白样品溶于水后装入截留分子量为8000-14000Da的透析袋内处理48h，收集透析袋内的液体，真空冷冻干燥，获得薏苡仁糖蛋白精品。实施例2其他步骤同实例1，透析后的薏苡仁糖蛋白经过0.2molNaOH处理，进行β消除反应。对比例1选取薏苡仁粉碎，不经原料水化与高压均质处理。后续其他步骤同实例1。对比例2步骤(2)的水提参数是50℃、3h，其他步骤同实例1。将实施例和对比例获得的糖蛋白样品进行蛋白质和糖含量的测定，并进行以下定性试验：颜色、状态、溶解性、菲林试剂反应、三氯化铁反应、碘碘化钾反应、络合反应、双缩脲反应；测定氨基酸组成和进行紫外全波段扫描。表1实施例与对比例的薏苡仁糖蛋白的纯度与得率表1可看出，实施例1与对比例1相比，水化与高压均质处理有利于糖蛋白的溶出，使用原料少和提取时间短，可高效率提取纯度高的薏苡仁糖蛋白，促进了薏苡仁糖蛋白的提取效率。对比例2的高温50℃反而不利于提高薏苡仁糖蛋白的得率和纯度。表2碱处理(发生β消除反应)前(实施例1)后(实施例2)薏苡仁糖蛋白的理化性质表3碱处理(发生β消除反应)前(实施例1)后(实施例2)薏苡仁糖蛋白总氨基酸含量表2和表3可以看出，本方法获得的薏苡仁糖蛋白含量高达70％，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，为非淀粉类酸性糖蛋白，且不含有还原糖、多酚、糖醛酸类物质。图1表明本专利技术提取样品为对碱不稳定的O-糖苷键连接的糖蛋白，验证了本专利技术提取的样品为高纯度的糖蛋白。上述实施例为本专利技术较佳的实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.薏苡仁糖蛋白的提取方法，其特征在于包括以下步骤：/n取薏苡仁，粉碎，加水，经恒温水化和高压均质预处理，然后浸提得到糖蛋白粗提液，粗提液离心后取上清液；再往上清液中加入Sevage试剂去除游离蛋白，搅拌离心收集上层水相部分；向水相部分加入50-95％V/V乙醇溶液，反应过夜，生成沉淀，离心，将沉淀溶于水，透析，冷冻干燥得薏苡仁糖蛋白；/n所述的恒温水化，水化温度为10-50℃。/n

【技术特征摘要】
1.薏苡仁糖蛋白的提取方法，其特征在于包括以下步骤：
取薏苡仁，粉碎，加水，经恒温水化和高压均质预处理，然后浸提得到糖蛋白粗提液，粗提液离心后取上清液；再往上清液中加入Sevage试剂去除游离蛋白，搅拌离心收集上层水相部分；向水相部分加入50-95％V/V乙醇溶液，反应过夜，生成沉淀，离心，将沉淀溶于水，透析，冷冻干燥得薏苡仁糖蛋白；
所述的恒温水化，水化温度为10-50℃。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的高压均质，压强为10-50MPa，均质次数为1-5次。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的浸提，浸提温度为25-30℃。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的恒温水化，水化时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖兰，林维杰，杨土娣，文晓燕，杨彦红，陈进维，杨容，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44