一种Mmup单体变体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种包含SEQ ID NO：1第91‑99位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列的Mmup单体变体、以及包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白或构建体及其用途。本发明专利技术还提供了一种表征目标多核苷酸的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种Mmup单体变体及其应用
本专利技术涉及核酸特性的表征
，具体涉及一种Mmup单体变体、包含Mmup单体变体的孔蛋白及构建体，及应用所述Mmup单体变体或孔蛋白进行表征目标多核苷酸的方法。
技术介绍
纳米孔测序技术是一种以单链核酸分子作为测序单元，利用一个能够提供离子电流通道的纳米孔，使得单链核酸分子在电场力驱动下通过该纳米孔，当多核苷酸通过纳米孔易位时，会由于物理占位效应而产生相对应的阻塞电流，对产生的不同信号实时读取进而分析得到多核苷酸序列信息的基因测序技术。纳米孔测序技术具有以下优势：在无需扩增的情况下，即可简便的建库；阅读速度快，单链分子的阅读速度能够达到每小时数万个碱基；阅读长度更长，通常可以达到数千个碱基；可以直接进行甲基化的DNA或RNA的测量。但是，每一个或一系列核苷酸在电场力的作用下通过纳米孔蛋白时，会产生一种特定的阻塞电流，此时记录的电流信号与多核苷酸的序列虽是对应关系，却通常是3-4个核苷酸控制某些级别的电流水平，所以仍然需要提高精确度。目前，可以通过改变多核苷酸结构、在纳米孔处的持续时间以及开发新的纳米本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含SEQ ID NO：1第91-99位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20190929 CN 20191093695081.一种Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含SEQIDNO：1第91-99位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含第91位天冬氨酸(D)和/或第99位丙氨酸(A)的突变。


3.根据权利要求1或2所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含至少一种如下突变：
D91突变为：脯氨酸(P)、色氨酸(W)、精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、赖氨酸(K)、苯丙氨酸(F)、丝氨酸(S)、天冬酰胺(N)、半胱氨酸(C)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)或缬氨酸(V)，或者，非天然氨基酸；或者，
A99突变为：脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、缬氨酸(V)、赖氨酸(K)或精氨酸(R)，或者，非天然氨基酸。


4.根据权利要求1-3任一所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含D91K和/或A99K的突变。


5.根据权利要求1-4任一所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含D91K和A99K的突变。


6.根据权利要求1-5任一所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体还包含SEQIDNO：1第80-90位和/或100-120位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。


7.根据权利要求1-6任一所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体还包含SEQIDNO：1第1-79位和/或121-186位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。


8.根据权利要求1-7任一所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体还包含第89位亮氨酸(L)的突变、第110位天冬酰胺(N)的突变、第120位天冬氨酸(D)的突变、第136位天冬酰胺(N)的突变或第141位丝氨酸(S)的突变中的一种或两种以上的组合。


9.根据权利要求1-8任一所述的Mmup单体变体，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含至少一种如下突变：
L89突变为：天冬酰胺(N)、丙氨酸(A)、谷氨酰胺(Q)、甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、赖氨酸(K)或脯氨酸(P)，或者，非天然氨基酸；或者，
N110突变为：脯氨酸(P)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)或亮氨酸(L)，或者，非天然氨基酸；或者，
D120突变为：精氨酸(R)、赖氨酸(K)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、甘氨酸(G)或苏氨酸(T)，或者，非天然氨基酸；或者，
N136突变为：精氨酸(R)、赖氨酸(K)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或苏氨酸(T)，或者，非天然氨基酸；或者，
S141突变为：精氨酸(R)、赖氨酸(K)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)或苏氨酸(T)，或者，非天然氨基酸。


10.一种包含至少一个权利要求1-9任一所述Mmup单体变体的构建体。


11.根据权利要求10所述的构建体，其特征在于，所述的构建体还包含野生型Mmup单体。


12.根据权利要求10或11所述的构建体，其特征在于，所述的构建体包含1-20个Mmup单体变体，其中，所述的Mmup单体变体相同或不同。


13.根据权利要求10-12任一所述的构建体，其特征在于，所述的构建体包含1-20个野生型Mmup单体。


14.根据权利要求10-13任一所述的构建体，其特征在于，所述的Mmup单体变体与Mmup单体变体、野生型Mmup单体与野生型Mmup单体、Mmup单体变体与野生型Mmup单体之间通过共价连接。


15.根据权利要求10-14任一所述的构建体，其特征在于，所述的构建体包含4-10个相同或不同的Mmup单体变体。


16.一种包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含SEQIDNO：1第91-99位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列，所述的突变导致当多聚核苷酸单链通过所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白时，产生由于不同种类的核苷酸的物理或化学性质的不同而造成的孔内电阻的差异。


17.根据权利要求16所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含第91位天冬氨酸(D)和/或第99位丙氨酸(A)的突变。


18.根据权利要求16或17所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含至少一种如下突变：
D91突变为：脯氨酸(P)、色氨酸(W)、精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、赖氨酸(K)、苯丙氨酸(F)、丝氨酸(S)、天冬酰胺(N)、半胱氨酸(C)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)或缬氨酸(V)，或者，非天然氨基酸；或者，
A99突变为：脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、缬氨酸(V)、赖氨酸(K)或精氨酸(R)，或者，非天然氨基酸。


19.根据权利要求16-18任一所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含D91K和/或A99K的突变。


20.根据权利要求16-19任一所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含D91K和A99K的突变。


21.根据权利要求16-20任一所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体还包含SEQIDNO：1第80-90位和/或100-120位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。


22.根据权利要求16-21任一所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体还包含SEQIDNO：1第1-79位和/或121-186位任意一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。


23.根据权利要求16-22任一所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体还包含第89位亮氨酸(L)的突变、第110位天冬酰胺(N)的突变、第120位天冬氨酸(D)的突变、第136位天冬酰胺(N)的突变或第141位丝氨酸(S)的突变中的一种或两种以上的组合。


24.根据权利要求16-23任一所述包含至少一个Mmup单体变体的孔蛋白，其特征在于，所述的Mmup单体变体包含至少一种如下突变：
L89突变为：天冬酰胺(N)、丙氨酸(A)、谷氨酰胺(Q)、甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、赖氨酸(K)或脯氨酸(P)，或者，非天然氨基酸；或者，
N110突变为：脯氨酸(P)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)或亮氨酸(L)，或者，非天然氨基酸；...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘少伟，周雅，陈呈尧，
申请(专利权)人：北京齐碳科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11