包含人源化TTR基因座的非人类动物及其使用方法技术

本文提供包含人源化TTR基因座的非人类动物基因组、非人类动物细胞和非人类动物以及使用所述非人类动物基因组、非人类动物细胞和非人类动物的方法。包含人源化TTR基因座的非人类动物细胞或非人类动物表达人转甲状腺素蛋白或嵌合的转甲状腺素蛋白，来自人转甲状腺素蛋白的片段。本文提供使用包含人源化TTR基因座的非人类动物以评价诸如设计为靶定人TTR的核酸酶试剂之类的人‑TTR‑靶向试剂的体内效率的方法。本文还提供产生所述包含人源化TTR基因座的非人类动物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含人源化TTR基因座的非人类动物及其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年9月29日提交的美国申请US62/565,980和2018年6月1日提交的美国申请US62/679,142以及2018年8月21日提交的美国申请US62/720,292的权益，其每一个的全部内容通过引用并入本文，用于所有目的。对通过EFSWEB提交的作为TEXT文件的序列表的引用在文件519832SEQLIST.txt中写入的序列表的大小为139千字节，其于2018年9月25日创建并通过引用并入本文。
技术介绍
转甲状腺素蛋白(TTR)是在血清和带有甲状腺激素和视黄醇的视黄醇结合蛋白的脑脊液中发现的蛋白质。肝脏分泌TTR进入血液中，同时脉络丛分泌TTR进入脑脊液中。TTR还在视网膜色素上皮细胞中产生并被分泌进入玻璃体中。错误折叠的且聚集的TTR在淀粉样蛋白疾病老年全身性淀粉样变性(SSA)，家族性类淀粉多发性神经病变(FAP)和家族性类淀粉心肌症(FAC)中的多种组织和器官中累积。用于TTR淀粉样变性疾病的一种有望的治疗方式是降低患者体内的TTR载荷。然而，本领域仍然需要如下合适的非人类动物，其在内源Ttr-基因座处提供人-TTR靶向试剂的真实的人靶点或接近人-TTR靶向试剂的真实的人靶点的近似靶点，从而能够检测这些试剂在活体动物中的作用效率和作用模式并且能够在人源化蛋白和人源化基因是存在的TTR的唯一形式的情况下进行药代动力学和药效学研究。
技术实现思路
本文提供包含人源化TTR基因座的非人类动物以及使用这些非人类动物的方法。本文还提供包含人源化TTR基因座的非人类动物基因组或细胞。一方面，本文提供包含人源化TTR基因座的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物。这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物可在其基因组中包含基因修饰的内源Ttr-基因座，该内源Ttr-基因座包含人TTR序列，该人TTR序列包含TTR编码序列和非编码序列。一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物可包含基因修饰的内源Ttr-基因座，其中，内源Ttr-基因座的包含Ttr-编码的序列和非编码序列这两者的区域已被删除并且被相应的人TTR序列取代，该人TTR序列包含TTR编码序列和非编码序列这两者。任选地，基因修饰的内源Ttr-基因座包含内源Ttr启动子。任选地，人TTR序列可操作地连接至内源Ttr启动子。任选地，所述内源Ttr-基因座中的至少一个内含子和至少一个外显子已被删除并且被相应的人TTR序列取代。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，内源Ttr-基因座的整个Ttr-编码序列已被删除并且被相应的人TTR序列取代。任选地，内源Ttr-基因座的从Ttr-起始密码子至Ttr-终止密码子的区域已被删除并且被相应的人TTR序列取代。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，基因修饰的内源Ttr基因座包含人TTR3’非翻译区域。在一些这样的非人类动物中，内源Ttr5’非翻译区域未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，内源Ttr-基因座的从Ttr-起始密码子至Ttr-终止密码子的区域已被删除并且被人TTR序列取代，所述人TTR序列包含相应的人TTR序列和人TTR3’非翻译区域，并且，内源Ttr5’非翻译区域未被删除并且未被相应的人TTR序列取代，并且内源Ttr启动子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座处的人TTR序列包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成，该序列与SEQIDNO:18中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座编码包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成的蛋白质，该序列与SEQIDNO:1中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座包含编码序列，该编码序列包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成，该序列与SEQIDN:90中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成，该序列与SEQIDNO:14或SEQIDNO:15中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，基因修饰的内源Ttr基因座编码包含信号肽的转甲状腺素蛋白前体蛋白，并且内源Ttr基因座的编码信号肽的区域未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。任选地，内源Ttr基因座的第一外显子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。任选地，内源Ttr基因座的第一外显子和第一内含子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。任选地，内源Ttr基因座的从第二Ttr外显子的起始至Ttr终止密码子的区域已被删除并且被相应的人TTR序列取代。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座包含人TTR3’非翻译区域。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，内源Ttr基因座的从第二Ttr外显子至Ttr终止密码子的区域已被删除并且被包含相应的人TTR序列和人TTR3’非翻译区域的人TTR序列取代，并且内源Ttr5’非翻译区域未被删除并且未被相应的人TTR序列取代，并且内源Ttr启动子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座处的人TTR序列包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成，该序列与SEQIDNO:19中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座编码包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成的蛋白质，该序列与SEQIDNO:2中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座包含编码序列，该编码序列包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成，该序列与SEQIDN:91中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。任选地，基因修饰的内源Ttr基因座包含如下序列，基本由如下序列构成或由如下序列构成，该序列与SEQIDNO:16或SEQIDNO:17中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，基因修饰的内源Ttr基因座不包含选择盒或报告体基因。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，基因修饰的内源Ttr基因座包含选择盒或报告体基因。在一些这样的非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物中，所述非人类动物基因组，非人类动物细胞或非人类动物对于基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非人类动物，该非人类动物在其基因组中包含基因修饰的内源Ttr基因座，该内源Ttr基因座包含人TTR序列，该人TTR序列包含TTR编码序列和非编码序列这两者。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170929 US 62/565,980;20180601 US 62/679,142;20181.一种非人类动物，该非人类动物在其基因组中包含基因修饰的内源Ttr基因座，该内源Ttr基因座包含人TTR序列，该人TTR序列包含TTR编码序列和非编码序列这两者。


2.如权利要求1所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的包含Ttr编码序列和非编码序列这两者的区域已被删除并且被包含TTR编码序列和非编码序列这两者的相应的人TTR序列取代。


3.如权利要求1或2所述的非人类动物，其中，所述基因修饰的内源Ttr基因座包含内源Ttr启动子，其中，所述人TTR序列可操作地连接至所述内源Ttr启动子。


4.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的至少一个内含子和至少一个外显子已被删除并且被相应的人TTR序列取代。


5.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的全部Ttr编码序列已被删除并且被相应的人TTR序列取代。


6.如权利要求5所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的从Ttr起始密码子至Ttr终止密码子的区域已被删除并且被相应的人TTR序列取代。


7.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，所述基因修饰的内源Ttr基因座包含人TTR3’非翻译区域。


8.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，内源Ttr5’非翻译区域未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。


9.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的从Ttr起始密码子至Ttr终止密码子的区域已被删除并且被包含相应的人TTR序列和人TTR3’非翻译区域的人TTR序列取代；并且
其中，所述内源Ttr5’非翻译区域没有被删除并且没有被相应的人TTR序列取代；并且，
其中，所述内源Ttr启动子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。


10.如权利要求9所述的非人类动物，其中：
(i)所述基因修饰的内源Ttr基因座处的人TTR序列包括与SEQIDNO:18中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性的序列；
(ii)所述基因修饰的内源Ttr基因座编码包含如下序列的蛋白质，所述序列与SEQIDNO:1中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性；
(iii)所述基因修饰的内源Ttr基因座包含编码序列，该编码序列包含与SEQIDNO:90中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性的序列；
(iv)所述基因修饰的内源Ttr基因座包含与SEQIDNO:14或15中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性的序列。


11.如权利要求1至4中任一项所述的非人类动物，其中，所述基因修饰的内源Ttr基因座编码包含信号肽的转甲状腺素蛋白前体蛋白并且编码信号肽的内源Ttr基因座的区域未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。


12.如权利要求11所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的第一外显子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。


13.如权利要求12所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的第一外显子和第一内含子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。


14.如权利要求11至13中任一项所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的从第二Ttr外显子的起始至Ttr终止密码子的区域已被删除并且被相应的人TTR序列取代。


15.如权利要求11至14中任一项所述的非人类动物，其中，所述基因修饰的内源Ttr基因座包括人TTR3’非翻译区域。


16.如权利要求11至15中任一项所述的非人类动物，其中，所述内源Ttr基因座的从第二Ttr外显子至Ttr终止密码子的区域已被删除并且被包含相应的人TTR序列和人TTR3’非翻译区域的人TTR序列取代；并且
其中，内源Ttr5’非翻译区域未被删除并且未被相应的人TTR序列取代；并且
其中，内源Ttr启动子未被删除并且未被相应的人TTR序列取代。


17.如权利要求16所述的非人类动物，其中：
(i)基因修饰的内源Ttr基因座处的人TTR序列包含与SEQIDNO:19中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性的序列；或
(ii)基因修饰的内源Ttr基因座编码包含如下序列的蛋白质，所述序列与SEQIDNO:2中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性；
(iii)基因修饰的内源Ttr基因座包含编码序列，该编码序列包含与SEQIDNO:91中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性的序列；或
(iv)基因修饰的内源Ttr基因座包含与SEQIDNO:16或17中列出的序列具有至少90％,95％,96％,97％,98％,99％,或100％的一致性的序列。


18.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，所述基因修饰的内源Ttr基因座不包含选择盒或报告体基因。


19.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，所述非人类动物对于基因修饰的内源Ttr基因座而言是纯合的。


20.如前述权利要求中任一项所述的非人类动物，其中，所述非人类动物是哺乳动物。


21.如权利要求20所述的非人类动物，其中，所述非人类动物是大鼠或小鼠。


22.如权利要求21所述的非人类动物，其中，所述非人类动物是小鼠。


23.一种体内评价人-TTR-靶向试剂的活性的方法，其包括：
(a)向权利要求1至22中任一项所述的非人类动物给药人-TTR-靶向试剂；和
(b)在所述非人类动物体内评价人-TTR-靶向试剂的活性。


24.如权利要求23所述的方法，其中，所述给药包括腺相关病毒(AAV)-介导的递送，脂质纳米颗粒(LNP)-介...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅根·德拉蒙德萨缪尔森，杰弗里·海恩斯，苏珊娜·哈特福德，大卫·弗伦杜威，布莱恩·扎姆布罗维兹，安德鲁·J·墨菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US