一株降解亚硝酸盐并对ACE具有抑制能力的植物乳杆菌属菌株制造技术

本发明专利技术提供一株具有降解亚硝酸盐活性及ACE抑制活性的植物乳杆菌属菌株及其应用，其对亚硝酸盐有的降解作用，可在发酵食品及发酵饲料中广泛应用。本发明专利技术提供的植物乳杆菌(Lactobacillus sp.)FJS 002，保藏编号为CGMCC No 18378。本发明专利技术所提供的植物乳杆菌应用在食品加工或饲料加工领域中。本发明专利技术通过筛选获得对亚硝酸盐具有高效降解作用同时对ACE具有抑制作用的优良菌株，为解决食品尤其是发酵食品中亚硝酸盐残留问题及困扰人类健康的高血压问题能提供理论基础和科学手段。

Lactobacillus plantarum strain degrading nitrite and inhibiting ace

【技术实现步骤摘要】
一株降解亚硝酸盐并对ACE具有抑制能力的植物乳杆菌属菌株
本专利技术属于食品微生物筛选
，具体涉及一株具有降解亚硝酸盐活性及ACE抑制活性的植物乳杆菌属菌株。
技术介绍
亚硝酸盐问题是当今食品工业的热点问题，土壤、水体、动植物体内均存在亚硝酸盐，农业中氮肥的使用过量，N、P、K肥比重失调，是引起蔬菜中含有大量的亚硝酸盐的原因之一，工业中废水的排放，也是引起农产品加工食品中亚硝酸盐含量超标严重的原因之一。亚硝酸盐对植物本身无害，但是对人类、动物健康危害巨大，摄入大量亚硝酸盐容易使机体中毒和致癌。人类属于食物链顶端，会通过食物链富集。亚硝酸盐分布比较广泛，大多数发酵食品中都含有亚硝酸盐，在食品腌渍的过程中，亚硝酸盐含量会增加。亚硝酸盐还被用于火腿、香肠等肉制品加工中，它能使肉制品呈现较好的色泽，抑制有害菌的生长。因此，如何控制食品中亚硝酸盐的残留量是一个亟待解决的问题。目前去除亚硝酸盐的方法有化学降解法、物理吸附法及生物降解法。化学方法降解效率高、速度快，但是维持时间短，容易反弹和产生二次污染。物理方法试剂用量大，且应用范围窄。生物降解法养殖工业上一般除采用硝化细菌和反硝化细菌，但是不适合在食品工业中应用。而乳酸菌是目前食品行业广泛应用的生物添加剂，乳酸菌可以增加食物的营养价值并减少食物腐败，延长食物储藏的保质期。食用乳酸菌对于机体健康具有重要意义，如调节肠道菌群、防癌及增强免疫力等。今年，有研究表明乳酸菌具有降血压的作用，乳酸菌能抑制血管紧张素转换酶(ACE)的活性，减少HHL(马脲酰胺组胺酰亮氨酸)在ACE的催化下生成引起高血压的物质(马尿酸)的含量，因此，降血压功能在医学领域也有很大的发展潜力。但是目前还没有筛选出高效降解亚硝酸盐降解亚硝酸盐、同时能抑制ACE活性的乳酸菌株。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株具有降解亚硝酸盐活性及ACE抑制活性的植物乳杆菌属菌株及其应用，其对亚硝酸盐有的降解作用，可在发酵食品及发酵饲料中广泛应用。本专利技术提供的植物乳杆菌(Lactobacillussp.)FJS002，于2019年08月12日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo18378。本专利技术所提供的植物乳杆菌应用在食品加工或饲料加工领域中。本专利技术再一个方面提供一种包含活菌的菌剂，是将所筛选的菌株FJS002的发酵液冷冻干燥后获得。所述的发酵液，其制备方法如下：无菌操作将菌株FJS002接种到MRS肉汤培养基中，37℃恒温培养24h～72h后得到乳酸菌发酵液；该发酵液浓缩后直接冷藏或冷冻干燥获得含活菌的菌剂。所述的菌剂作为亚硝酸盐降解剂或ACE抑制剂的应用。本专利技术还提供一种降解亚硝酸盐的方法，是使用上述菌株FJS002来降解亚硝酸盐；所述的方法，其中降解温度为35℃，pH为6.0条件性降解亚硝酸盐；本专利技术还提供植物乳杆菌FJS002在抑制血管紧张素转换酶中的应用。本专利技术通过筛选获得对亚硝酸盐具有高效降解作用同时对ACE具有抑制作用的优良菌株，为解决食品尤其是发酵食品中亚硝酸盐残留问题及困扰人类健康的高血压问题能提供理论基础和科学手段。附图说明图1：七株分离菌株的培养特征图；图2：各菌株对亚硝酸盐的降解率图；图3：菌株d的系统发育树图；图4：菌株d的生长曲线图；图5：菌株d的产酸能力图；图6：菌株d耐胆酸盐能力图；图7：不同温度对降解亚硝酸盐的影响图；图8：不同初始pH对降解亚硝酸盐的影响图；图9：不同培养基浓度对降解亚硝酸盐的影响图；图10：不同接种量对降解亚硝酸盐的影响图；图11：不同亚硝酸盐浓度对降解亚硝酸盐的影响图；图12：菌株在模拟胃肠液中的存活情况图；图13：菌株抑制ACE的能力图。具体实施方式本专利技术筛选获得了对具有降解亚硝酸盐活性及ACE抑制活性的乳酸菌株，进一步应用可将其添加到食品中用于降解亚硝酸盐，同时提高食品的保健功能。下面结合附图和实施例对本专利技术进行详细的阐述。实施例1菌株的分离筛选、鉴定1)乳酸菌的分离、筛选从多家企业采集发酵食品包括火腿、风味发酵乳、酸奶、泡菜等。选择质量稳定、颜色好、保存时间长的批次，然后对该批样品进行菌株的筛选。固体样品取25g，液体样品取25mL，加入225mL无菌稀释液中，制备1:10样品匀液。继续进行10倍梯度稀释，选择2～3个适宜稀释度样品匀液涂布含碳酸钙的MRS培养基，培养后选出有溶钙圈的菌落为初筛乳酸菌菌株。2)对亚硝酸盐具有降解作用的菌株筛选将a、b、c、d、e、f及g七株菌株于MRS培养基中活化(图1)。培养到稳定期之后，按照1％的接种量接种于100ml含0.12g/LNaNO2，pH6.0的MRS液体培养基中，35℃培养48h，于528nm下测吸光值。表1：七株分离菌株的形态特征表含碳酸钙的MRS培养基上乳酸菌的形态特征：乳白色菌落，大小、形状各异，温润，有溶钙圈，有透明圈。从MRS碳酸钙培养基的27株菌中挑选出7株菌透明圈较大的形态不同的典型菌落如图1所示，各菌株的形态特征如表1所示。对7株菌进行进一步的纯化，把所有菌株转接斜面-4℃保存，同时用甘油保存法封存于冻存盒中-20℃保存以备再次活化备用。根据国标法绘制亚硝酸盐标准曲线，根据标准曲线计算亚硝酸盐的残留量，结果如图2示。结果表明这七种菌株中，降解亚硝酸盐最好的是菌株d，降解率达到了将近90％，其它菌株降解率很低。所以，筛选出菌株d作为优良菌株。3)菌株的16SrDNA鉴定取菌液1.5mL置于无菌离心管中，以10000r/min离心5min，去除上清收获菌体，采用CTAB法提取模板DNA，以提取的菌株FJS004基因组DNA为模板，使用细菌通用引物27f(5′：-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1495r(5′-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3′)进行PCR扩增。PCR扩增产物利用1.0％琼脂糖凝胶电泳检测并进行测序。测定的序列在NCBI网站GenBank数据库进行同源性比较。PCR产物由上海生工生物工程有限公司测序分析，经测序后获得菌株的16SrDNA序列，长度为1468kb(SEQIDNO:1)，测序结果通过NCBI上的BLAST进行查找，将基因序列与GenBank数据库中的序列进行比对及同源性比较，系统发育树如图3所示，将这株菌归为植物乳杆菌属PlantLactobacillus。将菌株d命名为FJS002，于2019年07月15日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo18378。实施例2菌株的特性1)生长曲线的测定将菌株活化后取稳定期的种子按1％接种量接本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物乳杆菌，其特征在于，所述的植物乳杆菌的保藏编号为CGMCC No 18378。/n

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌，其特征在于，所述的植物乳杆菌的保藏编号为CGMCCNo18378。


2.权利要求1所述的植物乳杆菌在食品加工或饲料加工领域中的应用。


3.一种活菌菌剂，其特征在于，所述的活菌菌剂是将权利要求1所述的植物乳杆菌的发酵液冷冻干燥后获得。


4.如权利要求3所述的活菌菌剂，其特征在于，所述的发酵液，其制备方法如下：
无菌操作将权利要求1所述的植物乳杆菌接种到MRS肉汤培养基中，37℃恒温培养24h～72...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱英莲，杨庆利，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37