一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法技术

本发明专利技术公开了一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，浸泡消毒然后用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，获得无菌苗；S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；S4.组培苗移栽成活：将株高3‑4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入营养钵中。

【技术实现步骤摘要】
一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法
本专利技术属于植物组织离体培养繁殖
，具体涉及一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法。
技术介绍
粉葛(PuerariathomsoniiBenth)为豆科葛属(PuerariaDC.)植物中资源较为丰富的一类，是国家农业部和卫计委共同认定的药食两用植物，素有“北参南葛”、“亚洲人参”之美誉。粉葛富含淀粉，鲜葛根中淀粉含量约为15％-32％，是重要的淀粉工业原料，可作为非粮生物质新能源来源。同时，粉葛块根中含有葛根素、大豆苷等异黄酮类物质和10多种人体所必需的微量元素，不仅具有清热解毒、生津透疹、升阳止泻的作用，而且在心血管系统、抗癌、降血糖等方面显示了多种药理活性，是新兴的绿色保健食品和出口紧销产品。随着大健康理念的产生及产业发展，药食同源的粉葛越来越受到人们的重视。粉葛主要分布在长江以南地区，广西粉葛种质资源丰富，分布面积广，年种植葛根面积超过近20万亩，居全国首位。其中，广西梧州市藤县和平镇是中国著名的“葛根之乡”，从20世纪90年代以来就大规模发展粉葛种植。因此，开展野葛规模化育苗技术，对葛根产业的健康发展意义重大。现有研究中，粉葛育苗主要采用扦插和组织离体培养繁殖两种方式。例如：中国专利CN102144555B一种葛根的快速繁殖方法，是将葛根幼芽消毒后接种到配制好的培养基上萌动后转接到配制好的分化培养基上培养，见有幼叶抽出，茎节拉长，剪断接入上述配制好的分化培养基上进行扩繁；中国专利申请CN106172004A葛根的快速繁殖方法，是选用葛根茎尖作为外植体，芽诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加0.25-0.35毫克/升2，4-二氯苯氧醋酸，生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，添加0.25-0.3毫克/升萘乙酸以及0.1-0.2毫克/升赤霉素，壮苗培养基以2/3MS培养基为基本培养基，添加0.3-0.5毫克/升萘乙酸；茎尖的萌发率均达92％以上，生根率可达91％以上；中国专利申请CN108064699A一种葛根植物的组织离体培养繁殖方法，利用葛根植物茎段的薄切片为外植体，通过愈伤组织诱导、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养和可选的壮苗培养步骤完成。以上研究公开了葛根植物的组织离体培养繁殖方法，但是有一个共同特点，其种苗增殖方式都是通过丛生芽增殖，再经过不定芽生根培养、壮苗并移栽成活环节，这一技术路线存在苗长势弱，需要通过更换培养基进行壮苗培养或者单独进行壮苗、生根培养等技术环节来提高组培苗的质量。
技术实现思路
针对上述问题。为了克服以上缺点，本专利技术目的在于提供一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，既提高粉葛组培苗质量和缩短培养周期，又能够为粉葛多倍体育种和毛状根遗传转化技术提供良好的受体材料。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，浸泡消毒然后用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，获得无菌苗；初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA0.02-0.05mg/L+IBA0.01-0.02mg/L+PVP0.02％-0.05％+1-氨基环丙烷羧酸2-4mg/L+蔗糖30g/L；S4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入营养钵中。本专利技术S1所述的浸泡消毒然后用无菌水冲洗，是先用0.1％升汞浸泡消毒6-10min，然后用无菌水冲洗4-5次。S2所述的将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d，培养周期为25-30天。S3所述的继代增殖生根培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d；所述的间歇浸没培养条件为每4小时培养2分钟。S3所述的继代增殖生根培养得到葛根组培苗也可直接生根，其生根率为99％以上。S4所述的从培养室移入温室大棚炼苗，是从培养室移入温室大棚炼苗5-7d；所述的营养钵，其中的混合基质是泥炭土：珍珠岩＝3:1的体积比。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：1、现有技术中粉葛组培方法一般包括外植体的处理和消毒、愈伤组织诱导、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养和可选的壮苗培养等步骤，其种苗增殖方式都是通过丛生芽增殖，再经过不定芽生根培养、壮苗并移栽成活环节，这一技术路线存在苗长势弱，需要通过更换培养基进行壮苗培养或者单独进行壮苗、生根培养等技术环节来提高组培苗的质量；而本专利技术通过单芽茎段增殖及一步成苗方法，既提高了粉葛组培苗质量和缩短了培养周期，又能够为粉葛多倍体育种和毛状根遗传转化技术提供良好的受体材料。2、本专利技术方法是一种高效、简易的粉葛离体繁育技术方法，采用单芽继代增殖及一步成苗的方法，不仅操作简单，所获得的组培苗健壮生根率高，生根率为99.6-100％，植株根系旺盛，移栽成活率高，本专利技术方法的移栽成活率高达99％以上。3、本专利技术所述继代增殖生根培养的培养方式为间歇式浸没培养，与现有的粉葛组培培养方式相比，可以显著提高生根率，且根系发达，提高了组培苗的移栽成活率，同时避免了移栽时清洗培养基的步骤，减轻工作量，提高工作效率。4、本专利技术方法中1-氨基环丙烷羧酸(ACC)为含于梨及苹果果汁中的非蛋白性质的氨基酸，为环状氨基酸的一种，植物组织一般都具有在有氧的条件下使ACC分解生成乙烯的活性。本实验通过添加适宜浓度的ACC可显著提高葛根组培苗的生根率，同时达到了壮苗的效果，提高了移栽成活率；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可有效抑制粉葛组培苗在培养过程中因褐化导致植株生长缓慢、降低生长势等不利因素。【具体实施方式】以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式做进一步说明。实施例1一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，先用0.1％升汞浸泡消毒10min，然后用无菌水冲洗5次，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500lx，光照时间16h/d，培养周期为25天，获得无菌苗；初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L6-BA+0.05mg/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：具体包括如下步骤：/nS1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，浸泡消毒然后用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；/nS2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，获得无菌苗；/n初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；/nS3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；/n继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA 0.02-0.05mg/L+IBA 0.01-0.02mg/L+PVP0.02％-0.05％+1-氨基环丙烷羧酸2-4mg/L+蔗糖30g/L；/nS4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入营养钵中。/n

【技术特征摘要】
1.一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，浸泡消毒然后用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，获得无菌苗；
初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；
继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA0.02-0.05mg/L+IBA0.01-0.02mg/L+PVP0.02％-0.05％+1-氨基环丙烷羧酸2-4mg/L+蔗糖30g/L；
S4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入营养钵中。


2.根据权利要求1所述的一种粉葛单芽茎段增殖及...

【专利技术属性】
技术研发人员：严华兵，肖亮，曾文丹，尚小红，曹升，陆柳英，赖大欣，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西;45