用于提取细胞核的液体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于提取细胞核的液体及其应用。本发明专利技术首先公开了一种用于提取细胞核的液体，由Na

Liquid for extracting nucleus and its application

【技术实现步骤摘要】
用于提取细胞核的液体及其应用
本专利技术涉及细胞核提取领域。具体涉及用于提取细胞核的液体及其应用。
技术介绍
流式细胞仪在植物科学领域中主要用于植物细胞DNA含量测定、染色体倍性分析和细胞周期分析等。获得高质量的样品细胞核提取物是测定关键。自从流式细胞术应用到植物学领域以来，已经筛选出多种配方用于提取不同来源植物材料的细胞核。由于植物种类繁多，不同植物组织结构和化学成份存在很大差异，现有的公开配方不能同时适用于多种植物材料。尤其是对于次生代谢物复杂的植物材料，现有用于提取细胞核的液体远不能满足测试要求，往往需要根据样品特性优化提取液成分以期获得最佳的提取效果。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题为如何获得细胞核含量和质量高的植物细胞核提取物，尤其是如何从富含多糖多酚的植物材料中获得细胞核含量高和质量高的植物细胞核提取物，以用于流式细胞仪的检测。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了用于提取细胞核的液体。本专利技术用于提取细胞核的液体由Na3C6H5O7·2H2O、MgCl2、MOPS、NaCl、EDTA-Na2、TritonX-100、Tween-20、β-巯基乙醇、PVPk12和水组成；所述Na3C6H5O7·2H2O在所述液体的含量为30mmol/L、所述MgCl2在所述液体的含量为45mmol/L、所述MOPS在所述液体的含量为20mmol/L、所述NaCl在所述液体的含量为20mmol/L、所述EDTA-Na2在所述液体的含量为20mmol/L、所述TritonX-100在所述液体的体积百分含量为0.1％、所述Tween-20在所述液体的体积百分含量为0.5％、所述β-巯基乙醇在所述液体的含量为2uL/mL和所述PVPk12在所述液体的体积百分含量为1％。上述用于提取细胞核的液体的pH值为7.0。本专利技术进一步提供了上述用于提取细胞核的液体在如下任一中的应用：1)在制备植物细胞核提取物中的应用；2)在提高植物细胞核提取物中细胞核含量和/或质量中的应用；3)在制备提高植物细胞核提取物中细胞核含量和/或质量的产品中的应用；4)在制备流式细胞仪检测样品中的应用。本专利技术进一步提供了制备植物细胞核提取物的方法。本专利技术制备植物细胞核提取物的方法，包括如下步骤：将植物材料加入到用于提取细胞核的液体中，在所述液体中破碎植物材料，即得植物细胞核提取物。上述方法中，所述植物材料与用于提取细胞核的液体的质量体积比为10-20mg：250uL。上述方法中，所述植物材料为富含多糖和/或多酚的植物材料，如五味子。上述方法中，所述植物材料为干燥材料或新鲜材料；具体的，所述干燥材料为硅胶干燥材料。上述方法制备得到的植物细胞核提取物也在本专利技术的保护范围之内。本专利技术进一步还提供了上述植物细胞核提取物在流式细胞仪检测中的应用。PVPk12或Tween-20在提高植物细胞核提取物中细胞核含量和/或质量中的应用或在制备提高植物细胞核提取物中细胞核含量和/或质量的产品中的应用也在本专利技术的保护范围之内。PVPk12和Tween-20在提高植物细胞核提取物中细胞核含量和/或质量中的应用或在提高植物细胞核提取物中细胞核含量和/或质量的产品中的应用也在本专利技术的保护范围之内。本专利技术中细胞核质量高主要体现在流式细胞仪检测核DNA时峰形对称，窄而高，前面的碎片峰低，变异系数CV小于5％。本专利技术首次将用于提取细胞核的液体中常用试剂PVP40或PVPk15替换为PVPk12，并添加了利于细胞核从粘稠的次生代谢物中分离出来的Tween-20，得到的用于提取细胞核的液体在极少用量和极短时间内能提取足够数量和质量的细胞核用于流式细胞仪检测中DNA含量测定、染色体倍性分析。本专利技术用于提取细胞核的液体适用于包括富含多糖多酚类次生代谢物植物在内的多种植物材料细胞核的提取，尤其是适用于干燥样品细胞核的提取，在进行流式细胞仪检测时与新鲜材料检测结果一致，从而有效地避免破坏性采样和新鲜材料长途运输问题，极大降低了野外植物细胞DNA含量测定、染色体倍性分析的工作难度。因此，本专利技术用于提取细胞核的液体具有广泛的适用性。附图说明图1为不同用于提取细胞核的液体提取新鲜蓝莓叶片的核DNA效果的流式图。图2为PVPk12-mGB2和PIAbsoluteP提取草本植物新鲜叶片的核DNA效果的流式图。图3为PVPk12-mGB2和PIAbsoluteP提取木本与藤本植物新鲜叶片的核DNA效果的流式图。图4为以新鲜番茄为内标测定新鲜无花果叶片核DNA含量的流式图；其中，A：PIAbsoluteP；B：PVPk12-mGB2用于提取细胞核的液体；P1：无花果叶片；P2：番茄叶片。图5为以新鲜番茄为内标测定无花果硅胶干燥叶片核DNA含量的流式图；其中，A：PIAbsoluteP用于提取细胞核的液体提取的无花果硅胶干燥叶片核DNA；B：PVPk12-mGB2用于提取细胞核的液体提取的无花果硅胶干燥叶片核DNA；P1：番茄叶片；P2：无花果硅胶干燥叶片图6为蓝莓染色体倍性分析的流式图；其中，A：野生型二倍体蓝莓新鲜叶片；B：野生型六倍体蓝莓新鲜叶片；C：野生型六倍体蓝莓硅胶干燥叶片；P1：二倍体；P2：六倍体；P3：六倍体。图7为Tween对细胞核提取影响的流式图；其中，A：不添加Tween-20的对照组；B：0.1％Tween-20组；C：0.5％Tween-20组。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中各原料的购买来源：PVPk15购自TCI，货号为TCI-P0471-25G；PVPk12和PVP70购自ACROs，货号为276142500--250GR和222271000-100GR；PVP40购自Sigma，货号为P5288-100G。实施例1细胞核提取物的制备及核DNA含量检测和染色体倍性分析一、用于提取细胞核的液体本实施例提供了如下用于提取细胞核的液体：PVP-mGB2、LB01、WPS、Tris-MgCl2和商品化的试剂盒PIAbsoluteP，具体如下：1、PVP-mGB2：本步骤提供了如下4种用于提取细胞核的液体：PVPk12-mGB2、PVPk15-mGB2、PVP40-mGB2和PVP70-mGB2。具体如下：1)PVPk12-mGB2由溶质和水组成，溶质中各组分及其含量为：Na3C6H5O7·2H2O30mmol/L，MgCl245mmol/L，MOPS20mmol/L，NaCl20mmol/L，EDTA-Na220mmol/L，TritonX-1000.1％(v/v)，Tween-200.5％(v/v)，β-巯基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于提取细胞核的液体，其特征在于：所述液体由Na

【技术特征摘要】
1.用于提取细胞核的液体，其特征在于：所述液体由Na3C6H5O7·2H2O、MgCl2、MOPS、NaCl、EDTA-Na2、TritonX-100、Tween-20、β-巯基乙醇、PVPk12和水组成；所述Na3C6H5O7·2H2O在所述液体的含量为30mmol/L、所述MgCl2在所述液体的含量为45mmol/L、所述MOPS在所述液体的含量为20mmol/L、所述NaCl在所述液体的含量为20mmol/L、所述EDTA-Na2在所述液体的含量为20mmol/L、所述TritonX-100在所述液体的体积百分含量为0.1％、所述Tween-20在所述液体的体积百分含量为0.5％、所述β-巯基乙醇在所述液体的含量为2uL/mL和所述PVPk12在所述液体的体积百分含量为1％。


2.权利要求1所述的液体在制备植物细胞核提取物中的应用。


3.权利要求1所述的液体在提高植物细胞核提取物中细胞核含量和/或质量中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：张晋丹，靳婉青，冯旻，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11