一种多肽在治疗骨髓增生异常综合症中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽在治疗骨髓增生异常综合症中的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术筛选得到了能够有效抑制转录因子TWIST1及DNMT3a结合的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该多肽与其他激酶抑制剂类药物相比，还可增强细胞对地西他滨的敏感性，经动物实验证实，该多肽与地西他滨联用可以有效抑制血液肿瘤的生长，抑制率可达80％，并提高小鼠的生存率，由25％提高至75％。

Application of a peptide in the treatment of myelodysplastic syndrome

【技术实现步骤摘要】
一种多肽在治疗骨髓增生异常综合症中的应用
本专利技术涉及一种多肽在治疗骨髓增生异常综合症中的应用，属于生物医药

技术介绍
骨髓增生异常综合征(MyelodysplasticSyndrome，MDS)是由全能干细胞水平上的恶性变化导致的分化障碍的一组克隆性、异质性造血干细胞病，其特点为无效造血、外周血细胞减少和骨髓造血细胞的形态学变异。在早期/低危MDS患者中，骨髓细胞具备凋亡的能力，存在较低水平的恶性增殖倾向。随着MDS的进一步发展，凋亡现象随之平行下降，克隆细胞获得增强的恶性增殖能力，并加速向急性骨髓性白血病(Acutemyeloidleukemia，AML)转化。MDS的病理生理学特征为：可能发生基因突变的细胞遗传学改变和在晚期阶段广泛的基因超甲基化。研究表明MDS中基因的表达受到了DNA甲基化(DNAmethylation)的抑制，同时伴随着高水平表达的DNA甲基转移DNMT(DNA(Cytosine-5-)-Methyltransferase)，包括DNMT1、DNMT3a和DNMT3b，其中DNMT3b的表达增强程度低于DNMT1和DNMT3a。DNA甲基化为DNA化学修饰的一种形式，也是表观遗传编码(epigeneticcode)的一部分。DNA甲基化过程会使甲基添加到DNA分子中胞嘧啶环的5'碳上，在不改变DNA序列的前提下改变遗传表现。DNA甲基化状态的改变是引发肿瘤的一个重要因素,这种变化包括基因组整体甲基化水平降低和CpG岛局部甲基化水平的异常升高,从而导致基因组的不稳定(如染色体的不稳定、可移动遗传因子的激活、原癌基因的表达)和抑癌基因的不表达等。骨髓移植是目前唯一能够治愈MDS的方法，能使无病生存期延长35-50％。但其成功率低，许多患者并发症和功能受损导致治疗效果不佳，且毒副作用使其在老年MDS患者中使用受限。密集化疗主要使用蒽环霉素和阿糖胞苷的联用，但在高风险骨髓增生异常综合症中密集化疗有受限制的迹象。与上述传统的治疗方法相比，去甲基化疗法相对有效且风险低，为有效治疗MDS提供了新的思路。去甲基化药物治疗是指用药物抑制启动子区域的甲基化，激活沉默的抑癌基因，达到治疗肿瘤的目的。临床上常使用DNA甲基转移酶抑制剂(DNAmethyltransferaseinhibitors，DMNTI)达到去甲基的疗效，这类药物能有效延长MDS患者的生存期。现阶段运用较为广泛的药物是5-氮杂胞苷(Azacitidine，AZA)和地西他滨(Decitabine,5-Aza-2′-deoxycytidine)(分别于2004和2006在美国批准上市，中国也于2009年批准免临床试验)。虽然DNA甲基化已经被认为在MDS发病机理中处于关键的地位，而且5-阿扎胞苷和地西他滨在临床上使用也颇有疗效，但是依然存在部分患者去甲基化治疗后，病情无法得到缓解或二次复发。
技术实现思路
针对现有技术中存在的细胞对地西他滨等药物耐药的问题，本专利技术设计了一段多肽，该多肽可以有效抑制转录因子TWIST1及DNMT3a的结合，增强细胞对地西他滨的敏感性，并且在NSG免疫缺陷鼠异源移植中证实该多肽与地西他滨联用可以有效抑制血液肿瘤的生长，提高小鼠的生存率。本专利技术的第一个目的是提供一种多肽在制备预防或治疗骨髓增生异常综合症和/或急性髓系白血病的药物或药物组合物方面的应用；所述多肽含有如SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。在一种实施方式中，所述多肽的氨基酸序列如LRKIIPTLPSDKLSKIQTLKLAA所示。在一种实施方式中，所述应用还包括增强细胞对药物敏感性，或减弱细胞的耐药性。在一种实施方式中，所述应用是增强细胞对去甲基化类药物的敏感性。在一种实施方式中，所述去甲基化类药物包括但不限于地西他滨(Decitabine，5-阿扎-2-脱氧胞苷)、5-氮杂胞苷(Azacitidine，5-阿扎胞苷)。在一种实施方式中，所述细胞包括但不限于人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞。本专利技术的第二个目的是提供一种药物组合物，含有地西他滨和氨基酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示的多肽。在一种实施方式中，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。在一种实施方式中，所述多肽与地西他滨的质量比为1:0.05～0.15。在一种实施方式中，所述多肽与地西他滨的有效剂量分别为10mg/kg与0.8mg/kg。在一种实施方式中，所述药物组合物还含有药物上可接受的载体。在一种实施方式中，所述药物组合物为液体注射剂或冻干注射剂。在一种实施方式中，所述冻干注射剂还含有右旋糖酐、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000。有益效果：本专利技术筛选得到了能够有效抑制转录因子TWIST1及DNMT3a结合的多肽，该多肽与其他激酶抑制剂类药物相比，还可增强细胞对地西他滨的敏感性，经动物实验证实，该多肽与地西他滨联用可以有效抑制血液肿瘤的生长，抑制率可达80％，并提高小鼠的生存率，由25％提高至75％。附图说明图1为多肽阵列芯片显色点定量分析(A)；ELISA实验验证TWIST1与DNMT3a的结合位点(B)；ELISA实验验证多肽抑制TWIST1与DNMT3a的结合能力(C)；蛋白印迹实验验证多肽抑制TWIST1与DNMT3a的结合能力(D)；其中，KG1a-TWIST+53-57多肽为KG1a-TWIST1细胞用53-57多肽处理48h；KG1a-TWIST+66-70号多肽为KG1a-TWIST1细胞用66-70号多肽处理48h。图2为多肽与地西他滨共同处理对MDS细胞增殖的影响。图3为NSG小鼠异源移植模型示意图(A)；地西他滨或地西他滨与多肽未处理小鼠外周血中KG1a-TWIST1细胞含量的检测(B)；地西他滨或地西他滨与多肽处理3次后小鼠外周血中KG1a-TWIST1细胞含量的检测(C)；小鼠生存期分析(D)。具体实施方式实施例1多肽阵列芯片检测TWIST1和DNMT3a的结合位点在NCBI上检索得到TWIST1蛋白序列，TWIST1蛋白共含有202个氨基酸，以15个氨基酸为一个单位合成一条多肽，下一条多肽向后两个氨基酸，与上一条多肽重叠13个氨基酸，以此类推，共将TWIST1分为95条多肽(1～95)，多肽序列如表1所示。表1多肽阵列芯片信息将这些多肽固定在PVDF膜上，之后将2mL，1mg/mL纯化的His-DNMT3a蛋白与PVDF膜室温孵育1h；用1×TBST缓冲液(50mL1M，pH7.5的Tris-HCL，8gNaCl，0.2gKCl，0.5mL吐温，蒸馏水定容至1L)洗涤PVDF膜3次，每次5min，以体积比1：1000的比例加入His抗体，室温孵育2h；用TBST缓冲液洗涤PVDF膜3次，每次5min，以体积比1：5000的比例加入偶联HRP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多肽在制备预防或治疗骨髓增生异常综合症和/或急性髓系白血病的药物或药物组合物方面的应用，其特征在于，所述多肽含有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.多肽在制备预防或治疗骨髓增生异常综合症和/或急性髓系白血病的药物或药物组合物方面的应用，其特征在于，所述多肽含有如SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用还包括增强细胞对药物敏感性，或减弱细胞的耐药性。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述对药物的敏感性是指对去甲基化药物的敏感性。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述去甲基化药物包括地西他滨或5-氮杂胞苷。


5.一种药物组合物，其特征在于，含有地西他滨和多肽；所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.3所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：李想，李鸿姣，关锋，庞星辰，万婷，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61