一种由GC376与GS-441524组成的药物组合物及其抑制新冠病毒的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种药物组合物，它由GC376与GS‑441524组成。体外细胞试验结果表明：该组合物能抑制新型冠状病毒SARS‑CoV‑2在细胞中增殖，且药效优于单独用药，具有显著的协同增效作用，可作为新型冠状病毒SARS‑CoV‑2抑制剂，用于治疗COVID‑19肺炎，具有疗效好，安全性高，降低病毒耐药性，降低药物毒副作用等优点。

A pharmaceutical composition composed of gc376 and gs-441524 and its application in inhibiting new coronavirus

【技术实现步骤摘要】
一种由GC376与GS-441524组成的药物组合物及其抑制新冠病毒的用途
本专利技术属于制药领域，具体涉及一种抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2的药物组合物及其用途。
技术介绍
新型冠状病毒肺炎(CoronaVirusDisease2019，COVID-19)，简称“新冠肺炎”，是由新型冠状病毒SARS-CoV-2引起的一种以发烧、干咳、乏力和具有一定致死率为主要特征的接触性传染病。自2019年12月新冠肺炎爆发以来，确诊感染病例已经超过非典，死亡病例在不断增加，造成了严重的社会危害和经济损失，世界卫生组织宣布新冠肺炎这一疫情已经构成“国际关注的突发公共卫生事件”。自疫病爆发以来，对该传染病的研究主要集中在流行性病学调查、临床分离毒株的序列比对与分析、病毒的检测方法等方面，关于新型冠状病毒的入侵、复制、免疫调控机制研究还处于初级探索阶段，且没有疫苗能提供充分的保护，因此关于SARS-CoV-2的抗病毒药物研究具有重要意义。GC376是一种广谱多肽类似物抑制剂，靶向抑制病毒编码的3C样蛋白酶，与3C样蛋白酶的活性位点结合。反应时，GC376失去亚硫酸盐基团结构暴露出醛基，醛基与3CLpro的亲核半胱氨酸残基反应形成共价键。这阻碍了3C样蛋白酶的催化作用，进而抑制病毒的复制。研究表明，GC376对诺如病毒(NV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、鼠肝炎病毒(MHV)等多种病毒具有良好的抑制活性。GC376的化学名称是3-Pyrrolidinepropanesulfonicacid,α-hydroxy-β-[[(2S)-4-methyl-1-oxo-2-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]pentyl]amino]-2-oxo-,sodiumsalt(1:1),(βS)-。分子式为C21H30N3NaO8S，分子量为507.53，结构式如下：GS-441524是一种核苷类似物，主要靶向病毒RNA聚合酶，干扰病毒RNA转录/复制过程。GS-441524在细胞内通过细胞激酶磷酸化为具有活性的三磷酸代谢物(NTP结构类似物)，在病毒RNA合成中，活性NTP结构类似物充当天然三磷酸核苷的竞争物与天然核苷(NTP)竞争参与RNA的转录/复制，当转录/复制产物中插入GS-441524分子，转录/复制将提前终止，进而抑制病毒RNA转录/复制过程。目前已发现GS-441524对埃博拉、SARS、胡宁病毒、呼吸道合胞病毒等表现出一定的抑制活性。GS-441524的化学名称是D-Altrononitrile,2-C-(4-aminopyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)-2,5-anhydro。分子式为C12H13N5O4，分子量为291.267，结构式如下：以上两种药物目前在临床上都主要用于治疗猫传染性腹膜炎(FIP)，申请人前期申请了“一种由GC376与GS-441524组成的猫冠状病毒抑制剂组合物”专利，公开号CN110215456A，研究发现，该组合物能抑制猫冠状病毒在细胞中的增殖且具有显著的协同作用，但目前尚未见将其用于抑制人类易感的冠状病毒及其导致的COVID-19肺炎方面的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种由GC376与GS-441524组成的药物组合物及其在抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2及治疗相关疾病方面的新用途。体外细胞试验结果表明：组合物对非洲绿猴肾细胞正常细胞的毒性作用很小，而对新型冠状病毒SARS-CoV-2具有明显的抑制作用，能明显降低病毒在细胞中的毒价；病毒在细胞中的毒价的测定结果表明，组合物能抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2在细胞中增殖且效果明显高于单独用药，具有显著的协同增效作用。因此，GC376与GS-441524组合物可作为新型冠状病毒SARS-CoV-2抑制剂，用于治疗COVID-19肺炎，具有疗效好，安全性高，降低病毒耐药性，降低药物毒副作用等优点。所述组合物中，GC376与GS-441524的摩尔比为1：1。附图说明图1是组合物对Vero-E6细胞的毒性试验结果。图2是组合物抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2的细胞显微图。图3是组合物抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2的EC50测定曲线。图4是组合物抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2的TCID50测定结果，与未加入药物的病毒对照组相比，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001。图5是组合物以及单独用药的TCID50比较结果，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。需要说明的是，本专利技术的实施例仅限于对本专利技术进行说明，而没有限制作用。实施例中所涉及的有关试验方法和其它各种实验操作，均为本领域的常规技术，文中没有特别说明的部分，本领域的普通技术人员可以参照本专利技术申请日之前的各种常用工具书、科技文献或相关的说明书、手册等予以实施。试验材料：非洲绿猴肾细胞Vero-E6为华中农业大学实验室保存；SARS-CoV-2毒株为浙江CDC分离的19#毒株；细胞生长液为含10％FBS的DMEM；细胞维持液为含2％FBS的DMEM。实施例1药物组合物对细胞的毒性试验试验方法：1)取生长状态良好的Vero-E6细胞(非洲绿猴肾细胞)进行消化传代，用细胞生长液调整细胞密度为1×105/mL接种96孔板，100μL/孔，放置于37℃、5％CO2培养箱培养16h；2)16h后，弃去孔中培养基，1×PBS洗三次，甩干后加入细胞维持液，同时加入组合物(摩尔比为1：1)，使孔内组合物的终浓度为10000μM、1000μM、500μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM，同时设置细胞对照，放置于37℃、5％CO2培养箱培养；3)72h后，用试剂进行细胞活力检测。试验结果：结果见图1。测定细胞存活率能反应药物对Vero-E6细胞的毒性作用，从图中可以看出，该组合物对Vero-E6细胞的毒性作用较小，其半数细胞毒性浓度(CC50)大于500μM。实施例2药物组合物在细胞水平对病毒的抑制效果试验方法：1)取生长状态良好的Vero-E6细胞进行消化传代，用细胞维持液调整细胞密度为1×105/mL接种于96孔板，100μL/孔，放置于37℃、5％CO2培养箱培养16h；2)16h后，弃去孔中培养基，1×PBS洗三次，甩干后每孔各加入50μL浓度为100μM的GC376和GS-441524，每孔加入100μL0.01MOI的SARS-CoV-2病毒，使组合物的终浓度为50μM。同时设置细胞对照和病毒对照，放置于37℃、5％CO2培养箱培养；3)接毒48h后，显微镜观察化合物与病毒共同作用后的细胞状态变化并拍照保存。试验结果：结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物组合物，其特征在于由GC376与GS-441524组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，其特征在于由GC376与GS-441524组成。


2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述GC376与GS-441524的摩尔比为1：1。

【专利技术属性】
技术研发人员：彭贵青，刘紫微，陈西，田大勇，
申请(专利权)人：华中农业大学，武汉康湃特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42