【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于重组蛋白表达的融合标签相关申请本申请要求2017年7月28日提交的美国临时申请号62/538,505的权益。该申请的全部教导内容通过引用并入本文。通过引用并入ASCII文本文件的材料该申请通过引用并入与之同时提交的以下ASCII文本文件中包含的序列表：文件名：53911006001_SEQUENCELISTING.TXT；创建于2018年7月26日，大小为11KB。
技术介绍
当前的生物技术时代始于重组DNA的产生和物种间基因的操纵。如今，从基础科学到大规模生产蛋白质药物，该技术已在各种环境中得到广泛实施。尽管操纵重组DNA并将其插入各种不同的宿主生物已变得相对简单，但由该DNA编码的蛋白的表达和纯化仍然具有挑战性。表达重组蛋白的最常用宿主是大肠杆菌。大肠杆菌中蛋白的生产相对快速、廉价、用户友好，并且可以进入不同的细胞区室，例如细胞质或周质，甚至分泌到细胞外。然而，许多期望的蛋白和肽的表达产量和溶解性是不可预测的，并且经常导致在大肠杆菌和/或其他表达宿主中的表达低或甚至没有表达。解决这些问题的尝试通常涉...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其包含DEEP融合标签和靶蛋白。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170728 US 62/538,5051.一种融合蛋白，其包含DEEP融合标签和靶蛋白。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述DEEP融合标签在所述靶蛋白的N端。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述DEEP融合标签包含多个表面暴露的组氨酸残基。
4.根据权利要求1、2或3所述的融合蛋白，其中所述DEEP融合标签包含氨基酸序列：MYGKLNDLLEDLQEVLKNLHKNWHGGKDNLHDVDNHLQNVIEDIHDFMQGGGSGGKLQEMMKEFQQVLDELNNHLQGGKHTVHHIEQNIKEIFHHLEELVHR(SEQIDNO:1)。
5.根据权利要求1、2或3所述的融合蛋白，其中所述DEEP融合标签包含氨基酸序列：YGHLNDLLEDLQEVLHNLHHNWHGGHDNLHDVDNHLQNVIEDIHDFMQGGGSGGHLQEMMHEFQQVLDELNNHLQGGHHTVHHIEQNIHEIFHHLEELVHR(SEQIDNO:10)。
6.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其还包含所述DEEP融合标签和靶蛋白之间的接头氨基酸序列。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中所述接头氨基酸序列包含聚甘氨酸序列。
8.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其还包含所述DEEP融合标签和所述靶蛋白之间的切割位点。
9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述切割位点是蛋白酶切割位点。
10.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述切割位点是化学切割位点。
11.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其中所述靶蛋白选自绿色荧光蛋白(GFP)、β淀粉样(Aβ)多肽、Trp笼蛋白、LS3多肽、胰岛素A链多肽和胰岛素B链多肽。
12.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其包含第一靶蛋白和第二靶蛋白，其中所述第二靶蛋白不同于所述第一靶蛋白。
13.根据权利要求12所述的融合蛋白，其中所述第一靶蛋白是在所述DEEP融合标签的C端，和所述第二靶蛋白是在所述DEEP融合标签的N端。
14.根据权利要求12或13所述的融合蛋白，其中所述第一靶蛋白是胰岛素A链多肽，和所述第二靶蛋白是胰岛素B链多肽。
15.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白在约4至约10的pH范围是稳定的。
16.一种核酸分子，其编码前述权利要求中任一项所述的融合蛋白。
17.一种宿主细胞，其包含权利要求16所述的核酸。
18.根据权利要求17所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。
19.一种获得靶蛋白的方法，其包括以下步骤：
a.将编码融合蛋白的DNA构建体引入到宿主细胞中，其中所述融合蛋白包含DEEP融合标签和靶蛋白；
b.在所述宿主细胞中表达所述融合蛋白；
c.分离所述融合蛋白；和
d.切割所述融合蛋白以将所述DEEP融合标签与所述靶蛋白分开；
从而获得所述靶蛋白。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述融合蛋白通过所述DEEP融合标签与亲和树脂的结合而分离。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述亲和树脂是固定化的金属。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述固定化的金属是固定化的镍。
23.根据权利要求19-22中任一项所述的方法，其中切割所述融合蛋白以将所述DEEP融合标签与所述靶蛋白分开的步骤包括使所述融合蛋白与蛋白酶接触。
24.根据权利要求19-22中任一项所述的方法，其中切割所述融合蛋白以将所述DEEP融合标签与所述靶蛋白分开的步骤包括使所述融合蛋白与化学切割剂接触。
25.一种DNA构建体，其包含编码DEEP融合标签的核苷酸序列和用于引入编码靶蛋白的核苷酸序列的克隆位点。
26.根据权利要求25所述的DNA构建体，其中所述DNA构建体是质粒。
27.根据权利要求25或权利要求26所述的DNA构建体，其中编码所述DEEP融合标签的所述核苷酸序列在所述克隆位点的上游。
28.根据权利要求25、26或27所述的DNA构建体，其还包含在编码所述DEEP融合标签的所述核苷酸序列与所述克隆位点之间的编码接头氨基酸序列的核苷酸序列。
29.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·赫克特，S·扎西特斯凯，
申请(专利权)人：普林斯顿大学理事会，
类型：发明
国别省市：美国;US
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