【技术实现步骤摘要】
基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析方法
本专利技术涉及一种磁性分离技术和时间分辨荧光免疫分析技术的结合，具体是一种基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析方法及相应的试剂盒。
技术介绍
艾滋病是一种由人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)感染人免疫系统细胞并造成免疫系统缺陷，严重威胁人类健康的疾病。针对该疾病目前尚无免疫预防、无根除体内病毒的有效药物，因此具有高感染率、高病死率的特征。丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus,HCV)感染引起的病毒性肝炎。丙型肝炎呈全球性流行，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。由于HIV与HCV都可以通过输血、静脉吸毒、性传播、母婴垂直传播等途径传播,因而HIV和HCV共感染比较常见。有研究表明，HIV和HCV合并感染率达30％，在吸毒人群中甚至高达70％以上。大...
【技术保护点】
1.一种基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：含有偶联有HIV重组抗原的免疫磁珠、偶联有HCV重组抗原的免疫磁珠、铕离子标记HIV-Ag及钐离子标记HCV-Ag，偶联有HIV重组抗原的免疫磁珠称为免疫磁珠①，偶联有HCV重组抗原的免疫磁珠称为免疫磁珠②。/n
【技术特征摘要】
20191114 CN 20191111188091.一种基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：含有偶联有HIV重组抗原的免疫磁珠、偶联有HCV重组抗原的免疫磁珠、铕离子标记HIV-Ag及钐离子标记HCV-Ag，偶联有HIV重组抗原的免疫磁珠称为免疫磁珠①，偶联有HCV重组抗原的免疫磁珠称为免疫磁珠②。
2.根据权利要求1所述的基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：还含有两株生物素化的HIV抗原和两株生物素化的HCV抗原；
其中一株HIV抗原用于偶联免疫磁珠①，另外一株HIV抗原用铕离子标记；
一株HCV抗原用于偶联免疫磁珠②，另外一株HCV抗原用钐离子标记。
3.根据权利要求2所述的基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：检测方法是先通过双抗原夹心的免疫反应，形成免疫磁珠①-HIV-Ab-铕标记抗原复合物、免疫磁珠②-HCV-Ab-钐标记抗原复合物，再通过磁性分离技术将吸附HIV-Ab及HCV-Ab的免疫磁珠与上清分离洗涤，最后加入增强液并通过时间分辨仪器测值。
4.一种基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析方法，其特征在于：具有如下步骤，
(1)链霉亲和素磁珠制备：具体经过磁珠活化、链霉亲和素与磁珠偶联、洗涤、封闭、保存步骤制备得到链霉亲和素磁珠；
(2)生物素化抗原制备：具体经过生物素与抗原连接、透析、保存步骤制备得到高特异性的生物素化的HIV和HCV抗原；
(3)铕和钐离子标记抗原制备：具体是分别选用一株HIV-Ag进行Eu3+标记，一株HCV-Ag进行Sm3+标记，制备得铕离子标记HIV-Ag及钐离子标记HCV-Ag；其中，以体积比计，HIV-Ag与Eu3+标记物的比例为5:1，HCV-Ag与Sm3+标记物的比例为2.5:1；
(4)测定方法：
往反应管加入100μl样品，再加入用分析缓冲液以体积比为1:30稀释的步骤(1)制备的链霉亲和素磁珠50μl，然后加入用分析缓冲液以体积比为1:100稀释的步骤(2)制备的生物素化抗原各50μl，室温震荡孵育45分钟；运用磁性分离技术将吸附HIV-Ab及HCV-Ab的免疫磁珠与上清分离洗涤；最后加入用分析缓冲液以体积比为1:25稀释的步骤(3)制备得铕离子标记HIV-Ag及钐离子标记HCV-Ag各100μl，室温震荡孵育45分钟；重复分离洗涤步骤，最后加入200μl增强液震荡孵育5min进行荧光检测。
5.根据权利要求4所述的基于免疫磁珠的双标记抗HIV及HCV时间分辨荧光免疫分析方法，其特征在于：在步骤(1)中，
磁珠活化过程为：取1ml重悬后的磁珠,重复洗涤3次，加入25μl10mg/ml的EDC和40μl10mg/ml的NHS，用样本旋转混合仪，室温旋转30min；
洗涤过程中使用的洗涤液的为：将25mM的Tris-HCl、0.15MNaCl加入1ml体积百分比为0.05％的Tween20，用浓盐酸调节PH值得到pH7.2的缓...
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