检测甜椒叶脉斑驳病毒的PCR引物组、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测甜椒叶脉斑驳病毒(PVMV)的PCR引物组，包括3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因(NIb)特异引物与2条茄果类植物内参基因Actin特异引物，其中3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因(NIb)特异引物分别为PVMV‑F1、PVMV‑F310和PVMV‑R824，2条茄果类植物内参基因Actin特异引物为PeActin‑F1和PeActin‑R1093。本发明专利技术在1.0％～1.5％琼脂糖中进行PCR扩增结果的检测，不需要使用昂贵的荧光定量PCR仪，具有快速、经济、稳定性强、准确度高和灵敏度高的特点。

PCR primer set, kit and application for detection of pepper vein mottle virus

【技术实现步骤摘要】
检测甜椒叶脉斑驳病毒的PCR引物组、试剂盒及其应用
本专利技术属于作物病毒检测
，具体涉及一种检测甜椒叶脉斑驳病毒(PVMV)的PCR引物组、试剂盒及其应用。
技术介绍
甜椒叶脉斑驳病毒(Pepperveinmottlevirus，PVMV)属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus)，该病毒基因组为一条大小约9.8kb的正义单链RNA，5'端共价结合VPg蛋白，3'端具有Poly(A)尾结构。该病毒能通过摩擦接种感染至少35种不同茄科植物，也能感染藜科、苋科、芸香科和葫芦科植物。不同PVMV株系侵染不同寄主的症状不同，该病毒能够导致辣椒叶片发黄、叶脉扭曲、脉间褪绿，甚至叶片和果实变小、畸形等，并造成大量减产。PVMV病毒起源于非洲，随后传入亚洲，并在非洲和亚洲严重发生，严重的辣椒植物发病率可高达100％并失去经济价值。近年来，该病毒病在我国辣椒产区发生时有报道，如海南、广东、广西、河南、内蒙等地。温暖湿润的气候和丰富的植被能导致PVMV呈现发病率高和严重侵染的趋势，如此，我国华南地区的地理位置和气候环境很可能成为PVMV最适宜的增殖爆发基地本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测甜椒叶脉斑驳病毒的PCR引物组，其特征在于，包括3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因(NIb)特异引物与2条茄果类植物内参基因Actin特异引物，其中3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因(NIb)特异引物分别为PVMV-F1、PVMV-F310和PVMV-R824，2条茄果类植物内参基因Actin特异引物为PeActin-F1和PeActin-R1093，具体如下：/nPVMV-F1：AGGTGTGTAAATGATTTCGGC，如SEQ ID NO.1所示；/nPVMV-F310:TGTGAATGTCCTCGTCTTG，如SEQ ID NO.2所示；/nPVMV-R824：GA...

【技术特征摘要】
1.一种检测甜椒叶脉斑驳病毒的PCR引物组，其特征在于，包括3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因(NIb)特异引物与2条茄果类植物内参基因Actin特异引物，其中3条甜椒叶脉斑驳病毒核内含体蛋白b基因(NIb)特异引物分别为PVMV-F1、PVMV-F310和PVMV-R824，2条茄果类植物内参基因Actin特异引物为PeActin-F1和PeActin-R1093，具体如下：
PVMV-F1：AGGTGTGTAAATGATTTCGGC，如SEQIDNO.1所示；
PVMV-F310:TGTGAATGTCCTCGTCTTG，如SEQIDNO.2所示；
PVMV-R824：GAAAAAGTGAGAGCCAGTTAGT，如SEQIDNO.3所示；
PeActin-F1:GTGACAATGGAACAGGAATG，如SEQIDNO.4所示；
PeActin-R1093:CACTTCCGGTGGACAATG，如SEQIDNO.5所示。


2.一种包含如权利要求1所述引物组的试剂或试剂盒。


3.一种采用如权利要求1所述的引物组检测甜椒叶脉斑驳病毒(PVMV)的PCR检测方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
(1)取待测样品，提取其总RNA，反转录为cDNA；
(2)采用所述引物组，以待测样品cDNA为模板进行PCR反应，获得扩增产物；
(3)1.0％～1.5％琼脂糖电泳检测2～5μL扩增产物，若出现1093bp以及824bp且出现515bp条带，则表示样品cDNA可用且含有PVMV病毒；若仅出现1093bp条带，则表示样品cDNA可用，但未检测到PVMV病毒；若不出现任何条带，则表示样品cDNA不可用。


4.根据权利要求3所述的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系中引物反应方式为：...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚明霞，王日升，王萌，赵虎，吴星，赵曾菁，何志，黄金梅，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西;45