【技术实现步骤摘要】
一种细菌的检测方法
本专利技术属于检测领域，具体涉及一种细菌的检测方法。
技术介绍
病原细菌是病原微生物的一种，存在于食品、水和环境中的病原细菌能够引起多种疾病的爆发，它能够引起细菌的感染并导致许多严重并发症。例如一些常见的致病菌：沙门氏菌(食物中毒)，幽门螺杆菌(胃炎和肝炎)，淋病奈瑟菌(性传播疾病)，奈瑟菌(脑膜炎)，金黄色葡萄球菌(烧伤，蜂窝织炎，脓肿，伤口感染，毒物综合征，肺炎和食物中毒)和链球菌属(肺炎、脑膜炎、耳部感染和咽炎)等。每年有超过3亿例由细菌感染引起的严重的甚至致命的疾病，死亡人数超过200万人，特别是随着细菌耐药性的增强，抗生素耐药性已经成为一个威胁全球健康的问题，到2050年估计除非采取行动，否则AMR导致死亡的人数每年可以增加到1000万人，到2050年对全球经济产生的累计成本达100万亿美元。在此基础上，到2050年，死亡人数惊人的达到每三秒钟就会有一个人死亡，人均治疗费用会达到一万美元。传统的细菌检测方法包括微生物培养法、免疫学方法、分子生物学方法等。细菌培养方法是临床细菌检测的标准方...
【技术保护点】
1.一种细菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)构建标准液滴条形码文库/n(1.1)荧光素修饰ssDNA2/n将荧光素与ssDNA2混合，得到荧光素修饰的ssDNA2；/n(1.2)构建细菌特异性响应的探针/n将荧光素修饰的ssDNA2与对荧光基团起猝灭作用的材料混合，调节pH，然后静置、离心，得到细菌特异性响应的探针，然后测定探针的浓度，构建标准液滴条形码文库；/n(2)制备标准文库溶液/n将细菌特异性响应的探针与反应混合物封装在液滴中，制备标准文库溶液；其中，所述反应混合物包括双链DNA以及EXOIII；/n(3)检测细菌/n将待测菌液与步骤(2)制备的标准...
【技术特征摘要】
1.一种细菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)构建标准液滴条形码文库
(1.1)荧光素修饰ssDNA2
将荧光素与ssDNA2混合，得到荧光素修饰的ssDNA2；
(1.2)构建细菌特异性响应的探针
将荧光素修饰的ssDNA2与对荧光基团起猝灭作用的材料混合，调节pH，然后静置、离心，得到细菌特异性响应的探针，然后测定探针的浓度，构建标准液滴条形码文库；
(2)制备标准文库溶液
将细菌特异性响应的探针与反应混合物封装在液滴中，制备标准文库溶液；其中，所述反应混合物包括双链DNA以及EXOIII；
(3)检测细菌
将待测菌液与步骤(2)制备的标准文库溶液封装在液滴中，进行孵化反应，将荧光强度与标准液滴条形码文库进行比对，确定细菌种类。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1.1)中，所述荧光素选自AMCA、FAM、TexasRed中的一种；和/或，所述ssDNA2的基因序列选自SEQIDNO.1-9之任意一种或几种。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1.2)中，所述pH用柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐中的一种或多种进行调节；和/或，所述pH＝3-4；和/或，所述对荧光基团起猝灭作用的材料选自金球AuNPs、碳纳米管、石墨烯二维材料中的一种或多种；和/或，所述ssDNA2与所述对荧光基团起猝灭作用的材料的摩尔比为(100-150):1；和/或，所述静置的时间为12-18min；和/或，所述离心机的转速为9000-12000r。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述细菌特异性响应的探针与反应混合物的体积比为(80-120)：50；和/或，所述双链DNA和EXOIII的体积比为(25-35)：(1-5)。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述双链DNA的制备过程为：将细菌特异性响应的aptamer和与其互补的ssDNA1混合，然后置于水浴锅中加热至90-98℃，得到双链DNA。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述ssDNA1的基因序列选自SEQIDNO.10-18之任...
【专利技术属性】
技术研发人员：李丽，邹奎，肖明书，裴昊，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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