芦荟提取物在制备防治猪流行性腹泻的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及芦荟提取物在制备防治猪流行性腹泻的药物中的应用。芦荟提取物制剂和PEDV混合后接种到Vero和IPEC‑J2细胞中，待出现细胞病变后使用间接免疫荧光法(IFA)、蛋白免疫印迹法(WB)和病毒滴度测定法检测，结果显示，芦荟提取物能够有效抑制PEDV在Vero细胞和IPEC‑J2细胞中的增殖，且具有剂量依赖效应，高剂量条件下(16mg/ml)可完全抑制PEDV的增殖。

Application of aloe extract in the preparation of drugs for the prevention and treatment of swine epidemic diarrhea

【技术实现步骤摘要】
芦荟提取物在制备防治猪流行性腹泻的药物中的应用
本专利技术涉及生物技术应用领域，尤其涉及天然植物提取物在制备防治猪流行性腹泻的药物中的应用。
技术介绍
猪流行性腹泻(Porcineepidemicdiarrhea,PED)是一种猪的急性、高度传染性疾病，其病原猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)为具有囊膜的单股正链RNA病毒，属于α冠状病毒属(Alphacoronavirus)(KOCHERHANSR,BRIDGENA,ACKERMANNM,etal.2001.Completionoftheporcineepidemicdiarrhoeacoronavirus(PEDV)genomesequence[J].VirusGenes,23(2):137-144.)。PEDV可引起新生仔猪出现腹泻、脱水、呕吐，且病死率高。近年来，PED在世界范围内广泛流行，中国、美国、韩国、加拿大等国家相继暴发疫情，严重危害全球养猪业的发展。我国有29个省市自治区发生并流行PED，可导致新生仔猪死亡率高达100％，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。目前，对该病的防控以疫苗免疫防控为主。疫苗免疫是以直接免疫仔猪为主，疫苗免疫是通过诱导黏膜免疫来保护肠道上皮细胞(WANGD,FANGL,XIAOS.2016.PorcineepidemicdiarrheainChina[J].VirusRes,226:7-13.)。对于新生仔猪和哺乳期仔猪而言，疫苗免疫存在两个问题：其一，血清呈PEDV抗体阳性的母猪，乳汁中的母源抗体会影响口服活疫苗诱导的保护效果；其二，PEDV疫苗是通过黏膜免疫发挥作用，但PED的高发群体是黏膜免疫系统未发育完全的新生仔猪和哺乳期仔猪，导致PEDV的疫苗免疫效果并不理想。目前除疫苗免疫外，化学合成药物、激素、抗生素等也被用来缓解腹泻症状。此外，植物成分具有无药物残留、无污染的优点，成为目前比较热门的抗病毒研究方向。如刘衍芬等在《黑龙江畜牧兽医》(2016,18:155-158+298)发表了题为《中药复方对人工感染猪流行性腹泻病毒仔猪的治疗效果研究》的文章，又如兰新财等在《中兽医医药杂志》(2015,02:55-56.)发表了题为《复方中药口服液对仔猪腹泻治疗作用研究》的文章，再如尹宝英在《黑龙江畜牧兽医》(2014(22):99-100.)上发表了题为《自拟中药复方治疗猪流行性腹泻效果研究》的文章。以上研究表明，复方中药能有效治疗PEDV引起的腹泻，且在体外试验被证明有显著抗病毒效果。中药复方虽具有治疗猪流行性腹泻效果，但需要多种中草药配伍使用，成分复杂，制备步骤繁琐。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对中药复方成分复杂、制备步骤繁琐等问题，提供一种成分单一的具有抑制猪流行性腹泻病毒作用的植物提取物，可用于治疗猪流行性腹泻及相关药物。芦荟提取物在制备防治猪流行性腹泻的药物中的应用。所述芦荟提取物通过以下方法制备：芦荟地上部分通过水煮成膏状，或通过水、醇提后冷冻干燥、粉碎后得粉状物。芦荟提取物的主要有效成分包括：芦荟多糖(葡聚糖、葡甘聚糖等)、蒽醌类化合物(如芦荟素、芦荟大黄素、大黄酚以及芦荟皂草苷等等)。文献报道芦荟提取物具有以下功能：(1)杀菌和消炎芦荟中的蒽酮类化合物大多具有杀菌、抑菌、消炎、解毒、促进伤口愈合等作用，能有效地消除粉刺、痤疮，在临床上用于治疗多种炎症，疗效显著。(2)健胃和缓泻芦荟具有健胃和缓泻功效，主要是因为芦荟含有芦荟大黄素苷、芦荟宁、芦荟咪酊等有效成分.具有健胃和缓泻功能，起着增进食欲和大肠缓泻作用。主要作用部位在大肠，可用于治疗便秘。(3)抗癌研究发现，芦荟中含有的黏稠物质——芦荟凝胶具有很强的抗癌作用。我国在芦荟抗肿瘤研究发现，芦荟醇提取物及芦荟苦素能明显提高机体免疫功能，临床应用芦荟治疗肝癌肝癌、胃癌等。(4)美容芦荟含有的芦荟素具有多方面美化皮肤的效能，在保湿、消炎、抑菌、止痒、抗过敏、软化皮肤、防粉刺、抑汗防臭等方面具有一定的作用，对紫外线有强烈的吸收作用，防止皮肤灼伤。(5)增强机体免疫改善亚健康状态芦荟多糖可调节机体免疫水平，表现在可提高自身免疫抗病菌。芦荟素、多糖能强化心脏功能，促进血液循环，软化硬化的动脉，降低胆固醇值，扩张毛细血管，使血压正常化，对动脉硬化和高血压有一定的预防和治疗作用。正因为有以上功能，芦荟提取物的应用很广泛。但综合国内外研究，均未见报道芦荟提取物的防治猪流行性腹泻药效及其药物。本专利技术芦荟提取物在制备防治猪流行性腹泻的药物中的应用，使用芦荟提取物可以抑制猪流行性腹泻病毒，成分单一简单，制备方法成熟，原材料广泛。芦荟提取物为纯植物提取物，无毒副作用，可以改善机体的先天性免疫抗病毒功能和直接杀死病毒，进而防治猪流行性腹泻。附图说明图1是芦荟提取物(Ae)对Vero细胞活性影响结果。图2是不同浓度的芦荟提取物(Ae)抑制PEDV-N蛋白在Vero细胞中表达的IFA结果。图3是不同浓度的芦荟提取物(Ae)于不同时间点抑制PEDV-N蛋白在Vero细胞中表达的WB结果。图4是不同浓度的芦荟提取物(Ae)处理不同时间后用病毒滴度检测法检测PEDV滴度结果。图5是芦荟提取物对IPEC-J2细胞活性影响结果。图6是不同浓度的芦荟提取物(Ae)抑制PEDV-N蛋白在IPEC-J2细胞中表达的IFA结果。图7是不同浓度的芦荟提取物(Ae)于不同时间点抑制PEDV-N蛋白在IPEC-J2细胞中表达的WB结果。图8是不同浓度的芦荟提取物(Ae)处理不同时间后用病毒滴度检测法检测PEDV滴度结果。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述。本专利技术实施例中使用的芦荟提取物通过Cobble和Coats热处理法方法制得。本专利技术中的芦荟提取物也可以用任何现有技术中公开的制备芦荟提取物的方法制得或市售芦荟提取物。本专利技术中使用的试验方法为本领域常规技术方法，使用的实验试剂、细胞等，为市售获得，或按照本领域常规方法配置得到。实施例1芦荟提取物对Vero细胞毒性试验和抑制PEDV在Vero细胞中增殖的试验1.1芦荟提取物(AE)对Vero细胞毒性检测试验在96孔板中接种6×105cells/mL的细胞悬液(100μL/孔)，留一列不接种细胞。于37℃、5％CO2条件下培养至细胞完全汇合。吸去培养基，PBS洗3遍，芦荟提取物用DMEM稀释为不同浓度，加入到96孔板(100μL/孔)，每个稀释浓度8个重复。于37℃、5％CO2条件下培养24h、48h后吸去药液，PBS洗3遍，用DMEM配置10％CCK-8溶液加到96孔板(100μL/孔)，于37℃、5％CO2条件下孵育1h，用酶标仪测定吸光值(λ＝450nm)并计算不同浓度药液处理24h和48h后的细胞活率。...

【技术保护点】
1.芦荟提取物在制备防治猪流行性腹泻的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.芦荟提取物在制备防治猪...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹永长，胡文锋，刘元，徐志超，靳改改，吴雨，胡学生，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44