Slc12a9基因敲除小鼠模型及其建立方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种Slc12a9基因敲除模型小鼠，及其培育方法和该小鼠模型在研究高血压的发病机制中的用途。所述模型小鼠是敲除了SLC12A9基因中的第5号外显子、第6号外显子和第7号外显子。本发明专利技术所述培育方法简单，且模型制作简单，重复性好；制作成本低。在临床表现与人类高血压相似，所述可用于人类高血压的研究，对阐明高血压的发病机制有重要的实际意义。研究还显示该模型为肿瘤的研究提供一种新的模型，可以作为预测脑胶质瘤患者预后的指标。因此，具有良好的推广应用价值。

Slc12a9 knockout mouse model and its establishment and Application

【技术实现步骤摘要】
Slc12a9基因敲除小鼠模型及其建立方法和用途
本专利技术涉及小鼠模型，尤其是Slc12a9基因敲除鼠的培育方法及该小鼠模型的用途。
技术介绍
高血压会影响我们的动脉、心脏等重要器官和结构。长期发展下去，还会造成心梗、中风等危及生命的症状。我国高血压患病率以达到23％，目前，导致高血压的机制尚不明确。Slc12a9广泛分布体内细胞的细胞膜上，介导细胞内外的钠离子，钾离子，氯离子的转运，与细胞内外的渗透压等密切相关。SLC家族蛋白在肿瘤的发生发展中发挥重要的作用。现有技术中，Slc12a9基因位于5号染色体，基因组长19040kb，有14个外显子，其转录本为19.040kb，编码914个氨基酸。目前国际上未见Slc12a9与高血压的报道，建立Slc12a9基因敲除小鼠模型，对阐明高血压的发病机制有重要的实际意义。
技术实现思路
基于现有技术的状况，本专利技术提供了一种模型小鼠，为Slc12a9基因敲除小鼠。进一步的，敲除了SLC12A9基因的中的第5号外显子、第6号外显子和第7号外显子。<br>本专利技术还提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种模型小鼠，其特征在于，为Slc12a9基因敲除小鼠。/n

【技术特征摘要】
1.一种模型小鼠，其特征在于，为Slc12a9基因敲除小鼠。


2.根据权利要求1所述的模型小鼠，其特征在于，敲除了SLC12A9基因的中的第5号外显子、第6号外显子和第7号外显子。


3.建立Slc12a9基因敲除小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)针对小鼠SLC12A9基因，设计基因敲除策略，敲除区域选择：第5号外显子、第6号外显子和第7号外显子；
(2)采用CRISPR-Cas9基因编辑方法，获得F0代小鼠；
(3)将阳性F0代小鼠和C57BL/6J配繁后，得到具有Slc12a9基因敲除的阳性F1代小鼠SLC12A9Slc12a9。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述CRISPR-Cas9基因编辑方法包括分别设计和构建5S1sgRNA和3S1sgRNA，并进行体外活性测试，制备Cas9混样体系；并将sgRNA与Cas9蛋白结合，引导Cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。


5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)针对小鼠SLC12A9基因，设计基因敲除...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙维建，林以诺，吴昊，沈贤，王文茜，郑志强，游涛，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院，温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33