一种蜜环菌SWFU-09及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种蜜环菌SWFU‑09及其应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术所述蜜环菌SWFU‑09的保藏编号为：CGMCC No.18149；本发明专利技术提供的蜜环菌综合性状较好，生长速度快，性状优良，实用性强，对天麻有很好的促生作用，将SWFU‑09菌株用于栽培天麻，通过母种培养、液体发酵培养、菌材培养和天麻栽培等环节，室内人工栽培天麻，从而实现高效的生产；经西南林业大学、昭通天麻研究院的温室和小草坝的田间小区进行的试验表明，该方法成效显著、稳定，可以有效高产地栽培出天麻，且商品麻的药用成分含量较高。

A Armillaria swfu-09 and its application

【技术实现步骤摘要】
一种蜜环菌SWFU-09及其应用
本专利技术涉及一种蜜环菌SWFU-09及其应用，属于微生物

技术介绍
天麻(GastrodiaelataBl.)，为兰科天麻属多年生异养草本植物。根状茎肥厚，蒴果椭圆形倒卵状，无绿叶，常以种子或块茎繁殖。被列入《国家重点保护野生植物名录(第二批)》中，属于Ⅱ级保护植物，是我国名贵中药材之一，以云南昭通小草坝产者为优。一般在立冬后到第2年清明节前开始采挖，采挖后清洗干净，蒸透，敞开低温干燥。现代药物分析表明，天麻中主要存在酚类物质及苷(天麻素、天麻醚苷、天麻苷元等)、苄醇酯苷类(派立辛A、B、C)、含氮生物碱类、有机酸类(柠檬酸、琥珀酸等)、甾醇类、微量元素(铬、锰、铁、铜等)、多糖类化合物等化学成分。天麻的化学成分除了受菌材、品种、产地、采收期等因素影响，还与其后续加工方法密切相关。天麻的药用价值和食用营养价值都很高。具有平抑肝阳，息风止痉等功效，还有镇静安神、增智健脑、提高免疫力、抗晕眩、防辐射等药理保健作用，其作用被归结为“一改(改善记忆)、两治(治高血压、治老年痴呆)、三镇(镇痉、镇静、镇痛)、六抗(抗惊厥、抗癌症、抗衰老、抗风湿、抗癫痫和抗抑郁)”。由于天麻风味独特、肉质肥厚、鲜品脆爽、食用方便，因此以天麻为主要原材料加工的食品不仅极具营养价值，还是一种既能治病又能滋补保健的特殊药膳，不仅满足了当代人对美食的追求，又可以延缓衰老、增强记忆、改善心肌血循环、促进免疫功能的增强和恢复，还可治疗风湿痹痛、半身不遂以及头晕目眩、高血压等心脑血管疾病。在天麻栽培生产中，由于天麻自身无根、无同化功能的叶片，无法制造养料，也无法直接吸收周围环境中的营养，除开花结实期外，天麻幼苗的形成、营养器官的更新以及营养生长转向生殖生长等过程都必须依靠萌发菌和蜜环菌来提供营养，完成生活史的全过程是天麻种子萌发靠小菇属(Mycenasp.)等种子萌发菌供给营养，发芽后的原球茎靠同化蜜环菌(Armillariamellea(Vahl)P.Kumm.)才能正常生长，蜜环菌在生长过程中能够产生菌索，菌索能够从为其提供营养物质的树木中伸出，并进入到天麻原球茎中生长，蜜环菌通过分解木质素和纤维素供给营养，天麻才能进行自身正常的生长发育，所以，天麻与萌发菌和蜜环菌之间都具有极其密切的营养关系，蜜环菌的生长特性对天麻的产量和品质具有很大影响，所以寻找新的适合天麻栽培的蜜环菌显得非常必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蜜环菌SWFU-09，该菌株的分类命名为Armillariamellea，保藏编号为：CGMCCNo.18149；该蜜环菌分离自云南省昭通市彝良县小草坝镇，且该蜜环菌SWFU-09已于2019年8月7日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。将SWFU-09菌株用于栽培天麻，选择菌索粗长、分支多、生物量大、健壮度高的蜜环菌菌株，经过蜜环菌母种扩大繁殖后接种于粗壮段木，由于不同科属来源的菌材对蜜环菌的生长具有一定影响，对比研究不同菌材上蜜环菌菌索的生长状况，且菌材上蜜环菌菌索的多寡以及健壮程度也直接影响着天麻的产量和质量，通过室内无菌培养发展成长满菌索的菌材，进行蜜环菌伴栽天麻的生产实验，从而获得高产优质、药用价值较高的天麻产品。本专利技术的另一目的在于将SWFU-09纯菌株用于栽培天麻，具体包括以下步骤：(1)菌种培养：将蜜环菌菌索冲洗干净，经过分离和纯化后得到纯化好的母种。(2)菌种扩大培养：将切碎的母种接入液体培养基中，使蜜环菌菌丝和菌索在培养液中长满。(3)菌材培养：选择阔叶树树种(可以选用壳斗科、桦木科、蔷薇科的树种，如青冈、桃树、梨树、苹果树、野樱桃、板栗、水冬瓜、刺槐、槲栎、麻栎、桦树、法国梧桐、橡树、竹柳等)作为菌材的段木，在段木上打孔或砍出伤口，在水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入聚丙烯袋中，盖上密封盖，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上打开密封盖，向孔内或伤口处接种蜜环菌液体菌种，培养一段时间即为蜜环菌菌材。(4)天麻栽培：在栽培容器底部铺一层基础培养料，再铺一层树叶，放一层蜜环菌菌材，在每一根蜜环菌菌材两端放入麻种，再铺一层基础培养料，最上层铺树叶，浇透水，然后用土封顶；在20-25℃、湿度80-90％条件下，培养3-5个月，即可获得长好的天麻。优选的，本专利技术步骤(1)中菌种分离和纯化的具体过程为：将蜜环菌菌索冲洗干净，用无菌水冲洗3次，放入75％酒精中浸泡1min，再用无菌水冲洗3次，切取0.5-1cm长的小段，浸入浓度为20ug/ml的青霉素液中3-5s，用灭菌滤纸吸干表面水分后，接种于培养基上培养；当培养基上的蜜环菌产生菌索分枝时，用接种铲切取长2-3mm生长旺盛而幼嫩的菌索，移入另一培养基(配方同前)，25℃下恒温培养，待菌丝、菌索长满培养基，即为纯化好的母种。优选的，本专利技术步骤(1)中培养基的配方：马铃薯200-300g/L、葡萄糖15-20g/L、蛋白胨2-4g/L、酵母膏1-4g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、硫酸镁0.1-5g/L、维生素B15-10mg/L、琼脂15-20g/L、pH值5.5-7。优选的，本专利技术步骤(2)中液体培养基的配方为：麦麸10-60g/L、玉米粉10-30g/L、蔗糖5-20g/L、磷酸二氢钾0.5-5g/L、硫酸镁0.5-5g/L、维生素B110-20mg/L、pH值5.5-7；培养条件为：在25℃恒温条件下震荡培养10-20d，转数120-160r/min。优选的，本专利技术步骤(3)中段木的直径为5-15cm，长度为10-25cm；在段木上打孔或砍出伤口的深度以露出木质部0.4～0.6cm。优选的，本专利技术步骤(3)培养条件为：在温度为20-25℃湿度为80-90％条件下培养3-5月。本专利技术所述方法全过程均在室内人为控制温湿度条件下完成，所使用的栽培材料均经过消毒灭菌，且每个操作程序均保证在超净工作环境中进行，可以提高生产效益，大大缩短天麻栽培时间，同时避免栽培过程中的污染问题，实现高效生产，满足市场需求，带动经济发展。本专利技术所述蜜环菌SWFU-09的菌落特性：菌落初期白色、圆形，厚度中等，绒毛状，后期颜色变深；菌丝细，较密，平均萌发率57％；菌索幼嫩时乳白色，成熟后棕色至红褐色，根状，圆形或扁平，多分枝，粗0.1-0.4cm，平均萌发率100％，15-20天长满皿，如图1所示。本专利技术所述蜜环菌SWFU-09的分子鉴定试验(1)材料：无火焰高温灭菌器、离心机、离心管、移液枪、移液枪头、剪刀、锥形瓶、1200ml大瓶子、微波炉、蒸馏水、ITS4引物、ITS5引物、实验服、口罩、橡胶手套、琼脂糖、BM2000+DNAMaker试剂、荧光染料、溴酚蓝染料溶液、TAE电泳缓冲液、mix、无菌水、无水乙醇、液氮、研钵、研磨棒、手术刀、消毒酒精、脱脂棉花、电子秤、PCR仪、D3195-01HPFungalDNAMiniKit(50)试剂盒。...

【技术保护点】
1.一种蜜环菌SWFU-09，其特征在于：该菌株的保藏编号为：CGMCC No.18149。/n

【技术特征摘要】
1.一种蜜环菌SWFU-09，其特征在于：该菌株的保藏编号为：CGMCCNo.18149。


2.权利要求1所述的蜜环菌SWFU-09的应用，其特征在于：将SWFU-09菌株用于栽培天麻。


3.根据权利要求2所述的蜜环菌SWFU-09的应用，其特征在于：将SWFU-09纯菌株用于栽培天麻的具体过程为：
(1)菌种培养：将蜜环菌菌索冲洗干净，经过分离和纯化后得到纯化好的母种；
(2)菌种扩大培养：将切碎的母种接入液体培养基中，使蜜环菌菌丝和菌索在培养液中长满；
(3)菌材培养：选择阔叶树树种作为菌材的段木，在段木上打孔或砍出伤口，在水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入聚丙烯袋中，盖上密封盖，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上打开密封盖，向孔内或伤口处接种蜜环菌液体菌种，培养一段时间即为蜜环菌菌材；
(4)天麻栽培：在栽培容器底部铺一层基础培养料，再铺一层树叶，放一层蜜环菌菌材，在每一根蜜环菌菌材两端放入麻种，再铺一层基础培养料，最上层铺树叶，浇透水，然后用土封顶；在20-25℃、湿度80-90％条件下，培养3-5个月，即可获得长好的天麻，所有步骤均在室内人为控制温湿度条件下完成，且每个操作程序均保证在超净工作环境中进行。


4.根据权利要求3所述蜜环菌SWFU-09的应用，其特征在于：步骤(1)中菌种分离和纯化的具体过程为：将蜜环菌菌索冲洗干净，用无菌水冲洗3次，放入75％酒精中浸泡1min，再用无菌水冲洗3次，切取0.5-1cm长的小段，浸入浓度为20ug/ml的青霉素液中3-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖，刘祥义，程立君，石卓功，余显伦，彭佳华，
申请(专利权)人：西南林业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53