一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用制造技术

本公开提供了一种抗菌肽PD‑L4在抑制禽流感病毒中的应用，所述禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒。H9N2亚型禽流感病毒经所述抗菌肽PD‑L4在体外作用后接种SPF鸡胚，鸡胚死亡数量明显下降，胚液HA效价也明显降低，即抗菌肽PD‑L4能够有效的抑制H9N2亚型禽流感病毒。

Application of an antimicrobial peptide PD-L4 in the inhibition of avian influenza virus

【技术实现步骤摘要】
一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用
本公开属于动物免疫
和生物医药
，具体涉及一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用。
技术介绍
H9N2型禽流感其病毒(AIV)属于正粘病毒科、正粘病毒属；病毒粒子多呈球形，为80～120纳米的直径，表面有长10～12纳米的密集钉状物或纤突覆盖，包括血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种不同形状的表面钉状物，病毒囊膜内有螺旋形核衣壳。H9N2型禽流感给养鸡业带来巨大损失，该病不但造成鸡呼吸道病，还侵害鸡的生殖系统，造成肉鸡生长缓慢，蛋鸡产蛋下降，于此同时还易与其他病原微生物混合感染，可以造成严重的死亡。抗菌肽是众多动物先天性免疫系统的第一道防线的重要成分，可以保护机体免受大多病原体的入侵。1型核糖体灭活蛋白是一类RNAN-糖苷酶的活性，专门作用于真核细胞损伤核糖体蛋白，广泛存在于高等植物中，具有抗菌、抗肿瘤等多种生物学活性。其中抗菌肽PD-L4是从商陆中提取的1型核糖体灭活蛋白中的一种，化学鉴定其具有抗菌活性，如其他抗菌肽，对人体细胞有免疫调节作用。在现有技术中还未出现针对抗菌肽PD-L4对于H9N2禽流感病毒的作用的研究。
技术实现思路
本公开的目的是提供一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，以达到抑制禽流感，减少养殖业经济损失的目的。为实现上述目的，技术方案如下：一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，所述禽流感病毒为H9N2。所述抗菌肽PD-L4的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。<br>所述抗菌肽PD-L4的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。本公开的有益效果是：提供了一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，所述禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒，所述H9N2亚型禽流感病毒经所述抗菌肽PD-L4在体外作用后接种SPF鸡胚，鸡胚死亡数量明显下降，胚液HA效价也明显降低，即抗菌肽PD-L4能够有效的抑制H9N2亚型禽流感病毒。具体实施方式以下各步骤仅用以说明本公开的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各步骤对本公开进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各步骤所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本公开各步骤技术方案的范围。实施例1一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用1.材料抗菌肽PD-L4储存液：根据抗菌肽PD-L4的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，经生物公司合成，得到抗菌肽PD-L4，其中抗菌肽PD-L4的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。抗菌肽PD-L4工作液：每管抗菌肽PD-L4储存液(11μL)中加入348μL生理盐水。禽流感H9N2亚型病毒株(AIV)；9日龄SPF鸡胚。2.实验方法实验组：将纯化的禽流感H9N2亚型病毒液1.5μL、生理盐水934.5μL和抗菌肽PD-L4工作液264μL进行混合，将禽流感H9N2亚型病毒稀释800倍；然后将混合液置于37℃培养箱中进行孵育，其中孵育的时间为2h。阳性对照组：将纯化的禽流感H9N2亚型病毒液15μL与11985μL的生理盐水进行混合，然后将混合液置于37℃培养箱中进行孵育，其中孵育的时间为2h。将上述孵育后的实验组的混合液接种至9日龄SPF鸡胚尿囊腔中，共15组重复，其中每组接种的混合液为0.2mL；然后设置阳性对照组：将上述阳性对照组中的混合液接种至9日龄SPF鸡胚尿囊腔中，共15组重复，接种完毕后，将所有鸡胚置于37℃孵化箱中继续培养，每天观察2次接种鸡胚的死亡情况，并及时收集死亡接种鸡胚的尿囊液，观察鸡胚胚体病变情况，在接种5天后，将存活的接种鸡胚置于4℃冰箱中进行冷冻处死，然后收集鸡胚尿囊液。因为禽流感H9N2亚型病毒(AIV)具有凝集鸡红细胞的特性，因此可通过对禽流感H9N2亚型病毒(AIV)中HA的血凝活，来判断感染情况，其中HA效价≥4为感染。其中HA血凝实验具体操作步骤为：(1)首先在96孔微量反应板上各孔加入50μL的生理盐水；(2)于左侧第1孔加50μL鸡胚尿囊液，混合均匀后，吸50μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50μL；(3)依次向各孔加入0.5％鸡红细胞悬液50μL，在振荡器上振荡，37℃静置30min后观察结果。3.结果分析观察并记录接种后鸡胚的死亡情况和并检测血凝活性，结果如表1所示，从表1可以看出，抗菌肽PD-L4在体外作用的H9N2亚型禽流感病毒接种SPF鸡胚，鸡胚死亡数量明显下降，胚液HA效价也明显降低，即抗菌肽PD-L4能够有效的抑制H9N2禽流感病毒。表1抗菌肽PD-L4与流感病毒H9N2反应后鸡胚死亡情况表SEQUENCELISTING<110>佛山科学技术学院<120>一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用<130>2020.02.20<160>2<170>PatentInversion3.5<210>1<211>1220<212>DNA<213>人工合成<400>1ttgcctatttaagaagattatgctacacattaaaccttgcctttcactaaattatcatac60acattagttatcaatcattttctacattatcaacgcctcaacatttactcctttaacagg120taaaatgaatggaatacaaacaataatgagagcttttgttgtggtagctatatcaacatg180gttagtcatccttaaaccaacatttgcggcgtcagatctaagtttcgatgcaacaaatcc240ggcggcgacaacgtattcgaagctattgagcgacttgcgtaacttggtgaaggacccaaa300actcaaatacggcggcaccaacgtaccagtaatggctgctactttcaaaaagaagtacat360tttggttgatcttaagggatcagagggaggaaccatcacaatagctttgaatttaaataa420tgatatatatgtggttggatatcttgacaaacttaatggaaactttaggtcacatatttt480taaagatgctccttcggacgcaaaaaccgatctctttccagaggcaacgggtaaaaatcg540tctaacaattaactacaaaagttcatatgctgatatagagagtaatgctggcgtat本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，其特征在于，所述禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，其特征在于，所述禽流感病毒为H9N2亚型禽流感病毒。


2.根据权利要求书1中抗菌肽PD-L4在抑制禽流感病毒中的应用，其特征在于，所述抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张济培，李巨浪，陈济铛，张溢珊，陈建红，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44