Ras相关蛋白2的制药用途制造技术

Ras相关蛋白2的制药用途，具体来说是在制备治疗主动脉瘤和主动脉夹层药物中的应用。通过调节血管平滑肌细胞表型转化，维持血管平滑肌收缩表型，参与主动脉瘤及主动脉夹层的发病。本发明专利技术明确了Ras相关蛋白2调控平滑肌细胞表型转化，防止主动脉瘤及主动脉夹层的发生，为主动脉瘤及主动脉夹层的诊断及治疗提供了新的靶点。

Pharmaceutical use of Ras related protein 2

【技术实现步骤摘要】
Ras相关蛋白2的制药用途
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种Ras相关蛋白2的制药用途。
技术介绍
随着人口老龄化以及并发的高血压、动脉硬化等高危因素，主动脉瘤(AoA)及主动脉夹层(AoD)的发病人数也随之增多。主动脉瘤表现为主动脉的瘤样扩张，其定义为动脉扩张为正常动脉直径的1.5倍以上。人群中超声筛查发现AoA的发病为:65岁以上男性4％～7％，女性1％～2％。主动脉夹层表现为主动脉壁内膜撕裂，循环中的血液通过内膜破口进入主动脉壁中层，导致中层大范围撕裂并形成夹层。其发病率为每年每十万人群中有0.5到2.95。AoA和AoD的病因与患者年龄、男性、吸烟相关。其病理表现为主动脉中弹性蛋白水解、胶原沉积、炎症细胞浸润以及基质金属蛋白酶(MMPs)表达增加。大多数AoA没有明显的症状，病程中患者常出现背部或下腹部疼痛，但未经治疗的话，AoA可能突然破裂，患者出现撕裂样疼痛时常提示AoD的发生，一旦发生AoD将造成内科及外科均无法及时处理的大出血，其死亡率最高可达90％。目前国内对于主动脉瘤及主动脉夹层的外科治疗水平由于设备、技术、经济等原因较为落后，药物治疗也较为单一，因此，寻找新的主动脉瘤及主动脉夹层治疗思路与靶点极为重要。主动脉平滑肌细胞的结构及功能的完整对于维持主动脉壁的正常生物力学特性尤为重要。在特定条件下，终末分化的正常平滑肌细胞会出现表型转化，导致其生物学特性出现显著改变。有研究表明：在AoA和AoD病人的主动脉中，主动脉平滑肌会由分化程度较高，增殖、迁移能力较弱的收缩型转变为分化程度较低，增殖、迁移能力较强的合成型，继而导致主动脉壁功能异常。RAS家族蛋白是一类相对分子质量为21kD的小G蛋白，作为信号转导中重要的分子开关，与许多不同的调控因子和效应器分子相互作用，产生多种细胞功能。Ras相关蛋白2(R-Ras2)，也称作TC21，属于Ras小G蛋白超家族的R-Ras亚家族。R-Ras2在小鼠多种组织中都有表达，包括胰腺，肾脏，脑，心脏，肺等组织中均有分布，其蛋白在细胞中主要定位在细胞质和细胞核中。有报道指出R-Ras2的减少会促进衰老，而过表达R-Ras2则可以逆转衰老相关的表型。但R-Ras2在心血管疾病中的作用及其机制尚未有任何相关研究和报道。
技术实现思路
解决的技术问题：本专利技术提供一种Ras相关蛋白2的制药用途，通过调节血管平滑肌细胞表型转化，维持血管平滑肌收缩表型，参与主动脉瘤及主动脉夹层的发病。技术方案：Ras相关蛋白2在制备治疗主动脉瘤和主动脉夹层药物中的应用。所述Ras相关蛋白2的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。Ras相关蛋白2在制备诊断主动脉瘤和主动脉夹层试剂盒中的应用。Ras相关蛋白2在筛选针对主动脉瘤和主动脉夹层药物中的应用。上调Ras相关蛋白2表达水平的慢病毒，所含编码Ras相关蛋白2的基因序列如SEQIDNO.1所示。含有如SEQIDNO.1所示编码Ras相关蛋白2的基因序列的慢病毒在制备治疗主动脉夹层和主动脉瘤药物中的应用。有益效果：专利技术人通过RT-PCR和WesternBlot发现主动脉夹层病人主动脉组织、血管紧张素II微渗泵灌注的Apoe-/-小鼠主动脉组织以及血管紧张素II刺激的人主动脉平滑肌细胞中R-Ras2表达水平降低，平滑肌细胞由收缩表型向合成表型转变。利用小干扰RNA敲低平滑肌细胞中R-Ras2后发现平滑肌细胞向合成型发生转变，转染R-Ras2过表达质粒，能够恢复血管平滑肌细胞收缩表型。通过慢病毒平滑肌特异性的过表达R-Ras2能够显著减少血管紧张素II微渗泵灌注引起的小鼠主动脉扩张，有效抑制主动脉瘤及主动脉夹层的发生。本专利技术提供了一个主动脉瘤及主动脉夹层新的作用分子，明确其调控平滑肌细胞表型转化，防止主动脉瘤及主动脉夹层的发生，为主动脉瘤及主动脉夹层的诊断及治疗提供了新的靶点。附图说明图1为R-Ras2在正常人和主动脉夹层病人的主动脉组织中的mRNA表达水平：提取正常人和主动脉夹层病人主动脉组织中的mRNA后，用RT-PCR检测R-Ras2的表达。*P<0.05。图2为R-Ras2在正常人和主动脉夹层病人的主动脉组织中的蛋白表达水平：提取正常人和主动脉夹层病人主动脉组织中的蛋白后，用WesternBlot检测R-Ras2的表达。*P<0.05。图3为R-Ras2在埋植生理盐水和AngII微渗泵Apoe-/-小鼠主动脉中的mRNA表达水平：提取埋植生理盐水和AngII微渗泵的Apoe-/-小鼠主动脉组织中的mRNA后，用RT-PCR检测R-Ras2的表达。*P<0.05。图4为R-Ras2在埋植生理盐水和AngII微渗泵Apoe-/-小鼠主动脉中的蛋白表达水平：提取埋植生理盐水和AngII微渗泵的Apoe-/-小鼠主动脉组织中的蛋白后，用WesternBlot检测R-Ras2的表达。*P<0.05。图5为R-Ras2和α-SMA在埋植生理盐水和AngII微渗泵Apoe-/-小鼠主动脉组织切片中的表达水平：提取埋植生理盐水和AngII微渗泵的Apoe-/-小鼠主动脉组织后进行OCT包埋，冰冻切片后，用免疫荧光检测R-Ras2和α-SMA的表达。图6为AngII刺激HASMCs后检测R-Ras2表达水平：HASMCs给予1μMAngII刺激24小时，WesternBlot检测R-Ras2蛋白表达水平。*P<0.05。图7为敲低R-Ras2对平滑肌细胞收缩表型标志物的影响：HASMCs转染R-Ras2小干扰RNA后，WesternBlot检测R-Ras2以及平滑肌细胞收缩表型标志物Calponin1、α-SMA蛋白表达水平。*P<0.05。图8为过表达R-Ras2对平滑肌细胞收缩表型标志物的影响：HASMCs转染R-Ras2质粒后，给予1uMAngII刺激24小时，WesternBlot检测平滑肌细胞收缩表型标志物Calponin1、α-SMA蛋白表达水平。*P<0.05。图9为慢病毒过表达R-Ras2对主动脉瘤发生的影响：Apoe-/-小鼠腹腔注射对照病毒和R-Ras2病毒，皮下埋植生理盐水泵作为对照组，或埋植AngII渗透泵，构建小鼠主动脉瘤模型，于28天后收取其主动脉血管，主动脉血管大体拍照。图10为病毒过表达R-Ras2对血管形态的影响：Apoe-/-小鼠腹腔注射对照病毒和R-Ras2病毒，皮下埋植生理盐水泵作为对照组，或埋植AngII渗透泵，构建小鼠主动脉瘤模型，于28天后收取其主动脉血管，HE染色检测主动脉血管形态。具体实施方式下面的实施例可使本专业技术人员全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例11.质粒转染人主动脉平滑肌细胞(1)将人主动脉平滑肌细胞种板培养于含2wt.％胎牛血清的SMCM培养液中。(2)细胞融合至约75％时，弃培养液，用预热的PBS洗涤细胞2次以除去培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Ras相关蛋白2在制备治疗主动脉瘤和主动脉夹层药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.Ras相关蛋白2在制备治疗主动脉瘤和主动脉夹层药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述Ras相关蛋白2的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.Ras相关蛋白2在制备诊断主动脉瘤和主动脉夹层试剂盒中的应用。


4.Ras相关蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：季勇，陈际宇，罗姗姗，周雪纯，林喆，孔垂玉，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32