本公开的实施方案包括用于免疫治疗的方法和组合物，其包含能够在宿主个体中普遍耐受的同种异体细胞。在具体的实施方案中，细胞具有降低的内源性β2‑微球蛋白(B2M)和/或MHC II类相关恒定链(Ii)的表达，并且在特定情况下，细胞是缺乏破坏宿主组织的能力的NKT细胞，具有大大降低的宿主免疫细胞识别，并且出乎意料地避免宿主NK细胞的破坏。在一些实施方案中，B2M‑和/或Ii‑靶向分子被工程化以与重组工程化受体组合(包括在单一构建体内)表达，例如，用于普遍耐受的即用型免疫治疗的一次成功产生。
CD1d restricted NKT cells as a platform for ready to use cancer immunotherapy
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD1D限制性NKT细胞作为即用型癌症免疫治疗的平台本申请要求2017年8月11日提交的申请号为17185992.9的EP申请的优先权，其通过引用整体并入本文。
本公开至少涉及细胞生物学、分子生物学、免疫学和医学领域。
技术介绍
使用自体肿瘤特异性T细胞的癌症免疫疗法。分离和扩增肿瘤特异性T细胞然后输注(过继转移)回到患者的策略是癌症治疗中具有前景的方式。这种治疗在一些黑素瘤患者中已经是成功的，黑素瘤患者在输注自体黑素瘤特异性T细胞后可以具有完全和持续的肿瘤消退(1)。然而，作为其他免疫原性较低的恶性肿瘤的治疗，T细胞治疗受限于缺乏能够引发强烈T细胞反应的分子定义的肿瘤抗原，以及难以从肿瘤宿主中分离这些T细胞。使用CAR重定向的自体T细胞的癌症免疫疗法。用嵌合抗原受体(CAR)对T细胞进行重定向抗原特异性的遗传修饰是产生用于过继治疗的效应细胞的一种策略，其不依赖于预先存在的抗肿瘤T细胞免疫。最近的临床试验表明，重定向到CD19抗原的T细胞可以诱导B细胞白血病和淋巴瘤患者的持续完全反应(2-7)。然而，由于疾病和化疗的影响，从淋巴瘤患者获得的T细胞的增殖能力降低。产品制造过程中T细胞扩增的减少意味着只有25％的新诊断和少至12.5％的治疗的小儿淋巴瘤患者可以输注自体CD19CART细胞(8)。与淋巴瘤患者相似，T细胞数量和功能的不足在许多种癌症患者中是常见的(9-12)。克服该限制的一种方法是使用从用肿瘤特异性CAR修饰的健康个体获得并离体扩增的T细胞给癌症患者输注。然而，除一小部分患者适于同种异体干细胞移植外，HLA不匹配的T细胞不能使用，因为它们会引起移植物抗宿主病(GvHD)和/或被患者的免疫系统排斥。T细胞中TCR的基因缺失用以避免GvHD。Qasim等使用基因编辑同时向T细胞引入CAR并破坏TCR，证明了从一种不匹配的健康供体产生GvHD不能的CART细胞的方法(13)。在该研究中，使用转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)技术引入脱靶基因改变，从T细胞基因组中删除了TCR基因(13)。自然杀伤T细胞(NKT)具有抗肿瘤效应物功能并且天然地避免GvHD。NKT是先天性淋巴细胞的进化保守亚群，其特征在于不变的TCRα链Vα24-Jα18的表达以及对由单态类HLAI类分子CD1d呈递的糖脂的反应性(14-17)。NKT具有许多抗肿瘤特性，据报道它们的数量与几种癌症的良好预后相关(18)。HeczeyA.等和GianT.等证明NKT可以从外周血中分离，用CAR转导并扩增到临床规模用于过继细胞治疗应用(19,20)。一些研究已经表明，供体来源的NKT不介导GvHD，甚至可能抑制GvHD(21,22)。因此，同种异体的健康供体来源的CARNKT可用于治疗癌症患者，而没有GvHD风险，与T细胞相比，不需要额外的遗传操作。通过宿主免疫系统消除同种异体治疗细胞。所有正常有核细胞均表达HLAI类，因此宿主免疫系统将消除来自HLA不匹配供体的过继转移的治疗细胞。T和NKT细胞在活化时也可以瞬时表达HLAII类，并且HLAII类的不匹配通过宿主CD4T细胞触发供体细胞消除。延迟这种排斥的常用方法是使用免疫抑制宿主调节以允许效应细胞在宿主免疫系统恢复之前介导抗肿瘤活性的治疗窗口。然而，这种方法对患者有毒，并且由于治疗效应细胞的持久性不足而可能不允许完全的肿瘤控制。HLAI类分子在细胞表面上的表达取决于β2-微球蛋白(B2M)。已经确定，为了在细胞表面上表达，HLAI类分子需要B2M(23)。因此，靶向供体衍生的效应细胞中的B2M将阻断HLAI类表达并阻止它们被宿主CD8T细胞识别。然而，HLAI类分子也可作为NK细胞的抑制性配体，并且预期B2M表达的丧失会使供体细胞易被宿主NK细胞杀死(24)。尚不清楚在供体细胞中B2M/HLAI类的表达是否可以达到特定水平，足以阻止宿主CD8T细胞的活化而不引发宿主NK细胞的细胞毒性。在NKT中发现这样的B2M表达范围将使癌症患者能够延长对来自HLA不匹配的健康供体的治疗性NKT或CARNKT的耐受性，其将带来持久的抗肿瘤活性而没有GvHD的风险。HLAII类分子在细胞表面上的表达取决于HLA-DR抗原相关的恒定链(Ii，也称为CD74)。恒定链有助于从ER输出MHCII类，并且是适当抗原加载和MHCII类/抗原复合物的表面表达所需的。已知T细胞在激活例如抗原识别时在其细胞表面上瞬时表达MHCII类。本公开描述了发现NKT细胞在TCR刺激后也上调细胞表面的MHCII类表达(图3A)。因此，本专利技术人试图通过靶向Ii表达以下调MHCII类从而减弱宿主CD4T细胞对NKT细胞的排斥。此外，表征了联合靶向NKT中的B2M和Ii是否将进一步延长癌症患者对来自HLA不匹配的健康供体的治疗性NKT或CARNKT的耐受性，并且使其抗肿瘤活性最大化而没有GvHD风险。
技术实现思路
本公开的实施方案包括细胞(例如来自供体)，其被操作以被宿主耐受，例如避免不期望的宿主免疫应答；本公开也包括该细胞的使用方法，包括作为免疫疗法。在具体的实施方案中，细胞用于免疫疗法并且可被考虑即用型的利用。在特定的实施方案中，细胞适合于过继治疗。在特定的实施方案中，细胞避免受试者中的GvHD。细胞可用于一种或多种宿主中，包括来自相同多种工程细胞的细胞，用于一种或多种宿主。在特定情况下，待提供给受试者的细胞具有一种操作以实现逃避宿主免疫细胞的能力，并且在一些情况下，还提供对细胞破坏的肿瘤特异性。在一些情况下，本公开包括来自健康供体的具有肿瘤特异性和普遍耐受性的NKT细胞一次成功产生，用于即用型免疫疗法，包括用于癌症。在特定情况下，本公开包含的细胞能够防止同种异体CD8T细胞或CD4T细胞的活化，包括不引发被同种异体NK细胞的杀伤。在这种情况下，细胞是经过工程改造以表达很少或不表达HLAI类分子的NKT细胞，并且令人惊讶的是，这些细胞仍然对宿主NK细胞的杀伤具有抗性。本文使用的NKT细胞可包括例如iNKT、UTNKT或天然杀伤T细胞。在一些情况下，供体细胞能够用于HLA不匹配受试者的免疫治疗，包括患有癌症的受试者。在特定情况下，使用B2M特异性shRNA进行RNA干扰，并且可以在NKT细胞中发现一系列B2M和HLAI类表达，其将阻止同种异体CD8T细胞的激活而不引发被同种异体NK细胞杀伤。在特定情况下，使用Ii特异性shRNA进行RNA干扰，并且可以在NKT细胞中发现Ii和HLAII类表达的下调，其将阻止同种异体CD4T细胞的活化。在一些特定情况下，B2M特异性shRNA、Ii特异性shRNA或两者以及肿瘤特异性CAR可以被工程化以表达在单个逆转录病毒构建体内，用于具有肿瘤特异性和普遍耐受性的健康供体来源的NKT细胞的一次成功产生，用于HLA不匹配癌症患者的免疫治疗。在特定的实施方案中，细胞不是衍生自诱导的多能干细胞。在特定方面，细胞可以抵抗被NK细胞的消除。在本公开的一个实施方案中，存在分离的NKT细胞或其多个细胞，其具有降低的内源性β-2-微球蛋白(B2M)和/或MHCII类相关恒定链本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的人NKT细胞或其多个细胞，具有降低的或不可检测的下列表达：/n(A)内源性β-2-微球蛋白(B2M)；/n(B)内源性MHC II类相关恒定链(Ii)；或/n(C)二者。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170811 EP 17185992.91.一种分离的人NKT细胞或其多个细胞，具有降低的或不可检测的下列表达：
(A)内源性β-2-微球蛋白(B2M)；
(B)内源性MHCII类相关恒定链(Ii)；或
(C)二者。
2.如权利要求1所述的细胞或多个细胞，其中所述细胞或多个细胞包含靶向B2M基因或Ii基因的合成的DNA或RNA。
3.如权利要求2所述的细胞或多个细胞，其中所述合成的DNA或RNA靶向B2M基因或Ii基因的3'端。
4.如权利要求2或3所述的细胞或多个细胞，其中所述合成的RNA是shRNA或CRISPR向导RNA。
5.如权利要求1-4中任一项所述的细胞或多个细胞，其中所述细胞包含一种或多种重组工程化受体。
6.如权利要求5所述的细胞或多个细胞，其中所述受体是嵌合抗原受体、嵌合细胞因子受体或T细胞受体。
7.如权利要求1-6中任一项所述的细胞或多个细胞，其中所述细胞重组表达一种或多种细胞因子。
8.如权利要求7所述的细胞或多个细胞，其中所述细胞因子是IL-15、IL-7、IL-12、IL-18、IL-21、IL-27、IL-33或其组合。
9.如权利要求1-8中任一项所述的细胞或多个细胞，其进一步具有除B2M和/或Ii之外的另一种内源基因的降低表达。
10.如权利要求1-9中任一项所述的细胞或多个细胞，其中所述细胞或多个细胞是CD62L阳性和/或CD4阳性和/或PD1阴性/降低的NKT细胞。
11.如权利要求1-10中任一项所述的细胞或多个细胞，其中所述细胞或多个细胞相对于受试者是自体同源的。
12.如权利要求1-10中任一项所述的细胞或多个细胞，其中所述细胞或多个细胞相对于受试者是同种异体的。
13.产生权利要求1-12中任一项所述的细胞或多个细胞的方法，该方法包括将NKT细胞暴露于：
(a)一种或多种降低所述细胞或多个细胞中内源性B2M表达的试剂；
(B)一种或多种...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·S·梅特利察，金京玲，刘斌，
申请(专利权)人：贝勒医学院，
类型：发明
国别省市：美国;US
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