【技术实现步骤摘要】
表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌及其功能验证方法
本专利技术涉及分子生物学
，进一步涉及生物制药及肿瘤医学技术，具体涉及一种表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌及其功能验证方法。
技术介绍
目前针对肿瘤的治疗有化学、物理和生物方法等，但上述疗法始终未能达到治疗肿瘤的理想效果，因此探索更安全、更有效地新型肿瘤治疗方法迫在眉睫。自WilliamColey首次利用细菌治疗肿瘤以来，细菌靶向治疗肿瘤己成为近年国际研究的热点，多种细菌被发现可特异性的侵入机体肿瘤组织并大量繁殖，利用活菌治疗肿瘤的设想就随之产生。靶向治疗是指抗肿瘤药物能针对性地与肿瘤的特异性位点结合，从而对肿瘤细胞起到杀伤效果，而对健康组织基本无影响，是目前较为理想的治疗模式，也代表着肿瘤治疗的未来趋势。其主要分为单克隆抗体药和抗体药物偶联物(AntibodyDrugConjugates，ADC)。ADC药物是一类新颖的治疗药物，正日益受到全球制药公司的关注。ADC药物由单克隆抗体和强效毒性药物(toxicdru...
【技术保护点】
1.表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌，其特征在于该重组大肠杆菌是由以下方法构建的：/n1)将人源毒素Caspase-3重组单链抗体scFv78的编码基因片段78-Caspase-3通过酶切酶连的方法连接到pET302质粒中，得到pET302-78-Caspase-3重组质粒；/n2)将所述pET302-78-Caspase-3重组质粒转化至大肠杆菌Nissle 1917中，得到重组大肠杆菌E.coli Nissle1917-pET302-78-Caspase-3，即为所述表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌。/n
【技术特征摘要】
1.表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌，其特征在于该重组大肠杆菌是由以下方法构建的：
1)将人源毒素Caspase-3重组单链抗体scFv78的编码基因片段78-Caspase-3通过酶切酶连的方法连接到pET302质粒中，得到pET302-78-Caspase-3重组质粒；
2)将所述pET302-78-Caspase-3重组质粒转化至大肠杆菌Nissle1917中，得到重组大肠杆菌E.coliNissle1917-pET302-78-Caspase-3，即为所述表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌。
2.根据权利要求1所述的表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌，其特征在于步骤1)中人源毒素Caspase-3重组单链抗体scFv78的编码基因片段78-Caspase-3是核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的DNA片段。
3.根据权利要求2所述的表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌，其特征在于步骤1)中人源毒素Caspase-3重组单链抗体scFv78的编码基因片段78-Caspase-3是以核苷酸序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的DNA片段为引物，由PCR扩增获得的。
4.根据权利要求1所述的表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌，其特征在于步骤2)中所使用的pET302-78-Caspase-3重组质粒，是先将步骤1)所得的pET302-78-Caspase-3重组质粒转入E.coliTop10中，而后培养扩增获得的。
5.根据权利要求1所述的表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌，其特征在于步骤1)所述的酶切酶连，是以XhoI和AvrⅡ双酶切，酶切产物纯化后，采用T4连接酶连接到pET302质粒中。
6.根据权利要求1所述的表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌，其特征在于步骤2)包括：取100μL大肠杆菌Nissle1917感受态细胞的菌液于冰上融化，向其中加入2μL所述pET302-78-Caspase-3重组质粒，混匀，在冰上孵育30min，将菌液浸入42℃水浴中热激60～90s，而后立即放置于冰上静置2min，再向其中加入900μLSOC培养液，于37℃恒温摇床上以22rpm的转速振荡温育1h，而后以4000rpm的转速将菌液离心3m...
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