本发明专利技术公开了一种用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列及其应用，属于医药技术领域，所述序列为microRNA‑X，该microRNA的序列如SEQ：ID：NO：1所示，设计引物的序列如SEQ：ID：NO：2‑SEQ：ID：NO：3所示。本发明专利技术收集562名维吾尔族个体血清,运用Illumina Infinium Global Screening Array‑24 v1.0(GSA)Bead Chip技术进行分析，发现一段与空腹血糖显著正相关microRNA序列。
MicroRNA sequence for early diagnosis of type 2 diabetes and its application
【技术实现步骤摘要】
一种用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列及其应用
本专利技术属于医药
，涉及一种用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列及其应用。
技术介绍
2型糖尿病(Type2diabetes,T2DM)的发病率近年来在全球逐年增长，成为世界第5位死亡主因。据世界卫生组织(WHO)预测，到2025年全世界糖尿病患者将达到3亿人，其中2.3亿人在发展中国家，而中国糖尿病新增人数将占世界糖尿病新增人数的首位。NingG等的调查结果显示，目前中国成年人T2DM患病率达11.6％，并且在成年人群中有50.1％处于前糖尿病状态。流行病学资料显示，80％的T2DM患者伴有肥胖，肥胖成为IR和T2DM的一个重要的危险因素。最近的研究表明，中国成年人群中，男性肥胖率由1980年的0.33％增加至2015年的5.02％，女性肥胖率由0.9％增加至5.51％。近年文献表明肥胖会引起T2DM，但具体机制尚不十分明确。microRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。最近的文献表明，体内大部分循环外泌体microRNAs来源于脂肪组织并通过血液循环到达靶组织器官，影响其糖、脂代谢关键基因的表达，导致脂肪肝、动脉粥样硬化、癌症以及糖尿病等疾病的发生。近年来，microRNAs在糖脂代谢领域中的作用越来越受到重视，大量报道表明，microRNAs是调控胰岛素敏感性的重要因子，在肥胖机体中表达异常，诱发胰岛素抵抗(InsulinResistance,IR)。对于治疗肥胖及其相关慢性疾病，microRNAs具有非常大的潜力，可作为诊断和治疗靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列及其应用。其具体技术方案为：一种用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列，所述序列为microRNA-X，该microRNA的序列如SEQ：ID：NO：1所示，设计引物的序列如SEQ：ID：NO：2-SEQ：ID：NO：3所示。本专利技术所述用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列在治疗2型糖尿病药物制备过程中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术收集562名维吾尔族个体血清,运用IlluminaInfiniumGlobalScreeningArray-24v1.0(GSA)BeadChip技术进行分析，发现一段与空腹血糖显著正相关microRNA序列。随后我们在汉、哈、维三个不同民族的正常、肥胖和糖尿病血清样本中进行了验证，发现该microRNA在肥胖和糖尿病血清样本中显著高表达，并且该microRNA的表达与血糖、血脂相关指标显著正相关；体外培养人肝癌细胞系HepG2细胞我们发现转染了该microRNA模拟物的一组甘油三酯合成增加，葡萄糖利用率和胰岛素敏感性降低，提示该microRNA可能影响了肝细胞内的糖、脂代谢。该microRNA的表达在正常、肥胖和糖尿病三组中呈现逐级递增的趋势，与现有技术相比，该microRNA对早期糖尿病更敏感，对于早期糖尿病的诊断更准确更具有优势。附图说明图1miR-X在正常、肥胖和糖尿病个体血清内的表达水平显著增加A.维吾尔族正常血清样本24例，肥胖血清样本46例，糖尿病血清样本23例,miR-X的表达水平；B.哈萨克族正常血清样本21例，肥胖血清样本48例，糖尿病血清样本10例，miR-X的表达水平；C.汉族正常血清样本21例，肥胖血清样本22例，糖尿病血清样本20例，miR-X的表达水平。秩和检验，*P<0.05，**P<0.01，差异具有统计学意义；图2A.0.1mmol/LFFA刺激及50nMmiR-X-Mimic转染HepG2细胞24h后，400倍镜下油红O染色结果；图2B.570nm处油红O吸光度，t检验，***P<0.001,差异具有统计学意义；B.0.1mmol/LFFA刺激及50nMmiR-X-Mimic转染HepG2细胞0h和24h后，细胞内甘油三酯含量，t检验，*P<0.01,与NC组相比，差异具有统计学意义；图3A.miR-NC、miR-X-mimic转染24h后HepG2葡萄糖利用率，与NC组相比，秩和检验，**P<0.01,差异具有统计学意义；图3B.miR-NC、miR-X-mimic转染22h后加100μg/ml胰岛素刺激HepG2，测定HepG2细胞胰岛素敏感性；图4本专利技术的技术路线图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例11.课题组收集562名维吾尔族个体血清,运用IlluminaInfiniumGlobalScreeningArray-24v1.0(GSA)BeadChip技术进行分析，发现一段与空腹血糖显著正相关microRNA序列，经过数据库比对确定该序列为microRNA-X，该microRNA的序列为AAAGGUAAUUGUGGUUUCUGC。课题组设计引物如下：F:5’-AAAGGUAAUUGUGGUUUCUGC-3’R:5’-AGAAACCACAAUUACCUUUUU-3’2.人体样本收集：(1)样本分组及来源：2016年12月-2018年12月，分别在新疆维吾尔自治区喀什地区、伊犁地区以及石河子地区，收集维吾尔族正常个体血清样本24例，肥胖个体血清样本48例，糖尿病个体血清样本24例；哈萨克族正常个体血清样本24例，肥胖个体血清样本48例，糖尿病个体血清样本10例；汉族正常个体血清样本21例，肥胖个体22例，糖尿病个体20例。(2)样本的纳入和排除标准：正常组：40岁<年龄<50岁；体质指数(BMI)<24kg/m2；空腹血糖<6.1mmol/l；甘油三酯(TG)<1.7mmol/l；总胆固醇(TC)<5.17mmol/l；性别：1：1配对；肥胖组：40岁<年龄<50岁；BMI≥28kg/m2；空腹血糖<6.1mmol/l；性别：1：1配对；T2DM组：38岁<年龄<50岁；空腹血糖≥7.0mmol/l；性别：1：1配对。(3)血液样本的收集和保存：样本自收集后，室温4000rpm离心5min，吸取上层血清至1.5mlRNase-FreeEP管中，置于-80℃冰箱保存。(4)血液标本中microRNA的提取方法：1)样品处理：每200μL血清或血浆中加入900μL裂解液MZA,振荡器振荡混匀30sec至完全匀浆，颠倒混匀；2)室温放置5min，使得核酸蛋白复合物完全分离；3)加入200μL氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15sec，室温放置5min；4)12000rpm，4℃，离心15min，样品会分为3层：黄色的有机相，白色的中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中，进行下一步操作；...
【技术保护点】
1.一种用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列，其特征在于，所述序列为microRNA-X，该microRNA的序列如SEQ：ID：NO：1所示，设计引物的序列如SEQ：ID：NO：2-SEQ：ID：NO：3所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于早期诊断2型糖尿病的microRNA序列，其特征在于，所述序列为microRNA-X，该microRNA的序列如SEQ：ID：NO：1所示，设计引物的序列如SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：王翠喆，张雪婷，张君，谢建新，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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