一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1的各组分及浓度包括：0.8‑3.2g/L的第一缓冲液A、8.8‑24g/L的第一缓冲液B、5.8‑20.0g/L的电解质、0.2‑1.0ml/L的表面活性剂、0.8‑2.0ml/L的防腐剂；试剂R2的各组分及浓度包括：8‑27g/L的第二缓冲液、1.2‑9.8g的N,N‑二羟乙基甘氨酸、0.5‑2.0g/L的稳定剂、0.8‑2.0ml/的防腐剂、5‑20g/L的免疫球蛋白G1单克隆抗体、5‑20g/L的链霉亲和素、5‑20g/L的生物素以及0.5‑30g/L的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐。本发明专利技术的优点是：稳定性好、线性范围宽、精密度好。

A test kit for immunoglobulin G1 and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
B淋巴细胞在抗原刺激下转化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的抗体，称为免疫球蛋白。免疫球蛋白G(IgG)是血清中免疫球蛋白的主成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75％。IgG有4个亚型，即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG是体内最主要的抗体，具有抗病毒、中和病毒、抗菌及免疫调节的功能。有些自身抗体，如系统性红斑狼疮的LE因子，抗甲状腺球蛋白抗体也属于IgG。检测机体免疫球蛋白的含量可了解机体的体液免疫功能状态，帮助诊断免疫增生、免疫缺陷、感染及自身免疫性等多种疾病，具有重要的临床意义。常规的检测免疫球蛋白G1的试剂和检测方法存在着灵敏度和重复性差、准确性低的缺陷，限制了它的应用。因此，应该提供一种新的技术方案解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供一种可明显改善重复性和灵敏度的免疫球蛋白G1的检测试剂盒及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为：第二缓冲液8-27g/L所述保存液的各组分及浓度包括：N,N-二羟乙基甘氨酸1.2-9.8g/L稳定剂0.5-2g/L防腐剂0.8-2.0ml/L所述抗体偶联物的各组分及浓度包括：生物素5-20g/L链霉亲和素5-20g/L免疫球蛋白G1单克隆抗体5-20g/L1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.5-30g/L进一步的技术方案：所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中一种或两种以上的混合物。所述试剂R2中的第二缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、GOOD’S缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上的混合物。所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上的混合物。所述试剂R1中的表面活性剂为PEG8000、PEG6000、吐温20、曲拉通、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚、NP-40中的一种或两种以上的混合物。所述试剂R1中的电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中一种或两种以上的混合物。所述试剂R1、R2中的稳定剂是酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上的混合物。生物素结合免疫球蛋白G1单克隆抗体比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-免疫球蛋白G1单克隆抗体比例为0.5:1-4:1之间。免疫球蛋白G1的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，(1)、试剂R1制备在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求，边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B,搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入电解质，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入稳定剂、表面活性剂和防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；(2)、试剂R2制备(2-1)、偶联缓冲液配制在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求，边搅拌边投入第二缓冲液，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到4.50-6.50之间，并定容至最终体积；溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；(2-2)、保存液配制在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求，边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入防腐剂，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值到6.30-8.50之间，并定容至最终体积；溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；(2-3)、抗体偶联物的制备将免疫球蛋白G1单克隆抗体以缓冲液稀释到5-20g/L的浓度,与生物素按一定比例结合后，加入一定比例的链霉亲和素，混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以反应液溶解到0.5-30g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。由于上述技术方案的应用，本专利技术与现有技术相比具有如下优点：本专利技术的免疫球蛋白G1的检测试剂盒，采用免疫球蛋白G1单克隆抗体1:2连接生物素，与链霉亲和素二者1:1混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到0-40g/L。附图说明图1是未采用级联放大反应的校准品定标曲线图。图2是采用级联放大反应的校准品定标曲线图。其中：X轴表示校准品浓度，Y轴表示吸光度。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述：实施例1：一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括：缓冲液、电解质、表面活性剂、防腐剂和稳定剂，所述缓冲液是浓度为0.8g/L的二水合磷酸二氢钠和浓度为8.8g/L的十二水合磷酸氢二钠的混合液，所述电解质是浓度为5.8g/L的氯化钠，所述表面活性剂是浓度为40g/L的PEG6000，所述防腐剂是浓度为0.8ml/L的Proclin-950，所述稳定剂是浓度为0.5g/L的牛血清白蛋白。所述试剂R2包括：缓冲液、稳定剂、免疫球蛋白G1单克隆抗体-生物素-链霉亲和素的抗体偶联物、保存液以及防腐剂，所述缓冲液是浓度为8g/L的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，所述保存液的主要成分和组成浓度是：浓度为1.2g/L的N,N-二羟乙基甘氨酸、浓度为0.5g/L的牛血清白蛋白、浓度为0.8ml/L的Proclin-950，免疫球蛋白G1单克隆抗体-生物素-链霉亲和素的抗体偶联物的主要成分和组成浓度是：浓度为5g/L的生物素、浓度为5g/L的链霉亲和素、浓度为5g/L的免疫球蛋白G1单克隆抗体以及浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：/n

【技术特征摘要】
1.一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：



所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为：
第二缓冲液8-27g/L
所述保存液的各组分及浓度包括：
N,N-二羟乙基甘氨酸1.2-9.8g/L
稳定剂0.5-2g/L
防腐剂0.8-2.0ml/L
所述抗体偶联物的各组分及浓度包括：
生物素5-20g/L
链霉亲和素5-20g/L
免疫球蛋白G1单克隆抗体5-20g/L
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.5-30g/L。


2.根据权利要求1所述的一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中一种或两种以上的混合物。


3.根据权利要求1所述的一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的第二缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、GOOD’S缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上的混合物。


4.根据权利要求1或2所述的一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上的混合物。


5.根据权利要求4所述的一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的表面活性剂为PEG8000、PEG6000、吐温20、曲拉通、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚、NP-40中的一种或两种以上的混合物。


6.根据权利要求1所述的一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中一种或两种以上的混合物。


7.根据权利要求5所述的一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1、R2中的稳定剂是酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上的混合物。


8.根据权利要求5所述的一种免疫球蛋白G1的检测试剂盒，其特征在于：生物素结合免疫球蛋白G1单克隆抗体比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-免疫球蛋白G1单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁嘉扬，单以朗，
申请(专利权)人：苏州普瑞斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32