一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器、构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器、构建方法及应用。本发明专利技术利用目标物短链DNA为LAMP扩增外引物，其副产物氢离子诱导i‑motif构象转换，组装金属离子DNAzyme和循环剪切，实现对LAMP复杂体系及产物进行分离纯化；无需任何酶介入，在电极表面触发两条分别标记有电活性探针亚甲蓝和二茂铁的DNA发夹进行定向杂交，二者分别远离和靠近电极表面时，其电流信号比值具有高灵敏和高特异性的目标物浓度线性相关性。本发明专利技术建立的比率型传感器的电极反应更加单一化，有效降低背景干扰和假阳性信号，显著提高灵敏度，为多种疾病标志物DNA的电化学检测提供新思路和技术手段。

A ratio electrochemical biosensor for eliminating lamp background interference, its construction method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器、构建方法及应用
本专利技术属于分子生物学和电化学生物传感器
，涉及一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器构建方法及应用。
技术介绍
作为一种重要而高效的核酸放大技术，环介导等温扩增(LAMP)能在1小时内实现109复制扩增。LAMP反应过程中除生成长短不一的双链DNA主产物外，还有大量H+及焦磷酸，焦磷酸水解进一步产生H+。因此，LAMP反应溶液的pH会随目标引物的不同而发生改变。由于LAMP技术具有反应条件温和、操作简便快速、无需特殊仪器、特异性高等优势，已在病原体检测、临床医疗、食品等领域得到广泛应用。目前，用于LAMP反应实时或终点产物的定量方法主要有凝胶电泳、浊度、比色和发光等；近来有报道将LAMP与电化学方法联用进行定量分析，如用pH计直接测定副产物H+的浓度，或将副产物焦磷酸转化成具有电活性的杂多酸沉淀进行间接定量。但是，这些方法的灵敏度偏低、稳定性较差、操作较繁琐，因而LAMP技术的实际应用受到极大限制。针对这些局限性，有研究者通过微流控或毛细管实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器的构建方法，其特征在于，在电极表面固载MB-H1、Fc-H2以及燃料链F*，驱动H1和H2进行等温催化发夹自组装，即可完成所述传感器的构建；其中，所述F*以溶液形式滴加至电极表面，该溶液制备过程如下：先将底物链S*与纳米金修饰的磁性Fe

【技术特征摘要】
1.一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器的构建方法，其特征在于，在电极表面固载MB-H1、Fc-H2以及燃料链F*，驱动H1和H2进行等温催化发夹自组装，即可完成所述传感器的构建；其中，所述F*以溶液形式滴加至电极表面，该溶液制备过程如下：先将底物链S*与纳米金修饰的磁性Fe3O4微球结合，并与单链I*互补杂交，再加入目标DNA为外引物F3的LAMP反应溶液，诱导I*转换为i-motif结构，同时驱动Mg2+-DNAzyme组装和特异性剪切并释放F*，收集含有F*的上层溶液即可。


2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述LAMP反应溶液是利用5μL不同浓度的hDNA与2μL模板DNA、2μL外引物B3、各3μL的内引物BIP和FIP、1μL聚合酶Bst和1μLdNTPs于PCR仪中闭管反应而得。


3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，S*与磁性Au@Fe3O4微球通过Au-N键结合，反应时间为12小时，反应温度为室温；S*与I*互补杂交反应时间为1小时，反应温度为室温；LAMP反应溶液加入后的反应时间为1小时，反应温度为室温。


4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，Mg2+-DNAzyme组装和特异性剪切反应的具体过程是：...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文菊，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50