GN无醛快速固定液及配置方法技术

一种GN无醛快速固定液，该GN无醛快速固定液由体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮以及0.3g～1g/100ml的山梨酸钾组成，本发明专利技术的有益效果在于：与传统的福尔马林固定液相比，该GN无醛快速固定液各个成分均为无毒或低毒物质，常用于日常生活，气味温和，对粘膜刺激性小，固定速度快，可更完整的保存组织形态，对组织抗原的保存更加完整，固定效果优良，组织切片更易着色，组织切片的细胞轮廓更为清晰，原材料易于获取，配置方法简单，无需加热等特殊条件，成本低，本发明专利技术还提供了一种GN无醛快速固定液的配置方法。

GN aldehyde free fast fixing solution and its configuration

【技术实现步骤摘要】
GN无醛快速固定液及配置方法
本专利技术涉及动物病理检验及组织形态学研究用固定液，特别涉及一种GN无醛快速固定液及配置方法。
技术介绍
现阶段，动物组织常用的固定液有福尔马林固定液、Bouin氏固定液、醛糖钙固定液、AF固定液等。多数固定液中含有甲醛。现有的所有固定液中，以福尔马林固定液最为常用。它对组织的渗透能力强、固定均匀、组织收缩较小。尽管它具有高毒性，但由于其价廉、能较好地保存组织结构，所以至今仍广泛被人们所接受，一直作为病理科的常用组织固定液。但甲醛存在以下缺点：其一，甲醛易挥发，具有较强烈的刺激性和腐蚀性，严重造成空气和环境污染，而对其防护又极为困难。国内外医学研究证实，人体皮肤直接接触甲醛时会引发过敏反应、皮炎或湿疹；长期接触甲醛可能会引发慢性呼吸道疾病和癌症；2004年WHO宣布甲醛为致癌物质，同时提醒人们要重视甲醛的致癌性，并采取预防措施。其二，甲醛存放过久易产生白色沉淀，即三聚甲醛，进而影响组织标本固定效果。其三，甲醛容易氧化形成甲酸，使溶液变为酸性，导致标本酸化，严重时影响细胞核的染色效果。其四，组织长时间固定影响染色效果：甲醛固定的陈旧组织，如脾和肝等，组织内易形成甲醛色素，易与含铁血黄素相混淆，使病理诊断受到严重影响。其五，甲醛废液不能直接排入下水管道，需经过特殊处理，且处理费用较高。
技术实现思路
有鉴于此，针对上述不足，有必要提出一种无毒的GN无醛快速固定液。还有必要提出一种无毒的GN无醛快速固定液配置方法。一种GN无醛快速固定液，该GN无醛快速固定液由体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮以及0.3g～1g/100ml的山梨酸钾组成。优选的，该GN无醛快速固定液由体积份数为70%的无水乙醇、10%的冰乙酸、10%的丙三醇、10%的月桂氮酮以及0.5g/100ml的山梨酸钾组成。一种GN无醛快速固定液的配置方法，该方法包括如下步骤：将体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮均匀混合后形成第一混合液；向每100ml的第一混合液中加入0.3g～1g的山梨酸钾，然后搅拌，使山梨酸钾溶解于第一混合液中。优选的，所述无水乙醇的体积份数为70%，冰乙酸的体积份数为10%，丙三醇的体积份数为10%，月桂氮酮的体积份数为10%，每100ml的第一混合液中加入0.5g山梨酸钾。本专利技术中，无水乙醇、冰乙酸为蛋白凝固剂，对动物组织起到主要的固定作用；丙三醇为固定液稳定剂，用于减少乙酸与乙醇的挥发，且丙三醇可作为折光剂，可加强动物组织切片的清晰度；月桂氮酮为渗透剂，可加快固定液对组织的固定速度，山梨酸钾为蛋白防腐剂，可对动物组织起到长时间的保存效果，以防乙醇与乙酸挥发，造成固定效果下降；采用无毒或低毒的组分代替了有毒的组分，乙醇与乙酸常做食用材料，丙三醇可做食用和化妆品材料，并且其本身为人体脂肪的分解产物，月桂氮酮常做化妆品添加剂，山梨酸钾常作为食品防腐添加剂。本专利技术的有益效果在于：与传统的福尔马林固定液相比，该GN无醛快速固定液各个成分均为无毒或低毒物质，常用于日常生活，气味温和，对粘膜刺激性小，固定速度快，可更完整的保存组织形态，对组织抗原的保存更加完整，固定效果优良，组织切片更易着色，组织切片的细胞轮廓更为清晰，原材料易于获取，配置方法简单，无需加热等特殊条件，成本低。附图说明图1为相同试验条件下，采用本专利技术GN无醛快速固定液与福尔马林固定液所固定组织HE.染色结果对比。图2为相同着色程度下，采用本专利技术GN无醛快速固定液与福尔马林固定液肝脏细胞形态对比。图3为相同试验条件下，采用本专利技术GN无醛快速固定液与福尔马林固定液免疫组织化学结果对比。图4为相同试验条件下，采用本专利技术GN无醛快速固定液与福尔马林固定液固定速度与对小鼠刺激性对比。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本专利技术的保护范围。实施例1：将体积份数为70%的无水乙醇、10%的冰乙酸、10%丙三醇、10%月桂氮酮均匀混合后形成第一混合液，向每100ml的第一混合液中加入0.5g的山梨酸钾，然后搅拌，使山梨酸钾溶解于第一混合液中，制得GN无醛快速固定液。选用年龄及体重相近的成年健康家兔，雌雄各一只，作为固定用试验动物。耳缘静脉注射空气致死后解剖，取出心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、卵巢、睾丸并分别浸泡入福尔马林固定液（10%甲醛溶液）和本专利技术实施例1所制得的GN无醛快速固定液。第15天时，分别切开不同的组织，观察剖面。第30天时，将所固定的组织进行石蜡包埋并切片。将所得组织切片进行HE.染色和SP法免疫组织化学染色（一抗选用山羊抗兔HSPG，按照1：400稀释，阴性对照用PBS缓冲液代替一抗），切片在NIKONECLPISE80i系统进行照片采集。应用实施例1：将本专利技术实施例1制得的GN无醛快速固定液与福尔马林固定液分别用于十二指肠切片、睾丸切片、脾脏切片所固定组织HE.染色结果对比，在相同的试样条件下，对比两种固定液对于组织HE.着色效果及组织形态完整度的差异。参见图1，图中，1～4分别放大：×100，×100，×200，×200，每组对比上下放大倍数相同。A1～A4，GN无醛快速固定液组，十二指肠切片，HE.染色；a1～a4，福尔马林组，十二指肠切片，HE.染色。B1～B4，GN无醛快速固定液组，睾丸切片，HE.染色；b1～b4，福尔马林组，睾丸切片，HE.染色。C1～C4，GN无醛快速固定液组，脾脏切片，HE.染色；c1～c4，福尔马林组，脾脏切片，HE.染色。对比GN无醛快速固定液组与福尔马林组所固定组织的HE.染色结果，GN无醛快速固定液组固定的组织：组织结构更加完整：十二指肠HE.染色可见，福尔马林组所固定的组织，肌层与黏膜下层分离，部分肠绒毛断裂，GN无醛快速固定液组所固定的组织，形态结构良好；睾丸HE.染色可见，福尔马林组所固定的组织，白膜层与睾丸实质分离，睾丸小叶分离，睾丸实质内出现裂痕，GN无醛快速固定液组所固定的组织，形态结构良好。组织着色效果更佳：脾脏切片HE.染色可见，福尔马林组所固定的组织，红髓区与白髓区对比不鲜明，着色效果欠佳，GN无醛快速固定液组所固定的组织，红髓区与白髓区对比鲜明，着色良好。应用实施例2：将本专利技术实施例1制得的GN无醛快速固定液与福尔马林固定液分别用于肝脏细胞形态对比，相同着色程度下，对比两种固定液对于组织HE.染色，细胞形态及轮廓的差异。参见图2，图中，Ⅰ：福尔马林组，肝脏切片，HE.染色，×400；Ⅱ：GN无醛快速固定液组，肝脏切片，HE.染色，×400。通过调整染色时间，使两组着色效果相近，排除着色差异对试验结果的误差，观察两组肝脏切片，可见福尔马林组所固定的肝脏，细胞膜较为模糊，形本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种GN无醛快速固定液，其特征在于：该GN无醛快速固定液由体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮以及0.3g～1g/100ml的山梨酸钾组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种GN无醛快速固定液，其特征在于：该GN无醛快速固定液由体积份数为60%～80%的无水乙醇、10%～20%的冰乙酸、5%～10%丙三醇、5%～10%月桂氮酮以及0.3g～1g/100ml的山梨酸钾组成。


2.如权利要求1所述的GN无醛快速固定液，其特征在于：该GN无醛快速固定液由体积份数为70%的无水乙醇、10%的冰乙酸、10%的丙三醇、10%的月桂氮酮以及0.5g/100ml的山梨酸钾组成。


3.一种GN无醛快速固定液的配置方法，其特征在于，该方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏凡华，李承晔，高蕊，张珠明，袁莉刚，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：宁夏;64