一种同步检测PnVY和TYLCCNV的方法技术

本发明专利技术涉及一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法，属于植物保护领域，本发明专利技术涉及到的两种病毒的核酸类型不同，设计合成检测PnVY和TYLCCNV的引物，并筛选适用于两种病毒复合侵染的特异性引物；用CTAB法提取染病植物组织的总核酸，既能保证所提核酸中有DNA和RNA，也能降低检测成本；优化一步法双重检测体系，达到对PnVY和TYLCCNV的同步快速检测。该方法整个检测过程所用时间短，减少了试剂污染和反应中的影响因素，能够有效单一或复合识别PnVY、TYLCCNV，保证了检测结果的准确性。

A method for synchronous detection of pnvy and TYLCCNV

【技术实现步骤摘要】
一种同步检测PnVY和TYLCCNV的方法
本专利技术属于植物保护领域，具体的说，涉及一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法。
技术介绍
近年来，随着三七种植区域在云南的不断扩展，病毒病逐渐在云南各三七产区发生为害，对三七的产量和质量造成了明显的影响，对云南三七产业构成了严重的威胁。目前在三七上主要的的病毒病为三七Y病毒(PanaxvirusY，PnVY)、中国番茄黄化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlChinavirus，TYLCCNV)及其卫星——中国番茄黄化曲叶病毒DNAβ(TomatoyellowleafcurlChinabetasatellite，TYLCCNB)和三七A病毒(PanaxvirusA，PnVA)，其中TYLCCNV、TYLCCNB为单链DNA病毒，TYLCCNV属于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)，自然条件下由粉虱通过持久性传毒方式传播，寄主范围广泛。PnVY是马铃薯Y病毒科(Potyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的病毒，为单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n1）引物设计合成：/n分别设计合成检测PnVY和TYLCCNV的引物，引物序列如下：/nPnVY：/n正向引物(PnVYdF4 ) 5’-3’：CGTACATCAAGTTCGGCTC/n反向引物（PnVYcRa2） 5’-3’：TAATTGTCAGCACATCGTA/nTYLCCNV：/n正向引物（TYLCCNVF1） 5’-3’：CCTGTATATGCGACTTTGAAAGT/n反向引物（TYLCCNVR1） 5’-3’：CCCAATTCCAGCTATAAAGAGTA/n2）CTAB法提取染病植物组织的...

【技术特征摘要】
1.一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法，其特征在于：包括如下步骤：
1）引物设计合成：
分别设计合成检测PnVY和TYLCCNV的引物，引物序列如下：
PnVY：
正向引物(PnVYdF4)5’-3’：CGTACATCAAGTTCGGCTC
反向引物（PnVYcRa2）5’-3’：TAATTGTCAGCACATCGTA
TYLCCNV：
正向引物（TYLCCNVF1）5’-3’：CCTGTATATGCGACTTTGAAAGT
反向引物（TYLCCNVR1）5’-3’：CCCAATTCCAGCTATAAAGAGTA
2）CTAB法提取染病植物组织的总RNA和DNA，作为RT-PCR扩增模板；
3）一步法RT-PCR扩增；
4）琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。


2.根据权利要求1所述的一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法，其特征在于：步骤1）中，所述的检测PnVY的引物为ssRNA，其扩增片段大小为1032bp；所述的检测TYLCCNV的引物为ssDNA，其扩增片段大小为650bp。


3.根据权利要求1所述的一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法，其特征在于：步骤2）中，所述CTAB法提取感病植物组织的总核酸步骤如下：称取100mg液氮研磨成粉状的病叶样品至1.5mL离心管中，加入1.2mLCTAB缓冲液；65℃温浴45~60min；13000r/min离心10min，取650μL上清至一新的1.5mL离心管，加入等体积氯仿/异戊醇（24:1），涡旋震荡混匀30s；13000r/mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：李凡，杨馨，柳勤海，谭冠林，兰平秀，陈小姣，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53