生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建制造技术

本发明专利技术公开了一种完全免固定高效检测miRNA的分析策略。本方法首先在微流控纸芯片原位生长金纳米，随后通过羰基和金的相互作用将葫芦[7]脲固定在纸工作电极上。由于带负电荷的磷酸二酯主链与葫芦[7]脲的负羰基之间的排斥作用，亚甲基蓝标记的探针几乎不能与葫芦[7]脲形成配合物，因此不能有效地产生电化学响应。当目标物和外切酶加入到溶液后，亚甲基蓝标记的探针被外切酶剪切释放亚甲基蓝标记的单核苷酸。由于葫芦[7]脲的超分子识别能力和单核苷酸具有超低的负电荷，亚甲基蓝标记的单核苷酸被葫芦[7]脲捕获产生可检测的电信号实现对目标物的量化检测。本方法不具有复杂的材料生长和生物标记过程，省时省力，操作简单，检测快速，为其他疾病相关生物标记物的小型化检测提供一个途径。

Construction of a paper-based electrochemical sensor free from immobilization of biomolecules

【技术实现步骤摘要】
生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建
本专利技术涉及纳米材料技术，生物标记技术及纸芯片
，更具体的说是生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建。
技术介绍
作为一种小的非编码的RNA分子，miRNA在细胞增值、遗传、基因分化等生物学过程中具有重要的作用。一些miRNA还与人类癌症的发生、病毒感染和肿瘤的治疗相关，是早期疾病的诊断、发病机制的研究的重要生物标志物。到目前为止，许多分析方法-化学发光、电致化学发光、光电化学、电化学-已经实现了对miRNA的检测。其中，电化学传感由于灵敏度高、选择性好、易于微型化等优点收到广泛关注。对于大多数的电化学传感器，电化学材料和生物识别探针通过化学或物理作用固定在电极的表面，通过DNA结构的变化或电极表面电性质的变化实现对目标物的检测。固定过程存在良好的可重复性、灵敏度高等优点，也存在许多缺点，例如耗费时间长、操作复杂、用于连接基团的试剂增加了成本、固定条件的最优化、电极表面空间位阻可能导致探针几何变化等。因此，开发无固定化的电化学传感方法实现简单、快速、低成本的生物分析是最为理想的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建，其特征在于该方法包括以下步骤：/n（1）在计算机上用Adobe illustrator CS4设计纸芯片的图案，将设计好的打印图案通过蜡打印机打印在A4色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在100 ℃加热60 s形成疏水区域和亲水的工作区域；/n（2）用丝网印刷技术在步骤（1）中获得的纸芯片上印刷三电极体系（碳工作电极、碳对电极和Ag/AgCl参比电极）；/n（3）利用原位还原法在碳电极的工作区域生长金纳米，其具体步骤为：首先，20 μL金纳米粒子溶液滴涂在电极表面，在室温下干燥，此过程重复三次，随后称取0.013 g盐酸羟胺溶解于1 mL...

【技术特征摘要】
1.生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建，其特征在于该方法包括以下步骤：
（1）在计算机上用AdobeillustratorCS4设计纸芯片的图案，将设计好的打印图案通过蜡打印机打印在A4色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在100℃加热60s形成疏水区域和亲水的工作区域；
（2）用丝网印刷技术在步骤（1）中获得的纸芯片上印刷三电极体系（碳工作电极、碳对电极和Ag/AgCl参比电极）；
（3）利用原位还原法在碳电极的工作区域生长金纳米，其具体步骤为：首先，20μL金纳米粒子溶液滴涂在电极表面，在室温下干燥，此过程重复三次，随后称取0.013g盐酸羟胺溶解于1mL去离子水中，加入1mL质量分数1%的氯金酸，充分摇晃后，量取20μL滴在电极表面，室温下干燥即可，最后，将电极在1mM葫芦[7]脲中培育1h;
（4）取30μL10μM亚甲基蓝标记的DNA和20μL不同浓度的miRNA溶解在37μLTris-HCl缓冲液中，在37℃下培育2h，然后将...

【专利技术属性】
技术研发人员：于京华，史慧慧，王衍虎，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37