一种抗菌肽ID13及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种抗菌肽ID13(序列如SEQ ID No.1所示)及其制备方法和应用。利用基因工程技术，实现ID3在毕赤酵母中的重组表达。本发明专利技术的抗菌肽ID13对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、猪链球菌等革兰氏阳性菌具有很好的杀菌活性并对小鼠红细胞的溶血活性以及对鼠源巨噬细胞的细胞毒性很低。

An antibacterial peptide ID13 and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种抗菌肽ID13及其制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程领域，具体地说，涉及一种抗菌肽ID13及其制备方法和应用。
技术介绍
抗菌肽(AMPs)是多细胞生物为保护宿主免受病原微生物侵害而产生的内源性多肽，由于它们在构成先天性免疫系统中起着至关重要的作用。通常具有广泛的抗菌活性，包括病毒，细菌，原生动物和真菌(Zasloff等，2002)；多种杀菌靶位点，杀菌模式与现有抗生素不同以及作为免疫调节剂的广泛活性，因此AMPs被认为是未来抗菌药物最有力的候选物之一(AliAdemBahar等，2013)。但是天然抗菌肽存在抗菌活性不强、合成成本较高、对真核生物有一定的毒性等不足。因此如何提高其活性和最大程度降低其毒性成为目前抗菌肽药物开发难点和希望所在。所以，通过改造抗菌肽使其具有更高的抑菌活性，降低毒性已成为现在研究的热点。抗菌肽DLP4是黑水虻通过金黄色葡萄球菌KCCM40881进行免疫刺激从而产生的高效抗G+菌活性AMP(Park等，2015)。具有CSαβ构象，对革兰氏阳性菌，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)有较显著抑菌效本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗菌肽ID13，其序列如SEQ ID No：1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽ID13，其序列如SEQIDNo：1所示。


2.根据权利要求1所述的一种抗菌肽D13的制备方法。


3.一种含有编码抗菌肽ID13的DNA序列，其特征在于所述编码抗菌肽ID13的DNA序列的5’端添加XhoI酶切位点和Kex2切割位点，在3’端添加TAA和TAG终止子序列以及XbaI酶切位点，所得基因表达框的核苷酸序列如SEQIDNo：3所示。


4.一种含有编码抗菌肽ID13DNA序列的表达载体，其特征在于权利要求3所述的DNA序列和载体pPICZαA经XhoI和XbaI双酶切和连接，得到的重组酵母表达载体。


5.一种含有权利要求4所述表达载体的基因工程菌，其特征在于权利要求4所述表达载体线性化后转化毕赤酵母X-33，筛选高表达基因工程菌。


6.权利要求5所述基因工程菌的培养方法，包括以下步骤：
1)种子液的制备：从YPD平板挑取酵母转化子单菌落，接种于含100μg/mlzeocin的10mLYPD液体培养基中，29℃，250rmp，摇床培养18-24h，以1％接种量接种于200mLYPD液体培养基中，29℃，250rmp，摇床培养16-18h，至OD600nm值...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建华，李兵，滕达，毛若雨，王秀敏，郝娅，杨娜，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11