白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4基因表达的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了白头翁汤在降低肠微血管内皮细胞TLR‑4基因表达药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10‑15份，黄柏5‑15份，秦皮15‑30份，白头翁15‑30份。本发明专利技术所述的白头翁汤显著降低肠微血管内皮细胞TLR‑4基因表达显著降，效果显著。

Application of Baitouweng Decoction in the preparation of drugs to reduce TLR-4 gene expression in intestinal microvascular endothelial cells

【技术实现步骤摘要】
白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4基因表达的药物中的应用
本专利技术涉及白头翁汤的新用途，特别涉及白头翁汤在降低肠微血管内皮细胞TLR-4蛋白表达药物中的应用。
技术介绍
细菌病导致食品动物死亡率居各类疾病之首，多年来在防治细菌病的方法上，还是过多的选择抗生素治疗，但抗生素带来的药物残留及耐药性等问题也随之而来。所以具有残留少、毒性低、不易产生耐药性等优点的中兽药成为替代抗生素的首选。微血管内皮细胞(Microvascularendothelialcells，MVECs)是致病因子最初作用的靶细胞，其能适应并调节器官和整个机体的活动。大肠杆菌分为致病型和非致病型，在我们机体的肠道正常菌群中就存在非致病型的大肠杆菌，所以能够引起机体产生肠道炎症的致病型大肠杆菌是研究的重点。而致病性大肠杆菌能够引起机体免疫功能的主要成分之一就是内毒素(endotoxin，ET)，它是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分脂多糖(lipopolysacch，LPS)，同时它也是目前已知最强的免疫刺激物之一，内毒素的活性中心是类脂A，它能够激活先天性免疫反应。革兰氏阴性菌释放内毒素主要在其死亡或繁殖的时候，它可以刺激机体的多种细胞产生内源性的炎性因子，内毒素具有广泛的生物活性，可引起机体产生发热反应，同时促进血管活性物质释放，能够降低血压，激活凝血系统和补体，从而引发局部过敏，进而影响或直接参与免疫反应，更严重的会导致死亡。所以在一些猪场，当发生大肠杆菌病时，将大量使用抗生素来治疗大肠杆菌病，虽然导致大肠杆菌死亡但同时引起大量内毒素的释放，导致在猪场的空气，土地，饮水中存在大量内毒素，从而使整个猪场的猪都出现发热、炎症、厌食、败血性休克等严重疾病[16]。综上所述，使用抗生素来治疗大肠杆菌病的方法需要替换，寻找更好的防治动物大肠杆菌病的药物势在必行。内毒素(LPS)是由革兰氏阴性菌产生的一种具有强致病性的毒素，可以对畜禽养殖产生非常大的危害。
技术实现思路
本专利技术目的在于公开一种中药组合物及其新用途。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的：白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4基因表达的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。所述的药物是指动物的药物。所述的肠微血管内皮细胞的基因还包括TRAF6。所述的肠微血管内皮细胞的基因还包括MAPK3。白头翁汤的原料药及重量份为：黄连15份，黄柏10份，秦皮20份，白头翁20份；或黄连12份，黄柏15份，秦皮25份，白头翁20份，或黄连10份，黄柏10份，秦皮15份，白头翁20份。白头翁汤剂型为胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂等口服制剂。白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮，滤过，浓缩，干燥，加辅料适量，混匀，分装。所述的白头翁汤的制备方法为：将原料药，加水浸泡20-60min，优选为30min，煎煮30min，过滤后收集药液后，加水继续煎煮30min，过滤，收集药液，加水继续煎煮30min，过滤，将3次所得的滤液合并，过滤浓缩至浓度为1g/mL，于80℃干燥箱内进行干燥，待药液烘干既得。还可以为：所述的白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮2次，第一次60min，第2次30min,滤过，浓缩，喷雾干燥，分装。还可以为：白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮，滤过，浓缩，加乙醇，醇沉，上清液挥去乙醇，浓缩，加辅料适量，干燥，混匀，制粒,分装。本专利技术所述的白头翁汤显著降低肠微血管内皮细胞TLR-4、TRAF6、MAPK3基因表达显著降，效果显著。附图说明：图1RIMVECs的细胞形态(标尺＝50μm)A,第1代RIMVECs；B,第3代RIMVECs；图2CD31免疫荧光染色结果A，CD31染色组；B，阴性对照组；图3tlr-4基因的扩增曲线和溶解曲线A：扩增曲线；B溶解曲线；图4TRAF6基因的扩增曲线和溶解曲线A：扩增曲线；B溶解曲线；图5MAPK3基因的扩增曲线和溶解曲线A：扩增曲线；B溶解曲线；图6GAPDH基因的扩增曲线和溶解曲线A：扩增曲线；B溶解曲线；图7RT-PCR检测头翁汤对LPS作用的大鼠肠微血管内皮细胞TLR4、TRAF6及MAPK3基因的相对表达量*p<0.05，**p<0.01。具体实施方式下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。实施例1：称取黄连15g、黄柏10g、秦皮20g、白头翁20g，将称取好的中药材置于熬药罐中，加入足量蒸馏水浸泡30min，用武火(快火)煮沸后改为文火(慢火)继续煎煮30min，使用四层纱布趁热过滤后收集药液。向罐中剩余的药渣中加入足量蒸馏水，用武火煮沸后改为文火继续煎煮30min，用新的纱布趁热过滤，收集药液，重复上述步骤一次，最后将三次所得的滤液合并，用抽滤装置将合并的滤液进行抽滤以去掉残留的药渣。利用旋转蒸发仪将白头翁汤水煎液浓缩至65mL，使其浓度为1g/mL；将浓缩好的白头翁汤水煎液倒入干净的玻璃平皿中，于80℃干燥箱内进行干燥处理，待药液烘干后对其进行刮取得到白头翁汤的中药粉末，于室温冷却后称重，密封置于-20℃冰箱中保存备用,简称PD。实施例21材料1.1试验动物1-3日龄的SD大鼠，购于北京兴隆养殖场。1.2主要试剂1.3主要仪器1.4主要试剂的配置(1)DMEM基础培养基DMEM干粉一袋NaHCO33.7gddH2O1.0L待完全溶解后，用1.0mol·L-1的NaOH和1.0mol·L-1的HCL调整其PH值至7.2～7.4，并定容至1.0L。过滤除菌后分装，于4℃保存备用。(2)D-Hank’s液D-Hank’s干粉一袋NaHCO30.35gddH2O1.0L待完全溶解后，用1.0mol·L-1的NaOH和1.0mol·L-1的HCL调整其PH值至7.2～7.4，并定容至1.0L。过滤除菌后分装，于4℃保存备用。(3)20％FBS的DMEM完全培养基将溶液配制成含2％FBS的维持培养基100mL，现用现配,所配溶液需在一周内使用完。1.5引物设计根据GenBank中TLR4、TRAF6基因序列，采用PrimerPremier5.0设计一对特异引物，由北京基谱生物科技有限公司合成。根据GenBank中MAPK3基因序列，采用PrimerPremier5.0设计一对特异引物，由苏州吉玛基因有限公司合成。表2-1GAPDH、TLR4、TRAF6、MAPK3基因引物Table2-1GAPDH、TLR4、TRAF6、MAPK3gen本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4基因表达的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。/n

【技术特征摘要】
1.白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4基因表达的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物是指动物的药物。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的肠微血管内皮细胞的基因还包括TRAF6。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的肠微血管内皮细胞的基因还包括MAPK3。


5.如权利要求2所述的应用，其特征在于白头翁汤的原料药及重量份为：黄连15份，黄柏10份，秦皮20份，白头翁20份；或黄连12份，黄柏15份，秦皮25份，白头翁20份，或黄连10份，黄柏10份，秦皮15份，白头翁20份。


6.如权利要求1至5任一所述的应用，其特征在于，白头翁汤剂型为胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂等口服制剂。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：董虹，颜紫骐，蒋林树，刘晓晔，穆祥，王芸，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11