NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途，属于生物医药研究领域。本发明专利技术通过研究NUPR1在肌层浸润性膀胱癌中的表达水平，发现其与肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的生长、增殖、分化、转移密切相关。通过使NUPR1基因沉默表达，可以显著抑制肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的生长。本发明专利技术通过序列设计和大量实验验证，获得了一条特异性shRNA序列，采用慢病毒包装后，使NUPR1的表达降低95％～99％。

The use of nupr1 inhibitor in the preparation of bladder cancer drugs

【技术实现步骤摘要】
NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途
本专利技术涉及生物医药研究领域，尤其是涉及一种NUPR1抑制剂及其在制备膀胱癌治疗药物中的用途。
技术介绍
NUPR1(Nuclearprotein-1)分子主要定位在细胞核上，是一个含有82个氨基酸的无稳定性二级机构的转录调节因子。剪切后形成两个亚基，a型和b型。1997年，在最初研究大鼠胰腺炎胰腺损伤时发现NUPR1基因，由于它的相对分子量为8872.7Da，因此也被命名为p8。NUPR1具有转录活性，并已证实在多种肿瘤的发生、发展和转移过程中具有重要作用。研究表明，NUPR1与多种非肿瘤性疾病过程有关，如胰腺炎、糖尿病及其并发症、心肌病变、神经系统的应激性损伤等。在肿瘤方面，NUPR1参与了乳腺癌、胰腺癌、甲状腺乳头状癌等肿瘤的发展与转移。针对NUPR1的研究为恶性肿瘤提供了一个新的方向和依据。目前对于NUPR1应用于肿瘤治疗的研究方法包括基因敲除、基因沉默等。李俊进行了NUPR1基因敲低后的U251和U87细胞检测(Nupr1调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究，大连医科大学博士论文，2017年3月)；邓跃林等检测了NUPR1基因沉默后非小细胞肺癌细胞A549细胞体外迁移、侵袭能力的变化(Nupr1调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究，现代生物医学进展，2017年第19期)。对于NUPR1的研究和相关产品的开发可以促进肿瘤治疗的发展。膀胱癌(bladdercancer)在全世界恶性肿瘤中排在第十位，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。近年来，我国膀胱癌的发病率和死亡率呈上升趋势。膀胱浅表性尿路上皮癌(NMIBC)通过早期发现，后续行经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)及术后规律膀胱化疗药物灌注治疗，预后较好。而对于肌层浸润性膀胱癌(MIBC)，因较早出现疾病进展、术后复发及转移，且对辅助放化疗不敏感或易出现耐药性，术后5年存活率只有47％。CN108498800A提供了一种COPB2抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途中，其中COPB2慢病毒转染膀胱癌6537细胞干扰效率为70％；通过定量PCR与Westernblot检测，COPB2干扰效率为60-75％。由于临床治疗情况复杂，病例体质差异很大，因此这一效率还无法达到临床的治疗要求。《沉默NUPR1对人多发性骨髓瘤细胞自噬的影响及机制研究》(李星欣，重庆医科大学硕士学位论文，2018年5月)公开了一组最佳干扰序列为：5’-CCAAGCTGCAGAATTCAGA-3’，对照病毒序列为5’-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3’。结果表明NUPR1-shRNA慢病毒转染U266和PRMI8226的转染效率为90％。但是该干扰序列对于肿瘤细胞的干扰效率并不高，并且也不适于与膀胱癌肿瘤细胞的干扰。因此，需要开发一种干扰效率更高、靶向作用于肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的新型药物。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途。本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途，所述NUPR1抑制剂为含有shRNA序列的干扰核酸构建体；所述shRNA序列为：5’-AAGAAAGCTACAGAAGAAACT-3’。进一步的，所述干扰核酸构建体为干扰慢病毒载体。所述干扰慢病毒载体为pFU-GW-009。进一步的，所述膀胱癌为肌层浸润性膀胱癌。进一步的，所述药物还包括一种或多种药学上可接受的载体或辅料。药学上可接受的载体或辅料的一些物质的具体例子有：糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醉、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。本专利技术中，除非特别说明，药物剂型并无特别限定，可以被制成针剂、口服液、片剂、胶囊、滴丸、喷剂等剂型，可通过常规方法进行制备。药物剂型的选择应与给药方式相匹配。本专利技术有益的技术效果在于：本专利技术通过研究NUPR1在肌层浸润性膀胱癌中的表达水平，发现其与肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的生长、增殖、分化、转移密切相关。通过使NUPR1基因沉默表达，可以显著抑制肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的生长。本专利技术通过序列设计和大量实验验证，获得了一条特异性shRNA序列，采用慢病毒包装后，使NUPR1的表达降低95％～99％。本专利技术提供的NUPR1抑制剂可以使NUPR1的基因不转录，或降低NUPR1的基因的转录活性，或者使NUPR1的基因不表达，或降低NUPR1的基因的表达活性。其可以作为治疗肌层浸润性膀胱癌的靶向药物的有效成分之一，抑制膀胱癌细胞增殖；抑制膀胱癌细胞克隆形成的能力，治疗膀胱癌，为膀胱癌治疗开辟新的方向。附图说明图1为基于TCGA数据库NUPR1临床相关性分析；图2为携带NUPR1干扰靶点的工具载体质粒；图3为实施例3Westernblot实验结果。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本专利技术进行具体描述。应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。实施例1：NUPR1在膀胱癌细胞中的表达本专利技术通过TCGA数据库分析，表明NUPR1在高级别膀胱癌组织中表达高于低级别组，差异具有统计学意义(图1A：高级别膀胱癌组织中NUPR1表达量高于低级别癌组织，P<0.01)，且随着肿瘤分期升高，表达水平呈正相关增高，差异具有统计学意义(图1B：分期组中，NUPR1表达量：IV期高于III期高于II期，差异具有统计学意义(P＝0.003))。上述分析提示NUPR1具备临床相关性，对后续细胞功能机制则需要进一步深入研究。实施例2：制备NUPR1干扰慢病毒采用二代自失活型慢病毒包装系统进行病毒包装，包括三个质粒：(1)携带NUPR1干扰靶点的工具载体质粒(载体GV277：pFU-GW-009-hU6-MCS-EGFP-IRES-puromycin，如图2所示，内插入干扰NUPR1mR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途，其特征在于所述NUPR1抑制剂为含有shRNA序列的干扰核酸构建体；所述shRNA序列为：/n5’-AAGAAAGCTACAGAAGAAACT-3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途，其特征在于所述NUPR1抑制剂为含有shRNA序列的干扰核酸构建体；所述shRNA序列为：
5’-AAGAAAGCTACAGAAGAAACT-3’。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述干扰核酸构建体为干扰慢病毒载体。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张力峰，左立，高林生，糜远源，陈加生，
申请(专利权)人：常州市第二人民医院，无锡市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32