一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法及其应用，所述构建方法包括：将来源于继发性甲旁亢病人的甲旁腺组织进行预处理，再将其移植入小鼠体内，构建继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型。本发明专利技术所涉及的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法为疾病的发展、治疗药物的筛选及疗效的科学评价打下了较好的构建模型基础，采用该方法可以较好地科学、快速、准确地判断出小鼠发病的严重程度及治疗情况，也为治疗继发性甲旁亢引发的骨质疏松的药物筛选模型成功构建了一种便捷、快速、准确的判断方法。该构建方法具有很高的成功率，且具有很高的临床相关性。

【技术实现步骤摘要】
一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法及其应用
本专利技术属于生物医疗
，具体涉及一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法及其应用。
技术介绍
甲状旁腺激素(parathyroidhormone,PTH)是甲状旁腺主细胞分泌的，由84个氨基酸组成的一种重要的钙磷稳态调节因子，可根据血钙浓度变化调节自身的表达和分泌，在维持机体血液钙磷平衡以及骨代谢平衡过程中发挥重要作用。间歇性给予低剂量PTH可促进成骨细胞的成熟分化，介导成骨过程，从而促使骨量增加；而持续性给予高剂量PTH可促进破骨细胞的成熟，从而介导破骨过程，诱发骨丢失。PTH在临床中被用于治疗绝经妇女的骨质疏松；有数据表明，每天注射一针PTH可有效改善绝经妇女的骨质疏松程度，这一现象提示节律性给予PTH可促进骨生成。甲状旁腺功能亢进(甲旁亢)是由于甲状旁腺分泌过多PTH引起的一系列症候群，可导致骨痛、骨质疏松/骨折、高钙血症等；即持续高水平的PTH可诱发一系列的骨代谢紊乱症状。此前，人们对骨质疏松的认识常局限于缺钙及钙吸收的功能不足；因此，关于骨质疏松的治疗常常落足于补钙以及服用促进钙吸收的相关增补剂。近年来，人们逐渐认识到PTH的过量分泌也能导致骨质疏松症；但是，目前临床筛查中依然存在主症偏好现象，即甲旁亢病人常常被关注于PTH的过量分泌上，其伴随的骨质疏松症易被忽视。目前，现有技术中尚未公开如何构建继发性甲旁亢引发的骨质疏松动物模型，其对继发性甲旁亢引发的骨质疏松疾病的研究工作是至关重要的，因此，若能构建一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松的动物模型是非常有意义的。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法及其应用。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，所述构建方法包括：将来源于继发性甲旁亢病人的甲旁腺组织进行预处理，再将其移植入小鼠体内，构建继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型。本专利技术所涉及的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法为疾病的发展、治疗药物的筛选及疗效的科学评价打下了较好的构建模型基础，采用该方法可以较好地科学、快速、准确地判断出小鼠发病的严重程度及治疗情况，也为治疗继发性甲旁亢引发的骨质疏松的药物筛选模型成功构建了一种便捷、快速、准确的判断方法。该构建方法具有很高的成功率，且具有很高的临床相关性。优选地，所述预处理的方式为：将来源于继发性甲旁亢病人的甲旁腺组织剪碎后进行组织培育。优选地，所述将组织剪碎是指将组织剪碎成0.5-2mm3的组织块，例如0.5mm3、0.8mm3、1mm3、1.2mm3、1.5mm3或2mm3等，范围内的其他任意具体点值均可选择，在此便不进行一一赘述。优选地，所述培育是指将组织置于含有血清和双抗的培养基中培育。优选地，所述含有血清和双抗的培养基为含有10％FBS和1％双抗的RPMI1640培养基。优选地，所述培育的时间为3-7天，例如3天、4天、5天、6天或7天等，范围内的其他任意具体点值均可选择，在此便不进行一一赘述。优选地，所述培育在37℃，5％CO2培养箱中进行。优选地，所述移植的方式为：在小鼠背部三角区开口，拓宽开口以形成一个装纳组织块的口袋，再将组织块置于口袋后缝合。优选地，用手术刀在小鼠背部三角区开口，用镊子伸入开口并拓宽以形成一个装纳组织块的口袋，再将2-6块(例如2块、3块、4块、5块或6块)组织块置于口袋后缝合并消毒伤口。作为本专利技术的优选技术方案，所述继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法包括如下步骤：(1)将来源于继发性甲旁亢病人的甲旁腺组织置于预冷的D-Hanks液中，剥去血管组织，剪碎成0.5-2mm3的组织块；(2)将步骤(1)得到的组织块置于含有血清和双抗的培养基中，置于37℃，5％CO2培养箱中培养3-7天；(3)用手术刀在小鼠背部三角区开口，用镊子伸入开口并拓宽以形成一个装纳组织块的口袋，再将2-6块步骤(2)得到的组织块置于口袋后缝合，并消毒伤口，构建继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型。本专利技术所涉及的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型构建方法，判断其是否成功的方法包括：上述移植操作结束后4周收取小鼠的血液样本，分别检测血清PTH或血钙水平，并与对照组小鼠(假手术组，仅实施手术过程，不进行移植操作)做对比；通过micro-CT进行扫描重构，分别分析实质骨与松质骨的变化，利用骨小梁数量，骨密度以及骨小梁间隙等参数表征骨代谢情况，并与对照组小鼠(假手术组，仅实施手术过程，不进行移植操作)做对比；利用免疫染色技术，统计分析成骨细胞标记物碱性磷酸酶以及破骨细胞标记物抗酒石酸酸性磷酸酶的表达情况，同时统计成骨细胞数与骨体积比值(Ob/TV)和破骨细胞数与骨体积比值(Oc/TV)。若可见移植组小鼠血清PTH与血钙明显高于对照组，可见移植组小鼠胫骨骨量厚度明显变薄，骨密度、骨体积密度明显降低，可见移植组小鼠成骨细胞标记物碱性磷酸酶表达增加、破骨细胞标记物抗酒石酸酸性磷酸酶表达减少，可见成骨细胞数与骨体积比值(Ob/TV)升高、破骨细胞数与骨体积比值(Oc/TV)降低，则可证明甲旁亢裸鼠模型构建成功。第二方面，本专利技术提供一种如上所述的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法在制备治疗继发性甲旁亢引发的骨质疏松疾病的药物中的应用。相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术所涉及的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法为疾病的发展、治疗药物的筛选及疗效的科学评价打下了较好的构建模型基础，采用该方法可以较好地科学、快速、准确地判断出小鼠发病的严重程度及治疗情况，也为治疗继发性甲旁亢引发的骨质疏松的药物筛选模型成功构建了一种便捷、快速、准确的判断方法。该构建方法具有很高的成功率，且具有很高的临床相关性。附图说明图1是实施例4中对照组和移植组小鼠的血清PTH水平统计图；图2是实施例4中对照组和移植组的小鼠股骨结构图；图3是实施例4中对照组和移植组的小鼠胫骨扫描重构图；图4是实施例4中对照组和移植组的小鼠骨密度(BMD)统计图；图5是实施例4中对照组和移植组的小鼠骨体积密度(BV/TV)统计图；图6是实施例4中对照组和移植组小鼠的成骨细胞数与骨体积比值(Ob/TV)的统计图；图7是实施例4中对照组和移植组小鼠的破骨细胞数与骨体积比值(Oc/TV)的统计图；图8是实施例5中对照组和移植组小鼠的血清PTH水平统计图；图9是实施例5中对照组和移植组的小鼠骨密度(BMD)统计图；图10是实施例5中对照组和移植组的小鼠骨体积密度(BV/TV)统计图；图11是实施例5中对照组和移植组小鼠的成骨细胞数与骨体积比值(Ob/TV)的统计图；图12是实施例5中对照组和移植组小鼠的破骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：将来源于继发性甲旁亢病人的甲旁腺组织进行预处理，再将其移植入小鼠体内，构建继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：将来源于继发性甲旁亢病人的甲旁腺组织进行预处理，再将其移植入小鼠体内，构建继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型。


2.如权利要求1所述的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述预处理的方式为：将来源于继发性甲旁亢病人的甲旁腺组织剪碎后进行组织培育。


3.如权利要求1或2所述的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述将组织剪碎是指将组织剪碎成0.5-2mm3的组织块。


4.如权利要求1-3中任一项所述的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述培育是指将组织置于含有血清和双抗的培养基中培育；
优选地，所述含有血清和双抗的培养基为含有10％FBS和1％双抗的RPMI1640培养基。


5.如权利要求1-4中任一项所述的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述培育的时间为3-7天。


6.如权利要求1-5中任一项所述的继发性甲旁亢引发的骨质疏松小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述培育在37℃，5％CO2培养箱中进行。


7.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，刘运辉，张路，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44