用于含有PERCP的抗体制剂的稳定化的组合物制造技术

本公开涉及可用于流式细胞术分析的制剂和方法。本发明专利技术的制剂和方法涉及使用PerCP来稳定在流式细胞术中使用的荧光染料，从而允许在升高的温度下和/或在长时段内使用和储存制剂。

A stable composition for an antibody preparation containing percp

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于含有PERCP的抗体制剂的稳定化的组合物优先权声明本申请主张2017年8月31日提交的第号62/552,557美国临时申请的优先权并要求其权益，兹将该申请的全部内容通过提述并入本申请。专利
本公开涉及包含稳定的结合剂的制剂、方法和试剂盒。背景流式细胞术是一种强大的用于表征单个细胞的特性以及鉴定异质混合物中细胞的类型的方法。通常通过从细胞培养物或组织样品制备悬浮液，并在管或微量滴定板中将细胞与未标记或荧光染料标记的抗体温育，将细胞染色。将悬浮液引入流式细胞仪中，并用激光束照射细胞流。检测由细胞与激光束之间的相互作用引起的荧光发射和光散射，并且基于测得的荧光发射和/或散射来量化细胞的一个或多个特征。流式细胞术还允许基于测得的光学特性来鉴定、量化、分开和/或分离单个细胞。这种方法称为免疫表型分型，可用于分析异质混合物中的多个细胞群。免疫表型分型可以通过将能够与细胞标志物结合的抗体引入包含所述细胞标志物的细胞，并使用流式细胞术检测任何产生的荧光或散射来完成。如果细胞标志物在多于一种细胞类型中表达，则可以将多种抗体添加到异质混合物中以有效区分各个群。在这样的情况下，将每种抗体与一种不同的荧光染料缀合，从而允许同时检测多个标志物。例如，可以将与第一荧光染料缀合的抗体和与第二荧光染料缀合的抗体添加至异质混合物中，并通过流式细胞术进行分析以检测、测量和分选两个不同的细胞群。在流式细胞术过程中多种荧光染料的使用被称为多色流式细胞术。在一些情况下，例如当相似标记的抗体识别不同细胞类型上的表位时，多色流式细胞术利用在一种或多种抗体上的同一种荧光染料。在流式细胞术方法中可以使用各种类型的荧光染料。例如，可以将通常为有机化合物或蛋白质的单荧光染料与结合剂缀合。在流式细胞术中使用的典型单荧光染料包括异硫氰酸荧光素(FITC)、R-藻红蛋白(R-PE)、别藻蓝蛋白(APC)和多甲藻素叶绿素蛋白复合物(PerCP)。还可以将其中两种荧光染料彼此附接的串联荧光染料与抗体缀合。串联荧光染料包括荧光染料供体和荧光染料受体。当供体被光激发时，它发出能量，所述能量被转移到受体上。第二荧光染料达到激发态，并产生可检测和测量的荧光发射。典型的供体包括PerCP、R-PE和APC，而典型的受体包括ALEXA荧光染料和花菁荧光染料。串联荧光染料通常提供比单荧光染料更高的亮度。然而，串联荧光染料通常是光敏感的，在细胞标记和流式细胞术分析过程中需要减少或最小化曝光量。多甲藻素叶绿素蛋白复合物(PerCP)是类胡萝卜素-蛋白复合物，最早在100年前被公开。PerCP的多甲藻素分子吸收蓝-绿波长(470至550nm)的光，并以高效率将能量转移至叶绿素分子。PerCP具有极高的消光系数、高的量子效率和大的斯托克斯位移。PerCP蛋白通常用于荧光免疫标记应用，比如荧光激活细胞分选(FACS)。PerCP和相关缀合物的特性使这些复合物可用于具有FITC、PE和其他荧光染料的多色分析。PerCP可以单独使用，也可用于串联荧光染料中。例如，可以将PerCP附接到花菁(例如Cy5.5)上，以形成PerCP-Cy串联荧光染料(例如PerCP-Cy5.5)。可以用标准的488nm激光激发PerCP的花菁串联(例如PerCP-Cy5.5)。例如，PerCP-Cy5.5在694nm波长处具有最大的荧光发射，而在677nm波长处具有非缀合的PerCP。对于免疫表型分析，可以将PerCP-Cy模块连接至与期望靶标特异性地结合的抗体。然而，使用PerCP荧光染料的缺点是其固有的不稳定性。通常将PerCP制剂储存在低于8℃的温度下，以保持稳定性。使用PerCP制剂或运输PerCP制剂时必须格外小心，因为所述制剂在较高温度下会分解。如果PerCP制剂运输延迟，或者意外地未冷藏PerCP制剂，导致温度升高，则PerCP荧光染料迅速衰减。由于PerCP荧光染料是以已知和标记浓度的液体制剂形式提供给客户的，因此任何荧光染料的降解都可能导致实验误差。这种情况使得需要新的批次，可能会引起医学诊断或预后延迟。因此，需要用于增强PerCP荧光染料的稳定性的新制剂和方法。理想地，这样的制剂和方法在流式细胞术分析中增强PerCP荧光染料的稳定性，而不干扰荧光染料的荧光性质。专利技术概述在一个实施方案中，本公开提供了稳定的制剂。所述稳定的制剂包含(a)至少一种包含结合模块和缀合的荧光染料的带标记的结合剂，和(b)非缀合的多甲藻素叶绿素蛋白复合物(PerCP)或其片段或变体，其中所述制剂具有至少约0.1μg/mL的总PerCP浓度。在一些实施方案中，缀合的荧光染料是PerCP串联荧光染料。在一些实施方案中，缀合的荧光染料是多甲藻素叶绿素蛋白花菁5.5(PerCP-Cy5.5)。在一些实施方案中，缀合的荧光染料是PerCP。在一些实施方案中，非缀合的PerCP或其片段或变体的浓度为至少约50μg/mL。在一些实施方案中，所述抗体是抗CD19抗体、抗CD34抗体或抗MPO抗体。在一些实施方案中，非缀合的PerCP或其片段或变体与带标记的结合剂的比率为至少约2:1。在一些实施方案中，非缀合的PerCP是全长PerCP。在一些实施方案中，非缀合的PerCP或其片段或变体是未附接或未结合至另一化学模块的多甲藻素叶绿素蛋白复合物。在一些实施方案中，该制剂与不具有非缀合的PerCP或其片段或变体的制剂相比具有更好的稳定性。在一些实施方案中，所述制剂的荧光强度在约20℃的温度下经过约1天至约180天变化约25％或更小。在一些实施方案中，当制剂的温度升高至少约10℃时，在非缀合的PerCP或其片段或变体存在下，带标记的结合剂具有约25％或更小的荧光强度变化。在另一个实施方案中，本公开提供了使用流式细胞术分析样品的方法。所述方法包括使包含细胞的样品与包含(a)至少一种包含结合模块和缀合的荧光染料的带标记的结合剂，和(b)非缀合的多甲藻素叶绿素蛋白复合物(PerCP)或其片段或变体的制剂接触，从而形成分析样品，并使用流式细胞术分析所述分析样品。所述制剂具有至少约0.1μg/mL的总PerCP浓度。在一些实施方案中，缀合的荧光染料是PerCP串联荧光染料。在一些实施方案中，缀合的荧光染料是多甲藻素叶绿素蛋白花菁5.5(PerCP-Cy5.5)。在一些实施方案中，缀合的荧光染料是PerCP。在一些实施方案中，所述制剂具有至少约75μg/mL的PerCP或其片段或变体总浓度。在一些实施方案中，所述方法进一步包括基于荧光染料的荧光发射来分选细胞组合物中的细胞。在一些实施方案中，所述抗体是抗CD19抗体、抗CD34抗体或抗MPO抗体。在一些实施方案中，所述细胞是人血细胞。在一些实施方案中，所述接触在至少约20℃的温度下进行。在另一个实施方案中，本公开提供了用于在流式细胞仪中分析细胞的试剂盒。所述试剂盒包含(a)至少一种包含结合模块和缀合的荧光染料的带标记的结合剂，和(b)非缀合的多甲藻素叶绿素蛋白复合物(PerCP)或其片段或变体。在一些实施方案中，缀合的荧光染料是多甲藻素叶绿素蛋白花菁5.5(P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稳定的制剂，其包含(a)至少一种包含结合模块和缀合的荧光染料的带标记的结合剂，和(b)非缀合的多甲藻素叶绿素蛋白复合物(PerCP)或其片段或变体，其中所述制剂具有至少约0.1μg/mL的总PerCP浓度。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170831 US 62/552,5571.一种稳定的制剂，其包含(a)至少一种包含结合模块和缀合的荧光染料的带标记的结合剂，和(b)非缀合的多甲藻素叶绿素蛋白复合物(PerCP)或其片段或变体，其中所述制剂具有至少约0.1μg/mL的总PerCP浓度。


2.权利要求1的制剂，其中所述缀合的荧光染料是PerCP串联荧光染料。


3.权利要求2的制剂，其中所述缀合的荧光染料是多甲藻素叶绿素蛋白花菁5.5(PerCP-Cy5.5)。


4.权利要求1的制剂，其中所述缀合的荧光染料是PerCP。


5.权利要求1-4中任一项的制剂，其中所述非缀合的PerCP或其片段或变体的浓度为至少约50μg/mL。


6.权利要求1-5中任一项的制剂，其中所述带标记的结合剂包含抗CD19抗体、抗CD34抗体或抗MPO抗体。


7.权利要求1-6中任一项的制剂，其中非缀合的PerCP或其片段或变体与带标记的结合剂的比率为至少约2:1。


8.权利要求1-7中任一项的制剂，其中所述非缀合的PerCP是全长PerCP。


9.权利要求1-8中任一项的制剂，其中所述非缀合的PerCP或其片段或变体是未附接且未结合至另一化学模块的多甲藻素叶绿素蛋白复合物。


10.权利要求1-9中任一项的制剂，其中，与不具有非缀合的PerCP或其片段或变体的制剂相比，所述制剂具有更高的稳定性。


11.权利要求1-10中任一项的制剂，其中所述制剂的荧光强度在约20℃的温度下经过约1天至约180天变化约25％或更小。


12.权利要求1-11中任一项的制剂，其中在非缀合的PerCP或其片段或变体存在下，当制剂的温度...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·M·詹森，T·B·雅各布森，J·奎纳乌，
申请(专利权)人：安捷伦科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US